HLA和ABO血型配型
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➢限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析：最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术 ➢PCR-RFLP分型法：对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行 酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加
2. PCR-SSO分型法
第三节 HLA分型方法
血清学分型法
➢应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借 助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
➢ 操作简便易行、 ➢ 节约试剂、结果可靠、重复性好 ➢ 无需特殊设备
➢ 耗时长 ➢ 不同批号抗血清结果常有不同
用于HLA分型的微量细胞毒试 验
血清学分型法
死（着染）细胞（%） 0～10 11～20 21～50 51～80 >80
记分 1 2 4 6 8 0
结果判断 阴性
可疑阴性 弱阳性 阳性 强阳性 未试验或不能读数
细胞学分型法
以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称混 合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本技术 的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。
➢T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。 ➢B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。 ➢急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞
和体液免疫均有关系。 ➢非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。 ➢受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生
母
A1
A3
A9
A2
Cw1
Cw4
Cw3
Cw2
B5
B8
B7
B13
➢ HLA是人体多态性最丰富
的基因系统。据1999年的统 计，HLA复合物等位基因总 数已达到1031个，其中
HLA-B等位基因有301个
第二节 排斥反应的种类及发生机制
移植排斥反应（transplantation rejection）
② 间接途径 （indirect path）:通过受者体内的抗原提呈细胞对 具有同种异基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的移植物实质细胞的识别。 无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激 信号，有助于触发淋巴细胞的活化
同种移植排斥反应的发生机制
3. 慢性排斥反应
慢性排斥反应的介导因素：
➢处理：重新移植 ➢预防：ABO血型配型、细胞Fra Baidu bibliotek实验
2. 急性排斥反应
➢ 体液性排斥 抗体激活补体，并有CD4+T 细胞参与，导致急性血管炎
➢ 细胞性排斥 CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用， 导致急性间质炎。
➢ 处理 使用免疫抑制剂
在急性排斥反应中的两条抗原提呈途径： ① 直接途径（direct path）:残留于供者移植物内的抗原提呈细 胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这 种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含 的HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子
第二十八章 移植免疫及其免疫检测
概述
移植（transplantation）:将健康细胞、组织或器 官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以 替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代 医疗手段。
移植物（graft） 供 体（donor） 受 体（recipient）或宿主（host）
移植的类型
➢针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或 受者机体损害的过程。
分类：
➢ 超急性排斥反应 ➢ 急性排斥反应 ➢ 慢性排斥反应
1.超急性排斥反应
➢机制： 受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活
补体和凝血系统,导致血管内凝血。 预存抗体来源： 1、供受者之间ABO 血型不合； 2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植。
序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO） 是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜， 进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行 杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。 分类： ➢斑点或印渍法：用扩增的待测DNA印渍或点至固相支持物，再与探针行杂 交，利于大量标本分型 ➢反向斑点或印渍法：将已知DNA印渍或点至固相支持物，然后与扩增的待 测DNA（预先标记）杂交，用于少量标本分型
2．阳性分型法
2.双向MLC
➢ 遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于 两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双 向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是 反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过 形态法计数转化细胞 。
分子生物学分型法
1. RFLP与PCR-RFLP分型法
临床特征：
➢对免疫抑制疗法不敏感 ➢无特异性治疗方法， ➢最终需要重新进行器官移植
4. 移植物抗宿主反应
➢定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者 细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗 宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。 ➢发生机制：T细胞起主要作用
IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等
根据移植物来源
自体移植 同系移植
同种异体移植 异种移植
根据移植部位
原位移植 异位移植
移植物种类
器官移植 支架组织移植
细胞移植
组织器官移植种类和命名
移植名称
自体移植
供者、受者关系
举例
同一个体
自体断肢再植，自体皮片移植
同系或同基因移植 同种异基因移植 异种移植
同系或同基因 的个体间
人的单卵双生子间的器官移植 同品系小鼠的皮片移植
1.单向MLC
原理：将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失 去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞 为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用 3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。
根据选用的刺激细胞类型分为： 1．阴性分型法
同种不同基因 人与人之间的肾移植
的个体间
不同品系小鼠间的皮片移植
异种动物间
狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗
第一节 引起排斥反应的靶抗原
主要组织相容性抗原（MHC分子）
1 主要组织相容性抗原
人— HLA
鼠— H-2
遗传特征：
➢ 单倍型遗传
➢ 高度多态性
2 次要组织相容性抗原
HLA的遗传特征
父
2. PCR-SSO分型法
第三节 HLA分型方法
血清学分型法
➢应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借 助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
➢ 操作简便易行、 ➢ 节约试剂、结果可靠、重复性好 ➢ 无需特殊设备
➢ 耗时长 ➢ 不同批号抗血清结果常有不同
用于HLA分型的微量细胞毒试 验
血清学分型法
死（着染）细胞（%） 0～10 11～20 21～50 51～80 >80
记分 1 2 4 6 8 0
结果判断 阴性
可疑阴性 弱阳性 阳性 强阳性 未试验或不能读数
细胞学分型法
以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称混 合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本技术 的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。
➢T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。 ➢B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。 ➢急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞
和体液免疫均有关系。 ➢非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。 ➢受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生
母
A1
A3
A9
A2
Cw1
Cw4
Cw3
Cw2
B5
B8
B7
B13
➢ HLA是人体多态性最丰富
的基因系统。据1999年的统 计，HLA复合物等位基因总 数已达到1031个，其中
HLA-B等位基因有301个
第二节 排斥反应的种类及发生机制
移植排斥反应（transplantation rejection）
② 间接途径 （indirect path）:通过受者体内的抗原提呈细胞对 具有同种异基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的移植物实质细胞的识别。 无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激 信号，有助于触发淋巴细胞的活化
同种移植排斥反应的发生机制
3. 慢性排斥反应
慢性排斥反应的介导因素：
➢处理：重新移植 ➢预防：ABO血型配型、细胞Fra Baidu bibliotek实验
2. 急性排斥反应
➢ 体液性排斥 抗体激活补体，并有CD4+T 细胞参与，导致急性血管炎
➢ 细胞性排斥 CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用， 导致急性间质炎。
➢ 处理 使用免疫抑制剂
在急性排斥反应中的两条抗原提呈途径： ① 直接途径（direct path）:残留于供者移植物内的抗原提呈细 胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这 种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含 的HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子
第二十八章 移植免疫及其免疫检测
概述
移植（transplantation）:将健康细胞、组织或器 官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以 替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代 医疗手段。
移植物（graft） 供 体（donor） 受 体（recipient）或宿主（host）
移植的类型
➢针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或 受者机体损害的过程。
分类：
➢ 超急性排斥反应 ➢ 急性排斥反应 ➢ 慢性排斥反应
1.超急性排斥反应
➢机制： 受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活
补体和凝血系统,导致血管内凝血。 预存抗体来源： 1、供受者之间ABO 血型不合； 2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植。
序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO） 是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜， 进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行 杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。 分类： ➢斑点或印渍法：用扩增的待测DNA印渍或点至固相支持物，再与探针行杂 交，利于大量标本分型 ➢反向斑点或印渍法：将已知DNA印渍或点至固相支持物，然后与扩增的待 测DNA（预先标记）杂交，用于少量标本分型
2．阳性分型法
2.双向MLC
➢ 遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于 两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双 向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是 反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过 形态法计数转化细胞 。
分子生物学分型法
1. RFLP与PCR-RFLP分型法
临床特征：
➢对免疫抑制疗法不敏感 ➢无特异性治疗方法， ➢最终需要重新进行器官移植
4. 移植物抗宿主反应
➢定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者 细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗 宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。 ➢发生机制：T细胞起主要作用
IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等
根据移植物来源
自体移植 同系移植
同种异体移植 异种移植
根据移植部位
原位移植 异位移植
移植物种类
器官移植 支架组织移植
细胞移植
组织器官移植种类和命名
移植名称
自体移植
供者、受者关系
举例
同一个体
自体断肢再植，自体皮片移植
同系或同基因移植 同种异基因移植 异种移植
同系或同基因 的个体间
人的单卵双生子间的器官移植 同品系小鼠的皮片移植
1.单向MLC
原理：将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失 去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞 为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用 3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。
根据选用的刺激细胞类型分为： 1．阴性分型法
同种不同基因 人与人之间的肾移植
的个体间
不同品系小鼠间的皮片移植
异种动物间
狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗
第一节 引起排斥反应的靶抗原
主要组织相容性抗原（MHC分子）
1 主要组织相容性抗原
人— HLA
鼠— H-2
遗传特征：
➢ 单倍型遗传
➢ 高度多态性
2 次要组织相容性抗原
HLA的遗传特征
父