猪源益生芽孢杆菌抑制大肠杆菌的研究
猪源益生枯草芽孢杆菌的分离鉴定及培养条件优化
猪源益生枯草芽孢杆菌的分离鉴定及培养条件优化魏姗姗;马红霞;高云航;幺乃全;徐凤宇;李茂辉【摘要】采集健康仔猪肠道，从空肠黏膜分离到23株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有拮抗作用的芽孢杆菌，复筛获得5株拮抗活性较高者；从中筛选出可耐受胆盐、人工胃液和肠液的菌株JN-16，分子生物学和部分生化试验鉴定结果表明：该菌为枯草芽孢杆菌。
对菌株JN-16进行抑菌培养条件优化，结果表明，以葡萄糖为碳源、大豆蛋白胨为氮源、pH为6.5的培养基在33℃或37℃下，培养24 h 时，发酵液的抑菌效果最强。
该菌株可用作饲料添加剂，为微生态制剂的研发奠定了基础。
%A total of 23 Bacillus strains antagonistic to Escherichia coli and Staphylococcus aureus were isolated from jejunal mucosa of healthy piglets,and 5 of them possessed higher antagonistic activity.The strain named JN-16 was isolat-ed and tolerant to bile salts,artificial intestinal juice and gastric juice.The results of molecular biology and biochemical ex-periments demonstrated that JN-16 was Bacillus subtilis.The results of antibacterial experiments showed that the antibacte-rial activity of broth was strongest,when the JN-16 was cultured at 33 ℃ or 37 ℃ for 24 h using glucose as carbon source,soy peptone as nitrogen source,pH=6.5.This strain could be used as feed additives,and laid foundation for devel-opment of probiotics.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】6页(P21-25,28)【关键词】枯草芽孢杆菌;生物学特性;鉴定;条件优化【作者】魏姗姗;马红霞;高云航;幺乃全;徐凤宇;李茂辉【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;吉林正大实业有限公司，吉林长春 130052【正文语种】中文【中图分类】S816.17益生芽孢杆菌可产生脂肽、肽、磷脂、多烯、氨基酸、核酸等多种抑菌物质（Tan等，2013；Chandraleka 和 Ramya，2011；吕艳艳等，2011），具有广谱抑菌活性，且无毒、无副作用、无残留、无耐药性（Jacquet和Grimal，2012；Huyghebaet等，2011）。
益生菌对猪肠道微生物的调节及其对生产性能的影响
王爱娜 ，冯 雪云
（１潍坊市经济学校 ，山东 潍坊 ． ２ １ １ ；２ 辛庄畜牧兽医站，山东 招 远 ６０ １ ． ２５０ ６ ４ １）
摘
要 ：在 畜牧 生产 中，益 生茵可以防治疾病 、促进健 康和提 高生产性能 。文章 就猪 肠道的微 生物 区系、
ｉ ｆ ｃｓｏ ｈ ｏ ｕ ｔ ｆ ｒ ｎ ｅ ｏ ｇ ｔ Ｅｆ ｔ ｎ ｔ ｅ Ｐｒ ｄ ｃｉ Ｐｅｒ ｍａ ｃ ｆＰｉｓ ｓ ｅ ｏｎ ｏ
Ｗ ＡＮＧ ｎ ＦＥＮＧ ｅ ｕ 。 Ａｉ ａ， Ｘｕ ｙ ｎ
（． ｉ ｎ ｃｎ ｍ ｃＣ ｌ ｇ ， ｉ ｎ ６ ０ Ｓ ａｄ ｎ ｈｎ ； １ Ｗｅ ａｇＥ ｏｏ ｉ ｏ ｅｅ Ｗｅｆ ｇ２ １ １， ｈｎ ｏ ｇＣ ｉａ ｆ ｌ ａ １
２ Ｘｉｚ ｕ ｎ ｎｍａ Ｈｕ ｂ ｎ ｒ ｎ ｔｒ ａｙＳａｉｎ Ｚ ａ ｙ ａ ６ ４ １ Ｓ ａ ｄ ｎ ｈｎ ） ． ｎ ｈ ａ ｇ Ａ ｉ ｌ ｓ ａ ｄ ｙａ ｄＶｅ ｉ ｒ ｔ ｏ ， ｈ ｏ ｕ ｎ２ ５ ０ ， ｈ ｎ ｏ ｇ Ｃ ｉａ ｅｎ ｔ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｐ ｏ ｉｔ ａ ｒｖ ｎ ｎ ｕ ｅｄｓ ａｅ ， ｒｍｏｅｈ ａｔ ｎ ｍｐ ｏ ｅｔｅｐ ｏ ｕ ｔ ｎｐ ｒ ｒ ｎ ｅｉ ｓｒ ｃ： ｒ ｂｏｉ ｃ ｎｐ ｅ ｅ ｔａ ｄ ｃ ｒ ｉｅ ｓ ｓ ｐｏ ｔ ｅ ｌ ａ ｄ ｉ ｒ ｖ ｈ ｒｄ ｃｉ ｅｆ ｍａ ｃ ｃ ｈ ｏ ｏ ｎ ａ ｉ ｌ ｕ ｂ ｎ ｒ ｒｄ ｃｉｎ Ｔ ｉ ｐ ｐ ｒｓ ｍｍａ ｉ ｄｉｔｓｉａ ｃｏ ｏａ ｒｇ ｌｔ ｎｍｅ ｈ ｎｓ ｏ ｒｂｏｉ ｅ ｎ ｍａ ｓ ａ ｄ ｙｐｏ ｕ ｔ ． ｈ ｓ ａ ｅ ｕ ｈ ｏ ｒ ｅ ｅｔ ｌ ｚ ｎ ｎ ｍｉｒｆ ｒ ，ｅ ｕａｉ ｃ ａ ｉｍ ｆ ｏ ｉｔ ｉ ｔ ｌ ｏ ｐ ｃ ｎｈ ｍｉｒｅ ｏｏ ｉａ ａａ ｃ ｎ ｓ ｐ ｌ ａｉｎｉ ｅｓ ｎ ｒｄ ｃｉｎ ｃｏ ｃ ｌｇｃ ｌ ｌ ｎ ｅａ ｄｉ ｐｉ ｔ ｔ ｗｉｅｐｏ ｕ ｔ ． ｂ ｔａ ｃ ｏ ｎｈ ｏ
