EDU实验步骤

EDU实验步骤
EdU细胞增殖成像是一种广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制等方面的研究的方法。

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其炔烃基团在天然化合物
中很少见。

EdU能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶渗入正在
合成的DNA分子中，通过基于Apollo®荧光染料与EdU的特
异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性。

这种方法
尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及药物的细胞
增殖筛选实验。

以96孔板和A549贴壁细胞为例，进行荧光显微镜检测。

首先，取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于
96孔板中，培养至正常生长阶段。

然后，进行药物处理。

客
户可以根据实验需要进行各种药物处理。

接下来进行EdU标记。

首先，用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试
剂A)，制备适量50μM EdU培养基。

需要注意的是，EdU浓
度与孵育时间相关，短时间孵育(24h)宜采用低浓度(1~10μM)。

如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例。

配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。

然后，每孔
加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基。

最佳孵
育时间与细胞周期相关。

大多数细胞系均可采用2小时孵育时间。

EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育
时间内的营养物质持续供给。

接下来，进行PBS清洗细胞
1~2次，每次5分钟。

清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定。

贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。

细胞系的细胞周期和孵育时间见表2.
表1为EdU培养基及染色反应液的使用量参考，其中96
孔板通常为贴壁细胞采用的培养，EdU培养基与染色反应液
用量以覆盖细胞为宜。

悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。

本文介绍了在细胞实验中使用EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）的方法。

EdU是一种新型的细胞增殖标记物，相比于传
统的BrdU（5-溴-2'-脱氧尿苷），EdU具有更高的检测灵敏度
和更短的实验时间。

在该实验中，EdU的浓度和孵育时间是
两个关键因素。

根据细胞周期的不同，孵育时间一般为细胞周期的1/10至1/5.同时，细胞培养基、温度、湿度、光线等因
素也会影响细胞增殖，因此具体实验中的细胞周期可能会有所变化。

表格中列出了不同细胞系使用EdU的浓度和孵育时间
的参考值。

值得注意的是，不同的研究可能会有不同的最佳浓度和孵育时间。

在该实验中，不同类型的细胞系使用EdU的浓度和孵育时间有所不同。

例如，人胚胎细胞和酵母细胞的孵育时间分别为30分钟和3小时，而人神经细胞则需要5天的孵育时间。

此外，孵育时间越长，细胞增殖数量就越多。

因此，在实验设计中需要根据具体情况选择合适的孵育时间和浓度。

总之，EdU是一种新型的细胞增殖标记物，在细胞实验中具有广泛的应用前景。

通过合理选择孵育时间和浓度，可以准确地检测细胞增殖情况，为细胞生物学和医学研究提供有力的支持。

客户可以选择进行其他染色步骤，否则每个孔需要加入100 μL PBS并保存待用。

如果需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染色，客户可以根据实验需要自备染料，但需要注意染料兼容性，请参照表4.建议在染色完成后立即进行观测，如果条件限制，请避光并在4℃湿润的条件下保存待测，但不应超过3天。

在调试仪器时，请将曝光时间调整为30ms左右，尽量不要超过1秒。

表5列出了配套染料的相关波长信息，其中包括C、C、C、Apollo®567、Apollo®643、Hoechst 等。

需要注意的是，荧光显微镜宜采用Hoechst 及Apollo®567进行DNA复制活性检测。