08 01金若敏中药注射剂过敏反应研究进展

过敏反应发生时间： 绝大多数均在首次用药的当日发生，一般于
用药后2～30min内发生率最高
过敏反应原因分析---人群样本数扩大
绿原酸 PH值变化 不合理用药
合并用药、超适应 证用药、超剂量给 药、超浓度给药等
黄芩主要成分黄芩苷 在PH值较低时易析出 ，双黄连注射液加到 5%葡萄糖注射液中可 使其PH值降低，致使 不溶性微粒增多
与Wistar大鼠相比，BN大鼠用于I型超敏反应的检测更 为灵敏，血压和血清总IgE、特异性IgE、组胺及类胰 蛋白酶浓度等可作为I型超敏反应重要的检测指标
敏感动物品系、敏感指标检测
郭姗姗等，比较了BN大鼠和豚鼠在清开灵致速发型过敏
反应中的差异，结果显示BN 大鼠过敏反应发生率及过敏
反应程度均明显高于豚鼠, BN 大鼠组胺释放率亦高于豚 鼠；肺组织、气管的病变率和病变程度, BN 大鼠和豚鼠 无明显差异
方法检测血清
总IgE水平
方法检测血清
总IgG、IgM
小
结-----为研究四种品系大鼠的遗传背景 提 供了实验数据支持
1
未致敏状态下,BN大鼠为Th2偏移型大鼠品系， Wistar大鼠为Th1偏移型大鼠品系，F344大鼠和 SD大鼠Th1/Th2偏移不明显
2
未致敏状态下,BN大鼠血清总IgE、IgM 水平远远高于F344、SD、Wistar大鼠
三
实验研究
提高过敏反应检测试验方法的灵敏度
过敏反应敏感指标的检测 类过敏反应研究
对过敏原的研究
提高过敏 检测灵敏 度研究
敏感动物品系 筛选研究
豚鼠、大鼠、小鼠
研究方法学
比较研究
不同品系的大鼠在未致敏时，其体内细胞因子微 环境尤其是Th1/Th2细胞因子分布格局可能已 经存在着某些差异，而这些差异可能最终影响了 不同品系大鼠在过敏反应研究中的表现
（2）被动致敏和激发：另取动物背部脱毛，消毒，皮内 注射各对应组抗血清
被动致敏24或48小时后，各组尾静脉注射与致敏 剂量相同的含0.5－1％伊文思兰染料的供试品，进行 激发。 7.结果观察 30分钟后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，测 量皮肤内层的斑点大小并拍摄照片
或用比色测定法，将蓝色斑块剪下，剪碎后加入丙 酮-生理盐水（7：3）混合液3ml，浸泡后次日离心， 在610nm波长处测定其吸光度。计算出变化百分率
中药注射剂的不良反应在临床上主要以过敏反应 和过敏性休克为主，此外还有一些类过敏反应。 这些药品在新药报批前都做过安全性评价，其中 包括免疫毒性试验。造成这种临床前中药注射剂 的免疫毒性安全性评价的高阴性率与临床大量过 敏反应结果出现的不一致性，可能存在着多方面 的原因，但也与我国现有药物安全评价体系中免 疫毒性评价试验体系的不完备性有密切关系。
检测指标---蓝斑直径
结
果
不加佐剂致敏的大鼠品系同种PCA试验 (mm) BN F344 SD Wistar
OVA 4.67±1.03** 0 0 3.83±6.34 TCS 22.50±2.17** 15.33±2.42** 33.17±12.02** 10.33±5.28**
加佐剂致敏的大鼠品系同种PCA试验 (mm) BN F344 SD Wistar
5
被动致敏和激发
5 对照
阴性对照组给予同体积溶媒和或赋形剂。 给药剂量、容量、途径、次 数等同受试物。 阳性对照组给予牛血清白蛋白或卵白蛋白等。 6.操作步骤 （1） 抗体制备：皮下、静脉或腹腔注射，皮下注射(3-5次）， 不加佐剂：直接注射供试品 或加佐剂：1：1弗氏完全佐剂（第1次给药）或不完全佐剂（第2、3 次给药）的供试品。 末次致敏后10－14天左右采血，2000转/分离心10分钟，分离血清， －20°C保存，2周内备用。
排名前三：清开 灵、双黄连、 鱼腥草 几乎涵盖所有
发生率高
1975－2001年 51种 2600例
注射剂品种 涉及品种较多
2/3
表现形式多样 涉及多系统、 多器官，其中 以过敏性皮疹 最为常见
化学成分、结 构复杂、检 测方法不够 灵敏
过敏原不明
一.临床近期报道
双黄连注射液(黄连黄芩金银花）
2009 年1 月1 日～2009 年12 月31 日， 广西壮族自治区ADR监测中心收集到818 例双黄连注射剂ADR/ADE报告：