益生芽孢杆菌在畜禽养殖中的应用效果和使用方法
益生芽孢杆菌在畜禽养殖中的应用效果和使用方法作者：何若天来源：《科学种养》2011年第02期所谓益生芽孢杆菌是指那些对动、植物不但无害，反而有利于增进健康生长的芽孢杆菌。
目前用于畜禽养殖的芽孢杆菌菌剂和种类主要有蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、东洋芽孢杆菌等。
一、益生芽孢杆菌在畜禽养殖中的应用效果益生芽孢杆菌应用于畜禽养殖上的效果主要有以下几方面：1. 改善动物消化道微生物群试验结果表明，对动物饲喂需氧的芽孢杆菌后，动物肠道内的大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌等显著减少，而有益菌增多。
在动物的排泄物和分泌物中亦见有益菌数量增加，而致病性微生物减少，这对减少畜禽疾病的发生起重要的预防作用。
例如纳豆芽孢杆菌对病原性大肠杆菌0-111和0-144及沙门氏菌有拮抗作用，还能杀灭肠道出血性大肠杆菌0-157。
它不仅能抑制葡萄球菌的生长与繁殖，而且还能降低葡萄球菌肠毒素的毒性。
有研究证实，动物饲喂益生芽孢杆菌不仅在其体内，而且在其体外亦能拮抗多种动物致病菌。
益生芽孢杆菌能改善畜、禽消化道内微生物群的原因是：①生物夺氧的效果。
由于芽孢杆菌繁殖迅速，需耗费肠内大量氧气，结果导致需氧的大肠杆菌等的生长受抑制，反而有利于厌氧的双歧杆菌和乳酸杆菌等益生菌的生长和繁殖。
②芽孢杆菌与消化道内益生菌群跟有害菌群之间对生存繁殖空间、定植部位及营养的竞争，限制了有害菌群的生存和繁殖。
③芽孢杆菌能合成和分泌一些抗菌素等物质而抑制病原菌的生长。
2. 增强动物机体的免疫功能近年的研究证明，益生芽孢杆菌能促进动物淋巴组织处于一种高度的“免疫准备状态”，使免疫器官发育加快，免疫系统成熟快而早，T·B淋巴细胞数量增多，动物体液和细胞免疫水平提高。
聂志武的研究发现，芽孢杆菌可使动物血清中中性粒细胞吞噬率提高17%。
刘克琳等（1994）的研究发现，对雏鸡饲喂芽孢杆菌后，其免疫器官生长发育比不喂芽孢杆菌的快，而且血中T细胞含量也高，并且能显著提高脾脏中T·B淋巴细胞含量。
益生菌调节猪肠道生理功能的研究进展
有 影 响 蜡 样芽 孢 杆菌 可 促 进 ２ ８日龄 猪肠 道 谷 氨 酰 胺 转 运 蛋 白及 相 关 离 子 的 分 泌 Ｋｍ 等 ｉ
一
（０ ７ 选 定 Ｐ Ｃ ０ ２０ ） Ｓ １ １乳 酸 菌 为 强 益 生 菌 候 选 菌 ．
由于其 耐 酸 ． 胆 汁 ， 耐 并分 泌 活性 消 化 酶 ， 淀粉 如
朱 勇文 ： 国农 业 科 学 院北 京 畜牧 兽 医研 究 所 ， 南 中 华
微 生物 分子 反应 的标 记 Ｔ Ｒ启 动 信号 级联放 大 Ｌ 作 用激 活 转 录因子 Ｎ — Ｂ． Ｆ ｋ 并上 调 活化 刺 激炎 性 细胞 因子 和趋化 因子 产生 哺乳动 物 目前 已经确 定 ｌ种 ＴＲ． ３ Ｌ ｓ 它们存 在 于不 同的细 胞类 型 ． 括 包
益 生 菌 有 许 多 重要 的 生理 功 能 ．如 屏 障 作 用， 改善 肠道功 能 ， 进消 化吸收 等 。随着 研究 的 促 深 入 ， 现 益 生 菌 还影 响先 天 性 、 发 获得 性 免 疫 及 免 疫 细胞 作 用 。 并通 过 与 其 他 细 菌互 作 ． 控肠 调 道 消化生 理 ， 最后 起 到保护 机体 的作用 。
得粉碎 。
这 些问题仅 限于全 国 ２８亿只蛋 鸡 中的 ３ ． ％～ ４ ， ％ 根据 当前 可 接 受 的说 法 ． 至少 ９ ％的企 业 可 ０ 提供 有 营养 的健 康食 品 。尽 管肠炎 沙 门氏菌很 可 能 无 法彻 底 根 除 ， 农 场 良好 的操 作规 范 ． 但 再加 上 加工 和经 销水 平 ，可把感 染水 平 降到 最低 ． 减
全 的 级 别 必 须 加 强 对 员 工 卫 生 、 鼠类 控 制 的 关
产业 产生 了不小 的震 动 。对 于生 产者 而 言 。 论 无 是 个体 养 殖 户 ， 是 他 们 参 加 的养 殖 协 会 。 还 已经 表 明 了盲 目 自满 和 自我 否定都 是不 可 取 的 ． 些 这 自满 和 否 定 都 被鸡 蛋 召 回所 产 生 的经 济 影 响 撕
(高龙生物)枯草芽孢杆菌在生猪养殖中的作用与用法
