Ad-HBx的构建及在肾小球足细胞系的表达

Ad-HBx的构建及在肾小球足细胞系的表达
张瑜;周建华
【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2009(038)002
【摘要】目的构建携带HBx基因的非复制型重组腺病毒载体,并感染小鼠肾小球足细胞株MPC5,使目的基因HBx在该细胞株有效表达.方法由质粒PCI-neo-HBx 中扩增目的基因HBx.插入至pShuttle-CMV(-)穿梭质粒中,而后再与pAdxsi质粒酶切连接为重组腺病毒质粒pAd-HBx,经酶切及测序鉴定正确后,以Pac Ⅰ酶切线性化转染293细胞进行包装扩增得到Ad-HBx.以Ad-HBx感染MPC5细
胞,Western blot检测感染后目的蛋白HBx的表达.结果重组腺病毒载体经限制性内切酶酶切、电泳和基因测序鉴定,证实Ad-HBx构建成功;当MOI=50时.MPC5细胞即可100%被重组腺病毒感染,且持续至感染后72 h仍有较强水平的表达;感染Ad-HBx的MPC5细胞可稳定表达HBx蛋白.结论成功构建了Ad-HBx,并能在MPC5细胞中稳定表达,为进一步研究HBx基因在乙型肝炎病毒相关性肾炎发病中的作用奠定了基础.
【总页数】4页(P213-216)
【作者】张瑜;周建华
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R692.3
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