中药注射剂过敏反应研究进展
金若敏 上海中医药大学药物安全评价研究中心
2010年7月
概 况
中 药 注 射 剂 发 展 历 程
2007年
《中药、天然药物注射剂基本技术要求》颁布
2006年
“鱼腥草注射液事件”暴 发 1985年
《药品管理法》颁布
1940年
第一支中药注射剂诞生
＞30% ＞200亿 4亿
1999-2006年，中药 注射剂年均增长率
3
未致敏状态下,血清总IgG水平： SD大鼠>BN大鼠>F344大鼠、Wistar大鼠
PCA试验中关于阳性药选择的问题 卵蛋白
4.7%
64.7%
30.6%
天花粉蛋白
牛血清白蛋白
从 方 法 学 研 究 上 比 较品系的差异
1. 加与不加佐剂大鼠品系的比较研究 致敏液： ①称取OVA加生理盐水配成10mg/ml浓度成 无佐剂致敏液； ②称取OVA加生理盐水配成20mg/ml浓度， 与Al(OH)3凝胶佐剂按体积1：1混合成加佐 剂致敏液。 2. 阳性药的比较研究
不良反应事件 818例
其中，过敏反应 733例
(参考文献：唐春燕，曾立威，林昊等，广西2009 年双黄连注射剂不良反应/不良事件 报告分析，中国药房，2010,21（16）：1501－1504）
双黄连注射液
过敏反应症状：
以皮肤及附件损害为主（733例，68.83%）， 表现为皮疹、水疱疹、瘙痒、红斑疹、斑丘疹、 血管神经性水肿、荨麻疹， 严重者（29例，3.55%）可出现全身损害，表现 为过敏性休克，寒战、高热、多汗、咽喉水肿等
敏感动物品系、敏感指标检测
李中港等，比较了BN大鼠和Wistar大鼠在I型超敏反应
中的敏感性，结果，BN大鼠在卵白蛋白10，20和
4Oμg· kg－1 下血清总IgE和特异性IgE显著增加，血 压下降，血清组胺和类胰蛋白酶浓度增加；Wistar大
鼠仅在卵白蛋白40μg· kg－1组出现上述变化。提示，
中药注射剂产 业年销售额 中药注射剂每 年使用人次
109种
列入国家标准的 中药注射剂
关键词： 限制词： 不良反应
1529篇
1070篇
356篇
中药注射剂
CNKI： 2007年－2010年
限制词： 过敏反应
双黄连注射液
清开灵注射液
过敏反应 发生率较 高的品种
参麦注射液
穿琥宁注射液
血塞通注射液
中药注射剂不良反应特点
2.两次攻击总过敏反应发生率BN 大鼠组明显高 于豚鼠组, 分别52.78%和16.67%; 两次攻击 总的过敏反应程度BN 大鼠组明显高于豚鼠组
3.清开灵注射液攻击后，BN 大鼠和豚鼠各组血 清、肺和气管中的组胺含量均明显升高, 与正常 对照组比较均具有显著性差异,但 BN 大鼠各组 的组胺释放率均高于豚鼠。 腹腔注射BN 大鼠的血清、肺、气管各组的组胺 含量的平均值分别比常对照组增加83.10%、 85.55%和77.63%。 静脉注射豚鼠血清、肺、气管各组的组胺含量的 平均值分别比正常对照组增加35.51%, 26.34%和29.57%
过敏反应原因分析
1
制剂工艺中以胶态存在的杂质
2
有效成分和杂质成分含量高低 无法区分
3
制剂中的成分变化
二.中药注射剂安全性评价
除常规试验外，注射剂还需进行如下试验：
刺激性试验 过敏性试验
溶血性试验
安全性评价—过敏试验
中药注射剂 非临床ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ全 评价内容
主动全身 过敏试验 (ASA)
被动皮肤 过敏试验 (PCA)
《药物研究技术指导原则（2005年）》要求
原理：
药物
主动全身 过敏试验 (ASA)
机体 抗体（IgE） 药物再次接触机体 形成抗原抗体复合物
刺激肥大细胞及嗜碱性粒细胞 脱颗粒
过敏
方
1 动物：豚鼠
法
2 分组：阴性、阳性对照组（牛血清白蛋白或卵白蛋白等） 和受试物组。每组不少于6只
3 给药剂量 致敏剂量：低剂量组给予临床最大剂量
1 与过敏反应相关的细胞因子 TH1: IL－12、IFN－γ、IL－2、IL－18 TH2: IL－4、IL－5、IL－13、IL－10
2 血清抗体：IgE 、IgG、IgM水平
实验方法
1
采用Realtime PCR方法 检测全血、脾脏、 肺组织中8种细 胞因子的 mRNA表达
2
采用放射免疫
3