枯草芽孢杆菌是目前国家批准的19种饲料添加剂益生菌中的一种, 枯草芽孢杆菌是以芽孢形式存在,具有耐高温,保存时间长等特点,因此受到了很多饲料厂及养殖户的青眯,枯草芽孢杆菌在北方使用比较早,南方则是这几年才流行开来,枯草芽孢杆菌的作用很多,今天我们就介绍一下枯草芽孢杆菌在生猪养殖中的应用情况.一、枯草芽孢杆菌的作用机理1、枯草芽孢杆菌生物夺氧枯草芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中需要大量的氧气，进入动物肠道内，消耗大量的游离氧，降低肠道内氧浓度和氧化还原电势，改善了乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌的生长环境，保持肠道微生态系统的稳衡，提高动物机体抗病能力，减少胃肠道疾病发生几率。
2、枯草芽孢杆菌拮抗致病微生物，改善体内外生态环境动物饲喂枯草芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化体内外环境，减少疾病的发生。
3、枯草芽孢杆菌增强动物体的免疫功能枯草芽孢杆菌能促进动物肠道相关淋巴组织处于高度的“免疫准备状态”，同时使免疫器官发育加快，免疫系统成熟快而早，T、B淋巴细胞数量增多，动物体液和细胞免疫水平提高。
4、枯草芽孢杆菌产生营养物质枯草芽孢杆菌在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体新陈代谢。
5、枯草芽孢杆菌产生多种消化酶枯草芽孢杆菌能提高动物生产性能是其产生多种消化酶的一个重要体现。
研究表明，枯草芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。
枯草芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来,并能消除饲料中的抗营养因子，减少抗营养因子对动物消化利用的障碍。
二、枯草芽孢杆菌在生猪养殖中的用法及用量1、用法：枯草芽孢杆菌在生猪养殖中一般使用两个方法，第一是直接与饲料拌料，第二是饮水。
益生素的研究进展及其在猪生产中的应用
有蛋 白酶、 淀粉酶和脂肪酶活性 。③ 在肠道环境
不增 殖 ， 肠 道 定 植 后 可 消 耗 大 量 的 氧 气 ， 持 在 维
肠道厌 氧 环境 ， 加 肠道 对需 氧菌 的定 植能 力 。 增
２３ 酵 母 茵 ．
益 生素 的有 益 菌 群能 在 消化 道 内繁 衍 ， 能促
３２ 刺 激 机 体 免 疫 系统 ， 高机 体 免 疫 能 力 ． 提
磷 和铁等 矿物质元 素 的吸收 。 有较强 的耐酸性 ， ③
在ｐ Ｈ值 ３０ ４５时仍可 生长 ，对 胃中的酸性 环境 ． ． ～
有 一定 耐受 性 。④ 不 耐高 温 ， ８ ℃处 理 ５ ｍ ｎ 经 ０ ｉ， 损 失 ７ ％～ ０ ０ ８ ％。⑤ 生 产 一种 特 殊 的抗 生素— —
３ 益 生 素 的 作 用 机 理
１０ ０ ％。 同时该 病所 造成 的仔 猪病 死 率也 相 当高 ，
一
益 生 素 的作 用 机理 在 理论 上 的进展 还 很 可 达 ５ ％ 以 上 。赵 京 扬 Ｏ ３％ 严 ０
目前 主要 有 ３种 学 说 ： 优 势 菌 群 学 说 ； 菌群 ① ② 屏 障学说 ； 微 生 物夺 氧 学说 。益 生素 主 要 是通 ③
分 的有 效 合成 和 吸 收利 用 ， 而 促 进畜 禽 生 长发 从
育 和增重 。
４ 益 生 素 在 猪 生 产 中 的 应 用
酒酵 母 、 色酵 母 等 。 主要 特点 是 ： 需氧 菌 ， 红 ① 存 在于 多糖偏 酸环 境 中 。② 体 内富含 蛋 白质 和多 种
４１ 在 防 止 仔 猪 腹 泻 中的 应 用 ．
下产 生乳 酸 ， 降低 肠 道 ｐ Ｈ值 ， 进 维 生素 Ｄ、 、 促 钙
猪源乳酸芽孢杆菌的筛选与鉴定
梭菌的数量 ｛ 。陈世琼等［ ９ １ 认为，从菌种的安全性
以及 对 宿 主 肠 道 的粘 附性 考 虑 ，益 生 菌 菌种 最 好 采 用 同源 动 物 的优 良菌 种 。但 目前 为 止 国 内仍 没 有 有 关 仔 猪 来 源 的凝 结 芽 孢 杆 菌 的 报 道 。 因此 ，从 健 康 仔猪 粪 中 分 离 筛 选 出对 仔 猪 黄 白痢 有 一 定 防 治 作 用 的产 酸
用 ，并且 能 够 抵 抗 高 浓 度 胃酸 、胆 盐 的 不 良环 境 ，具 有 较 高 的存 活数 。推 断 ：Ｙ 为 凝 结 芽孢 杆 菌 （ Ｒ ４ 和 Ｙ 为 Ｎ Ｓ１ ） 凝 结 芽孢 杆 菌 （ Ｒ ７ ） Ｎ Ｓ１２ 。 关 键 词 ：仔猪 ；乳 酸 芽孢 杆 菌 ； 筛选 ；鉴 定 中图 分 类 号 ：￥ ２ ８８ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ３ ９ ２ ｌ ） ３ Ｏ ３ 一 ５ ０ ５ ９ ６ （０ ０ 一 ｌ ｌ ０ １
菌 、芽孢 杆 菌等 。乳 酸菌作 为 益生菌 株应 用 ＝畜禽 Ｆ
收稿 日期 ：２ １— ５ ２ ０００— ０
轻 工业 学 院 ｐ 在我 国率先 开 展 了该 菌 种 的研 究 ，并
从 脱 脂 奶 粉 中分 离 到 该 菌 株 （ ． ａ ｕ ｎ ） Ｂｃ ｇ ｌ ｓ ，编 号 ｏ ａ
