细胞培养生产药物

一、两相培养技术 两相培养技术是在培养体系中加入水溶性或脂溶 性的有机物, 或者是具有吸附作用的多聚化合物(如 大孔树脂 等) ,使培养体系形成上、下两相,细胞在水 相中 生长与合成次生物质,然后分泌出来转移到有 机 相中。这样不仅减少了产物的反馈抑制作用,使 产物含量提高,而且通过有机相的不断回收及循 环 使用,有可能实现植物细胞的连续培养,使成 本降低。
之长春花发状根培养生产长春碱
长春花简介

长春花，全草入药可止痛、 消炎、安眠、通便及利尿等。亦 有医者配伍入治疗癌症的复方， 作为药材中的一味，可能是考量 到它所具有的抗肿瘤成分。全株 具毒性需斟酌注意。误食后，会 造成白血球减少、血小板减少、 肌肉无力、四肢麻痹等症状。其 乳汁中所含生物碱，如长春花碱 和长春新碱（vincristine）， 被提炼出来作为多种癌症如白血 病、哈杰金氏症所用的化学治疗 药物。

3、其他作用 总碱对离体子宫与肠管无兴奋作用，大剂量对离体 心脏有抑制作用，国外介绍子宫出血时可作止血剂， 其根可作流产用。其所有生物碱部分均有不同程度 的抗菌作用。

培养技术
这些年来植物细胞培养技 术主要致力于高 产细胞株 选育方法、悬浮培养技术、 多级培养和 固定化细胞技 术、培养工艺优化控制、 生物反应 器研制、下游纯 化技术等方面的研究,并取 得了 较大进展。
药理作用


1、抗肿瘤作用
从长春花植物中分离出的生物碱，多具抗肿瘤作用，其中以 长春碱、长春新碱最有价值，己应用于临床。两者化学结构 极相似，但抗瘤谱不尽相同，两药间无交叉抗药性。长春碱 主要用于何杰金氏病、绒毛膜癌；此外，对淋巴肉瘤、蕈样 霉菌病白血病、横纹肌软骨瘤、黑色素瘤、精母细胞瘤、网 织细胞肉瘤、癌（胸、肺、口腔、胃、结肠、直肠、卵巢、 颈部、子宫、膀胱、肾等部位）等的抗肿瘤作用还需进一步 肯定。
发展状况
目前大多数植物细胞大规模培养生产药物距商 业化生产还有一定差距,主要是由于: (1) 植物细胞的 生长周期长,易污染。(2) 植物细胞对生物反应器的 设计装置要求较高。(3) 高产细胞株较难获得[8 ] 。 目前据报道只有20 多种植物的细胞培养物,其次生 产物含量超过原植物,原因被认为是培养细胞的形态 分化受到抑制,而大多数次生产物要在分化了的细胞 中产生。由于以上的问题,加上与之相比,直接提取 法成本很低,所以在很大程度上限制了大规模植物细 胞培养技术生产药物走上商业化生产的步伐。
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分离

对长春碱硫酸盐的分离常用薄层色谱法，柱色 谱法、高效逆流色谱法等。薄层色谱法的分离量太 少，常用来研究少量的样品制备或筛选柱色谱流动 相，不适合于大生产；柱色谱法分为一次过柱、两 次过柱和多次过柱，前者是目前大规模生产的方法， 缺点是产品纯度不够高。后两者者所得产品纯度较 高，但步骤烦琐、收率低，而且制备量也很少，也 不适于扩大制备；高效逆流色谱法可将长春碱和杂 质完全分离。
2、降压作用 总碱静脉注射，对麻醉猫、兔均有降压作用，血 压下降速度快，与萝芙木总碱制剂的缓慢降压不同， 且在降压同时伴有呼吸加深，幅度变大现象;切断迷 走神经或用阿托品不影响其降压效果。从长春花中 分离得针状或小棒状无色生物碱结晶、静脉注射， 对麻醉猫、犬、兔等均有显著降压作用，降压持续 约1小时后才恢复或接近原来水平；剂量大于 4mg/kg时，血压下降剧烈可致死亡，无快速耐受 现象，用阻断腹主动脉血流，引起急性肾原性高血 压，生物碱不但能取消其l压作用，并且能使血压降 至原水平之下。总碱还有扩张冠状血管的作用（属 于解痉性神经节阻断剂）。
二、发状根培养技术和冠瘿组织细胞培养技术。 发状根和冠瘿组织在离体培养时都具有激素自主、 增殖较常规细胞培养快、次生代谢物含量一般比悬 浮培养 细胞高、且能合成某些悬浮培养细胞不能合 成的次生代谢物以及能引入外源基因表达等特点,从 而引起人们利用它们生产药用次生代谢物的重视。 长春花发状根培养生产长春碱就是用这种技术。