采用ELISA
OVA 47.3±5.72** 11.6±3.61** TCS 46.1±2.23** 12.6±3.27** 5.70±4.81* 14.3±2.42** 17.9±3.84** 6.25±3.48*
不同动物品系对阳性对照药敏感性的差异性研究
采用BN、F344、SD、Wistar四种品系大鼠进行被
金银花主要有效成分 绿原酸可能是一种致 敏原 ，其含量限度 的制定未能真正起到 控制质量并体现其疗 效及安全性的作用
清开灵注射液
（胆酸珍珠母猪去氧胆酸栀子水牛角板蓝根黄芩苷金银花）
以贵州省不良反应监测中心数据 库中2003～2008年的857例清开灵 注射液不良反应病例报告统计分 析为例：
857名患者中，单独使 用的有646例(75．38 ％ )，合并 使用的211例(24．62 ％ )，提示：单独使
用便可引起不 良反应
过敏反应-皮肤及附件损害居首位，占35.59 ％ 全身性损害居次位， 占48.66％
过敏反应原因分析
1
制剂工艺中杂质残留
2
水牛角、胆汁等多种组成物质 可诱发变态反应
3
制剂中的成分变化
刺五加注射液
国家药品不良反应监测中心(国家中心)数据库中
刺五加注射液不良反应／事件报告：
病例数：2452例 过敏反应症状：皮肤及附件损害为主（表现同上），1137例，占 总病例的46.60%； 其次，用药局部血管损害(静脉刺激，静脉炎，局部红肿、麻木、 瘙痒、疼痛)，占l2．25％；发热伴全身性损害(发热、乏力、盗 汗、多汗、不适、寒战、畏寒、过敏性休克、水肿)，占0.66％。
动皮肤过敏试验，结果显示不同品系大鼠对阳性
对照药卵蛋白（5mg/只)、天花粉蛋白(0.9mg/只）
的敏感性存在差异性，BN大鼠最为敏感，提示进
行被动皮肤过敏试验时应重视动物品系及阳性药
物的选择
结
果
品系比较 对OVA的敏感性排列为： BN＞Wistar＞F344、SD 对TCS的敏感性排列为： BN＞ SD ＞ F344 ＞Wistar 加入Al(OH)3凝胶佐剂后，可显著提高OVA、 TCS对四种品系大鼠的PCA反应阳性率。
IL－4 IL－10 IL－13 IL-5 体液免疫
BN
Th1型细胞因子：IL－12、 IFN－γ、IL－2、IL－18
F344
Th2型细胞因子：IL－4、 IL－5、IL－13、IL－10
SD
Wistar
血清抗体：IgE、IgG、IgM
大 鼠 品 系
研 究
选用四种品系大鼠未致敏状态下进行比较研究
主动全身过敏反应：
以清开灵注射液为致敏原, 直接对BN 大鼠和豚
鼠进行致敏和攻击后, 观察过敏反应症状, 采用
ELISA 法测量血清和组织中的组胺含量, HE 染 色法光镜下观察肺组织和气管病理改变。
结果显示 1.清开灵注射液攻击后, BN 大鼠过敏反应症状 主要包括搔鼻、喷嚏、呼吸急促等, 多在攻击后 10 min内出现, 10～15 min 后缓解
高剂量组给予低剂量的数倍量。 激发剂量：一般为致敏剂量的2～5倍。 4 给药途径及次数 致敏：如腹腔、静脉或皮下注射等，隔日1次，共3次 激发：末次注射后第10～14日一次快速静脉内给药
5 结果与分析 致敏期间：每日观察动物症状并记录。 给药前测定动物体重。 激发：静脉注射后即刻至30分钟，详细观察每 只动物的反应，症状的出现及消失时间。 最长观察3小时， 计算过敏反应发生率 （过敏反应阳性动物数/该组动物总数×100％）
研究显示：不同遗传
背景的动物对同样的物
质反应性存在很大的差
异，而机体内Th1/Th2细 胞因子分布格局出现偏 移是产生差异的重要原 因之一
Th0
IL-2 IFN－γ GM－CSF等
IL－4 IL－5 IL－10等
Th1
Th2 细胞因子微环境对 Th1/Th2分化及细胞增 殖起到关键性作用！
IL-2 IFN－γ 细胞免疫
原理：
药物
被动皮肤 过敏试验 (PCA)
致敏机体 抗体（IgE） 含抗体血清注射至正常动物皮内
药物（内加染色剂）激发
过敏(皮肤出现蓝斑）
方
1 动物：大鼠、小鼠或豚鼠
法
2
3
给药剂量
致敏剂量同激发剂量 给药途径 致敏途径：皮下、腹腔或静脉注射等， 激发途径：一次快速尾静脉内给药。
4
给药 致敏：隔日一次，共3-5次，末次注射后第10～14日 采血，制备抗体。