基金 项 目 ：黑 龙 江 省 “ 一 五 ” 十 攻关 项 Ｉ（ Ａ ７ ２ Ｉ２ ￣Ｇ ０Ｂ ０一１ １
作者简介 ：王晓翠（ ９ ３ ） １ ８ － ，女 ，硕士研究生 ，研究 力向为动物营养 与饲料科学 。Ｅ ｍａｌｗ ｎｘａｃｉ５ ３４ ６ ．ｏ － ｉ ａｇ ｉ ｕ２ １ １ ＠１ ３ｃ ｍ ： ｏ
王 晓 翠 ，李 杰
猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析
关 键 词 ：益 生 菌 ； 芽孢杆 菌 ； 生化 鉴 定 ； １ ６ Ｓ ｒ ＤＮ Ａ； 产 酶 能 力 中 图分 类 号 ： ￥ ８ １ １ ． ６ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ６ — ２ ６ ７ Ｘ（ ２ ０ １ ６ ） １ １ － ３ ５ ４ ２ — ０ ７
新 鲜粪 便 ， 采 自重 庆 北 碚 散 户 饲 养 的 太 湖
母猪 。 参考菌株 Ｓ １ ． ２ ， 来 自富硒 一 枯 草 芽 孢 杆 菌 饲 料 添加 剂 （ 活 菌数 ５ ｘ １ ０ 加Ｃ Ｆ Ｕ／ ｇ ， 神微 生 物 菌 种 科 技
有 限公 司 ） 。
菌 ３种酶的透 明圈直 径／ 菌落直径 （ Ｄ ／ ｄ ） 值在 ２ ～ ４ 。唐 丽 江 等 Ｊ 、 谢 凤 行 等 从 土壤 分 离 芽 孢 杆 菌
孢杆菌能更大限度地 发挥其营养效果 。本研究 拟
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ６ — ０ ４ — ０ ９
基金项 目： 传 染 病 预 防 控 制 国 家 重 点 实 验 室 留学 归 国人 员 启 动 经 费 （ ２ ０ １ Ｉ Ｓ Ｋ Ｌ１ Ｄ ３ ０ Ｉ ）
作 者简介 ： 蒋佳 璇 （ １ ９ ９ ２ 一） ， 女， 重庆合川人 ， 硕士研究生 ， 从事微生 物学 方 向研究 。Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ：￣ ｘ ４ ｌ ｌ ｕ ａ ｎ ＠１ ２ ６ ． ｃ ， 其 中芽 孢 杆 菌 占 ６种 Ｊ 。芽 孢 杆 菌 类 益 生 菌 除生 物 占位 及 生 物 夺 氧 作 用 抑 制 病
原性细菌外 ， 还 通 过 其 在 肠 道 内产 生 多 种 水 解 酶
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 试 验材 料
益生芽孢杆菌论文水产养殖论文：益生芽孢杆菌在水产养殖中的作用和使用方法
益生芽孢杆菌论文水产养殖论文：益生芽孢杆菌在水产养殖中的作用和使用方法目前，国内外用于水产和畜禽养殖的益生芽孢杆菌种类不少，常见而且已容许使用的有枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、东洋芽孢杆菌等40种以上。
我国农业部1999年发布的105号公告可直接用于饲喂动物的12种益生菌中也有枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌等。
益生芽孢杆菌的最大特点是在其生长发育后期，在细胞内会形成一个厚壁的、生命力很强的芽孢作为其生命的延续体，芽孢一旦形成，便能耐受各种不利条件。
例如对干热、湿热、紫外线、?酌射线、强酸强碱、真空干燥、氧化作用等均能忍受，所以在工业生产制粒过程中以及被动物吞食进入消化道的酸性胃液环境中，也能保持高度的稳定性而不会被消化破坏。
这些特点是其他不能形成芽孢的微生物所不具备的。
当然，当芽孢杆菌的芽孢萌发成营养细胞后，也会丧失这种能力。
益生芽孢杆菌在农业上的应用，虽比光合细菌、乳酸菌、酵母菌等晚，但近年在水产和畜禽养殖中已陆续应用，并取得很好的成效。
本文重点介绍它们应用在水产养殖中的作用和使用方法。
一、对水产动物的益生功能1. 产生营养物质，促进水生动物生长。
益生芽孢杆菌添加于饲（饵）料中被水生动物摄食后，在水生动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质，如维生素（包括b1、b6、vc和vk2等）、动物所必需的全部氨基酸，还有有机酸及促生长物质等，当然还有丰富的蛋白质、脂肪和糖类，从而为动物提供饲（饵）料中所缺乏或不足的营养物质，其中所提供的有机酸能促进动物对钙、磷、铁等元素的利用和对维生素d的吸收。
由于益生芽孢杆菌营养丰富，加上有促生长的作用，所以对鱼虾等的生长有明显促进作用。
例如：华雪铭等（2001年）在基础饲料中添加0.2%的益生芽孢杆菌饲喂异育银鲫2个月，银鲫的相对增重率比不添喂的增加33%；温崇庆等（2007年）用蜡样芽孢杆菌投喂南美白对虾，结果对其从无节幼体ⅲ期到蚤状幼体ⅱ期的变态有极显著的促进作用。
芽孢杆菌的作用与功效
芽孢杆菌的作用与功效
芽孢杆菌是一种益生菌，具有以下作用与功效：
1. 改善消化系统功能：芽孢杆菌可以促进肠道中有益菌的生长，对于调节肠道菌群平衡和改善肠道内环境起到积极作用。
它能够增加肠道蠕动，促进食物消化，减少便秘和腹胀等消化系统问题。
2. 抑制有害菌生长：芽孢杆菌能够产生抗菌物质，如抗菌肽和有机酸，可以抑制肠道中一些有害致病菌（如大肠杆菌、沙门菌等）的生长，维护肠道健康。
3. 提高营养吸收：芽孢杆菌通过分解食物中难以消化的纤维素和多糖，释放出有益的营养物质，帮助身体更好地吸收和利用营养物质。
4. 增强免疫力：芽孢杆菌可以激活和调节免疫系统，促进巨噬细胞的活性化，增强冠状动脉系统的抵抗力，提高人体的免疫功能。
5. 增强抗氧化能力：芽孢杆菌含有丰富的抗氧化物质，如
SOD（超氧化物歧化酶），可以中和体内自由基，延缓细胞
老化过程，增强抗氧化能力。
6. 改善肠道炎症：芽孢杆菌具有抗炎作用，可以减轻肠道炎症反应，促进肠道黏膜修复，改善消化道炎症性疾病，如溃疡性结肠炎和克罗恩病等。
总之，芽孢杆菌是一种有益的微生物，对于调节肠道功能、维持肠道健康、增强免疫力等方面都具有重要作用。
它可以作为保健品或食品添加剂，帮助人们改善肠胃健康，预防疾病。
芽孢杆菌的研究进展及其在动物生产中的应用
纳豆芽孢杆菌能够提高幼犬机体免疫力和抗氧化能 力ｕ。ｗｕ 等在断奶仔犬 日 中添加纳豆芽孢杆菌 粮 １ 和２。 ‰ ％ ，试 验 结 果 表 明 ，添 加 纳豆 芽 孢 杆 菌 可 提高仔犬 的 日增重 ，增加粪便中的乳酸杆菌数量 ， 降低粪 便 中 的大肠 杆 菌数 量 ，进 而促 进仔 犬 生 长 ，
２２ 产 生 多种酶 类 ，促 进 营养 物质 的 消化 ． 芽 孢杆 菌 进 入肠 道 后 可产 生 淀粉 酶 、脂 肪 酶 、 蛋 白酶 等多种 酶类 ，促 进动 物对 营养物 质在 消化 道 中的吸 收 。枯 草芽孢 杆 菌和地 衣 芽孢杆 菌可 产生 果 胶酶 、葡聚糖 酶 、纤维 素酶 ，从 而降解 饲料 中的木 聚糖 、地 衣 聚糖 、果胶 、羧 甲基纤 维 素 、多聚半 乳 糖醛 酸 以及其 他一 些复 杂 的植 物性 碳水 化合 物 ，从 而提 高 了饲 料 的转化率 并增 加可 利用 的饲 料原料 种 类 。Ｃ ｅ 等用 纳豆 芽孢 杆菌 剂 饲 喂 Ａ ｈｎ Ａ鸡 ，能提 高
爆发 能力 ，促进非特异性免疫力的提高 。Ａｙ ｌ等
在罗非 鱼 的研究 中也证 实 ，饲料 中添加 枯草 芽孢 杆
在 肉鸭 生产 中添加 芽孢 杆菌 制剂 ，可 提高 肉鸭
的育成速度 、体增重 、降低料 肉比，提高育成率。 宋峻峰等试验发现 ，枯草芽孢杆菌（０ ０ ・ ） ３０ ５０ ｔ ｇ 能 提高樱 桃 谷 肉鸭生 长速度 ，降低料 肉比 ，并 改善 养殖环境 ，降低养殖用药成本 ，获得社会效益与经 济效益 的双丰收 。刘晓琳等在樱桃谷 肉鸭 日粮中 分别添加枯草芽孢杆菌５ ０ ・ 、液态枯草芽孢杆 ０ ｔ ｇ～ 菌 ６ ０ ・ 和金霉素 ５０ ・ ，试验结果表明 ，枯 ０ ｔ ｇ ０ ｔ ｇ～ 草芽孢杆菌可提高肉鸭的生长 、提高 日 增重 、提高
不同兽药抗生素对益生菌的抑制作用研究
不同兽药抗生素对益生菌的抑制作用研究蓝俊虹1，张冰1，许英蕾1，王永侠1，范小燕2，杨彩梅1*(1.浙江农林大学动物科技学院，浙江临安 311300；2.浙江惠嘉生物技术股份有限公司，浙江安吉 313300)摘 要：本试验旨在研究杆菌肽锌、喹烯酮等8种畜禽养殖中的兽药抗生素对枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌、粪肠球菌以及酵母菌等5种常用益生菌的抑制作用。
通过牛津杯双层平板扩散试验研究这些兽药抗生素不同浓度下对5种常用的益生菌的抑制作用。
结果表明：25、50、75 mg/kg的杆菌肽锌，50、100、150 mg/kg硫酸粘杆菌素对5种益生菌均无抑制作用；25、50、75 mg/kg的吉他霉素、阿莫西林以及硫酸新霉素对枯草芽孢杆菌有极强的抑制作用；50 mg/kg的吉他霉素及75 mg/kg的硫酸新霉素对地衣芽孢杆菌有极强的抑制作用；75 mg/kg的吉他霉素以及不同浓度喹烯酮、盐酸金霉素、土霉素钙以及阿莫西林对丁酸梭菌显示出极强的抑制作用；50、100、150 mg/kg的盐酸金霉素以及土霉素钙对粪肠球菌抑制作用极强；不同浓度的8种兽药抗生素则均对酵母菌无抑制作用。
综上所述，实际生产中应避免益生菌与对其有极强抑制作用的兽药抗生素联用。
关键词：益生菌；兽药抗生素；抑菌直径；抑制作用中图分类号：S859.7 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20190419-07抗生素可促进动物生长，防治动物腹泻，进而提高生产性能和养殖效益，因此被广泛使用。
但随着抗生素大量使用甚至滥用，其负面影响越来越突出，甚至威胁到食品安全和人类健康。
据中国农业农村部194号公告，从2020年1月起，我国禁止饲料中添加中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。
益生菌作为一种绿色饲料添加剂，已被广泛应用于畜禽养殖。
我国农业农村部发布的《饲料添加剂品种目录》可使用的饲用微生态制剂有34种，包括地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、酵母菌等。
猪源肠道益生菌Z-16菌株的分离及耐受性研究
２６一 ６
江苏农业科学
２１ ０ ０年第 ３期
李 佳 ， 王世英 ， 姜军坡 ， 等．猪源肠道益生菌 ｚ ｌ 菌株的分离及 耐受性研 究 ［ ｊ ～６ Ｊ ．江苏农 业科学 ， １ （ ） ２６— ６ ２ ０３ ： ０ ６ ２８
猪 源肠道益生菌 Ｚ一１ ６菌株 的分离及 耐受性研究
李 佳 王世 英 ， ，姜 军坡 ，张德全。 ，朱 宝成
（． １ 河北农 业大学生命科学学院 ， 河北保定 ０ １０ ； ． ７ ０ １ ２ 石家庄市动物防疫监督总站 ， 河北石 家庄 ０ ００ ） ５０ ０
摘要 ： 采集健康仔猪 的粪便 ， 筛选对病原指示菌大肠杆菌（ ｓｈｒ ｈａ ｏｉ具有 拮抗作用 的芽孢杆 菌益生菌株。 Ｅｃｅ ｃｉ．ｃｌ） ｉ 通过初筛得到具有拮抗作用 的菌株 ２ ， ３株 复筛选出 １ 株拮抗活性较高的菌株 ｚ一１ 。通过形态观察 和生 理生化特征 ６
养 基 。
１ ３ 试 剂 ．
种 或 多 种 有 益微 生 物 及 代 谢 产 物 组 成 的 ， 供 人 类 或 动 物 可
直接使用的活菌制剂 。有研究 表明 ， 生菌可改善动物肠 益
道菌群 的平衡 ， 增强动物机体免疫能力 ， 进动物生长发育 ， 促 提高动物生产性能 ， 降低肠 道 内有 害物质 的产生。益生菌作 为一种无 毒、 无残 留、 无抗药性的饲料添加剂 ， 受到业界关注 ，
Ｎ Ｃ ． ｏ Ｌ Ｅ Ｔ ０ｍｍ ｌＬ Ｃ Ａ ． ％ （ ｖ） ｐ ａ Ｉ ４ｍ ｌ ， Ｄ Ａ２ ｏ ，Ｔ Ｂ２ Ｏ ｗ／ ，Ｈ值 １ ／ ／ ８０ Ｎ Ｐ ． 。ｄ Ｔ ｓ昆合 液 ：． ｍｏ Ｌ 正 向 引 物 ２ ｆ反 向 引 物 ７ ２ ５ｍ ｌ 。 ／ ７， １９ Ｒ： 海 生工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司合 成 。 纯 化 试 ４５ 上 剂 盒 为北 京 泽 星 科 技 有 限公 司生 产 。 １３ ３ 安 全 性 及 耐 受 性 试 验 试 剂 ．． ０ ９ ＮＣ 溶 液 、 ． ％ ａＩ ９ ５ 一１． ％ Ｈ １猪 胆 盐 、 ．％ ０５ Ｃ、 胃蛋 白酶 、 蛋 白酶 。 胰
芽孢杆菌对育肥猪生长性能和肉品质的影响
益生菌作为抗生素替代品在促进养猪业发展方面受到广泛关注。
随着我国对抗生素的禁用和限用，到2020年抗生素将禁止作为饲料添加剂在畜禽动物中使用。
在用作益生菌的几种细菌中，形成孢子的芽孢杆菌被认为是最合适的益生菌，因为其孢子能抵抗恶劣环境，可以在环境温度下广泛存活（Hong等，2005）。
前人的研究表明，日粮添加芽孢杆菌在猪生产中表现出良好的效果（邓军等，2013；黄雪泉，2010），如在生长肥育猪饲粮中添加益生菌可以提高肥育猪的增重、饲料转化率和采食量。
日粮益生菌通过与有害的肠道菌群竞争和刺激免疫系统，在动物的肠道内产生抗菌物质，提高动物性能（Davis等，2008）。
但将混合的芽孢杆菌喂养给生长肥育猪的报道很少。
因此，本研究旨在评估芽孢杆菌对生长育肥猪生长性能、养分消化率、血液参数、粪微生物、有害气体排放和肉品质的影响。
1 材料与方法1.1 试验设计 试验选择平均体重为（23.5±0.89）kg的三元商品猪75头用于评估日粮添加芽孢杆菌对生长育肥猪生长性能和肉品质的影响。
试验分为3组，每组5个重复，每个重复5头猪。
对照组饲喂两阶段（生长和育肥期）基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加0.015%和0.03%芽孢杆菌，日粮组成及营养水平见表1，试验共开展16周。
试验用复合芽孢杆菌购自武汉华达瑞尔生物有限公司（1×109CFU/g凝结芽孢杆菌，4×108CFU/g地衣芽孢杆菌，1×109CFU/g 枯草芽孢杆菌）。
1.2 试验记录 试验期间每隔6周统计一次采食量，对各组猪只进行称重，计算各阶段猪只平均日采食量、平均日增重和增重耗料比。
采用指示剂法（三氧化铬）对猪只进行代谢试验，测定养分表观消化率。
每隔6周测定猪背膘厚度，试验结束后，每重复选择2只肥猪进行屠宰，测定肉质指标。
1.3 血液和粪指标 分别在试验第6和12周对猪只进行采血，血液用于分析红细胞、白细胞和淋巴细胞数量及血糖浓度。
益生芽孢杆菌抗感染的作用机理
抗体及 血清抗体 效价 ，并 绘制抗体 消长规 律 曲线 。试 验结 果 表 明 ，虽然３ 种抗原均 出现较高 卵黄抗体 效价 的高峰期 ， 峰 但 期效价存 在差异 ，其 中 ，金黄色 葡萄球菌 ，无乳链球 菌及 大 肠杆菌 卵黄 抗体效价 峰值 分别为６０ ８ ，２５０ ４ ，ｌ ０ ６ ，分析 原 ２ 因可能与３ 种抗 原的免疫原性 、反应 原性 和免疫原剂量有关 。 为 了确保 ３ 抗原 免疫后 卵 黄抗体 均能 达到 相近 的高效 价水 种
・
１ ４・ ９
中国畜牧 兽医文摘
２ １年 ０ １
２卷 ７
第４ 期
兽 药 应 用
酶 、蛋 白酶和脂 肪酶活 性 ，结果 显示 ，１ ０日龄 时各实验组 酶 肠杆 菌 、沙 门氏菌等 病原微生 物的生 长 ，利于乳 酸菌 、双歧 活性与对照组相 比差 异性不显著 （ ＞ ． Ｐ ００ ５）；２ ０日龄时各实验 杆菌 等厌氧 菌的定植 和生长 ，以达到 防病 和治病 的 目的。给
参考 文献
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［］ Ｖ ｋａ ｈ ｋａａｔｉＰ， ｈ ｎ ｇ ｓｎ ａａ Ｋ， ｌ ａｕ ａ ．． ５ ｉｒｍａＣ ａ ｒｖｒ ． Ｓ ａ ｍｕ ａｕ ｄ ｒｍ． Ｍａｍ ｒｇ ｎＳ ｈ
益生菌在生猪生产中的应用
１ 益 生菌 的种 类
我 国于 １ ９ ９ ４年 批 准 使 用 的 益 生 菌 有 ６种 ： 芽孢 杆菌 、 乳 酸杆 菌 、 粪链球菌 、 酵 母菌 、 黑 曲菌、 米 曲菌 。应 用 到 生 猪 生 产 的 益生 菌 一 般有 芽 孢 杆 菌 、 酵母菌 、 乳酸菌 、 双歧杆菌 、 促 生 长 因 子等 ， 目前 人 们 研 究或 应 用 比较 多 的是 乳 酸 菌 和双 歧 杆 菌 。
・ ４ ４ ・
《 上 海 畜 牧 兽 医通 讯 》 ２ ０ １ ３年 第 ３期
益 生 菌在 生猪 生产 中的应 用
李海金
（金 湖 县 动 物 卫 生 监 督 所 益 生菌（ Ｐ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ） 这个词 最先是 由 Ｌ ｉ ｌ ｌ ｙ和 Ｓ ｔ ｉ ｌ ｌ ｗｅ ｌ ｌ 在 １ ９ ６ ５年 使 用 的 ， 用 来 描 述 一 种 微 生 物 对 其 他 微 生 物 促 进 生 长 的作 用 。现 在 益 生 菌 是 指 一 种 通 过 改 善 肠 道 微 生 物 平 衡 ， 从 而 对 寄 主 施 加 有 益 影 响 的活 的微 生 物 添 加 剂 ， 翻 译 成 中 文 为 益 生 菌 。这 一 概 念 强 调 了 活 菌 体 作 为 有 效 益 生 菌 基 本 成 分 的重 要 性 。 Ｈａ ｖ ｅ ｎ ｎ ａ ｒ 于 １ ９ ９ ２年 对 这 个 定 义 进 行 了 扩 展 ， 解 释 为 一 种 单 一 的或 混 合 的活 的微 生 物 培 养 物 ， 应 用 于 人 或 动物 ， 通 过 改 善 固 有 菌 群 的 性 质 对 寄 主 产 生 有 益 的 影 响 。益 生 菌 系能 够 改 善 肠 道 菌丛 平 衡 ， 从 而 对 宿 主 健 康 发 挥 有 益 作
芽孢杆菌的抑菌实验报告
一、实验目的本研究旨在探究芽孢杆菌的抑菌性能，通过体外实验方法，评估其对特定细菌和真菌的抑菌效果，为芽孢杆菌在生物防治、食品保鲜等领域的应用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验菌株：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、白色念珠菌（Candida albicans）。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、沙堡培养基。
3. 实验仪器：恒温培养箱、电子天平、移液器、牛津杯、无菌水、无菌滤纸等。
三、实验方法1. 菌悬液的制备：将实验菌株分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基和沙堡培养基中，37℃恒温培养24小时，然后用无菌水稀释至适宜浓度。
2. 抑菌实验：- 将牛肉膏蛋白胨培养基和沙堡培养基分别铺成平板。
- 在平板中央放置牛津杯，并加入适量实验菌株菌悬液。
- 将平板置于恒温培养箱中，37℃培养24小时。
- 观察并记录抑菌圈的大小。
四、实验结果1. 枯草芽孢杆菌对细菌的抑菌效果：- 对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为15mm和12mm。
- 对枯草芽孢杆菌自身菌株无抑菌作用。
2. 枯草芽孢杆菌对真菌的抑菌效果：- 对白色念珠菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径为10mm。
- 对枯草芽孢杆菌自身菌株无抑菌作用。
五、讨论与分析1. 抑菌效果分析：- 本实验结果表明，枯草芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌具有一定的抑菌效果，说明其具有一定的生物防治潜力。
- 抑菌效果与菌株的种类和浓度有关，本实验中枯草芽孢杆菌的抑菌效果较好，可能与菌株本身的抑菌物质和代谢产物有关。
2. 实验局限性：- 本实验仅针对部分细菌和真菌进行了抑菌实验，未涉及更多菌株，实验结果可能存在局限性。
- 实验条件可能影响抑菌效果，如温度、pH值等。
六、结论本实验结果表明，枯草芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌具有一定的抑菌效果，为芽孢杆菌在生物防治、食品保鲜等领域的应用提供了理论依据。
枯草芽孢杆菌在猪生产上的应用
养殖与饲料2021年第03期枯草芽孢杆菌在猪生产上的应用李春辽宁省鞍山市岫岩县畜产品安全监察所，辽宁鞍山114300摘要枯草芽孢杆菌是一种应用前景极其广阔的益生菌。
在猪的饲料中添加枯草芽孢杆菌能够提高猪的生长性能，降低猪的料重比，提高猪血浆的抗氧化能力，提高猪的免疫能力，改善育肥猪和仔猪的肠道微生物结构。
因此，在猪饲料中添加枯草芽孢杆菌具有显著的优势，建议养殖户和养殖企业在猪饲料中添加枯草芽孢杆菌。
关键词枯草芽孢杆菌；猪；生长性能；肠道微生物收稿日期：2020-12-18李春，男，1969年生，兽医师。
枯草芽孢杆菌，是一种能够产生内生芽孢的革兰氏阳性杆状好氧型细菌，其具有营养需求简单、易于存活、生长速度快和没有致病性等特点，能够作用于动物肠道中的底物，将底物分解，并生成酸性的脂肪酸，从而降低肠道中的pH 值。
肠道中每一种菌都有一个合适的生存和繁殖环境，有益微生物一般需要的pH 值较低，而有害菌所需要的肠道pH 值一般较高，枯草芽孢杆菌分解底物产生的挥发性脂肪酸降低了肠道中的pH 值，促进有益菌的生长，并且抑制了有害菌的生长和繁殖。
此外，枯草芽孢杆菌还能够分泌一些酶类，这些酶能够帮助宿主消化未消化的食物，从而提高动物对饲料的消化和吸收，提高动物的生长性能。
到目前为止，对枯草芽孢杆菌的研究已经有相当多的报道，其中在猪生产上的应用也较为普遍，在猪的饲料中添加枯草芽孢杆菌可以促进猪的抗氧化能力，提高生长猪的平均日增重，降低生长猪的料重比，提高猪对营养物质的利用率，改善猪的血清生化指标，并且还能够降低猪的腹泻率从而促进猪健康生长。
1枯草芽孢杆菌的作用枯草芽孢杆菌广泛存在于土壤以及植物体的表面，在动物的肠道中也有分布。
枯草芽孢杆菌在体内形成的内生孢子具有很强的抗逆性，在高温、高压、强酸、强碱以及有机溶剂等环境中均能够存活。
枯草芽孢杆菌进入动物肠道后，能够分泌多种酶类，比如脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶等，能够消化动物体未消化的食物，还能维持肠道的形态，促进肠道对营养物质的消化和吸收，进而提高动物体对饲料的利用率。
猪源益生芽孢杆菌的分离筛选与应用研究的开题报告
猪源益生芽孢杆菌的分离筛选与应用研究的开题报告
一、选题背景
随着现代养殖业的发展，猪等畜禽生长速度的提高、疫病的发生等问题越来越凸显。
在抗生素滥用被限制的情况下，寻找一种替代的生物制剂成为了一种趋势和需求。
益生菌作为一种生物制剂，可以稳定肠道环境，保护肠道黏膜，增强消化酶的活性等，对于畜禽的生长和健康有着积极的推动作用。
因此，本课题选用猪源益生芽孢杆菌的
分离筛选与应用研究作为研究方向。
二、研究内容
（1）采集猪肠道样品，筛选优良菌株：采用传统的分离增菌鉴定法、分子生物
学鉴定法，筛选并鉴定出猪肠道中的优良菌株。
（2）确定菌株的益生特性：猪源益生芽孢杆菌的益生特性包括稳定肠道环境、
增强肠道黏膜屏障、提高消化道中营养物质的利用率等方面，通过相关试验来确定菌
株的益生特性。
（3）优化培养条件：确定了优良菌株后，需对其进行优化培养条件的研究，包
括温度、pH值、培养基等因素的影响，以提高益生菌株的生产效率和稳定性。
（4）应用研究：将筛选出的优良猪源益生芽孢杆菌应用于猪的饲料中，观察其
对猪生长和健康的影响，并进行数据分析和统计。
三、研究意义
本课题研究猪源益生芽孢杆菌的分离筛选与应用，有着明显的现实意义和生态环保意义。
一方面，它可以替代抗生素的使用，保障肉类的食用安全；另一方面，它可
以提高畜禽生长率和肉质品质，从而帮助畜禽养殖业实现可持续发展。
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疾病防治猪源益生芽孢杆菌抑制大肠杆菌的研究冼琼珍,马春全*,徐礼杰(佛山科学技术学院生命科学学院,广东南海 528231)摘要:采用平板纸片法、打孔法、菌落计数法对分离筛选的3株芽孢杆菌分别测定其菌体、代谢产物及培养菌液对不同血清型大肠杆菌的抑制作用。
结果表明:含芽孢杆菌菌体及代谢产物的培养菌液抑菌作用更明显;大肠杆菌接种在不同浓度的芽孢杆菌培养菌液18h 后均被完全抑制不能生长,接种在代谢产物8h 内其生长数量逐渐减少,但至18h 后不受抑制其生长更旺盛;3株芽孢杆菌中以M A 2株抑菌效果最好,不同血清型大肠杆菌中以K 88株被抑制作用最明显。
关键词:芽孢杆菌;大肠杆菌;抑菌作用中图分类号:S852 6 文献标识码:B 文章编号:0529 5130(2007)01 0038 02 抗生素作为饲料添加剂之一对预防畜禽疾病有明显的促进作用,然而随着饲用抗生素的普及甚至滥用,其不良效应日益突出,导致病原菌产生耐药性;引起动物体内菌群失调、免疫机能下降;畜禽产品的药物残留直接危害人类健康及生态环境。
瑞士、欧盟早已分别在1992年和1999年禁用抗生素作为促生长剂,因而寻求饲用抗生素的替代物已成为世界各国专家研究的热点[1]。
益生素(Probi o tics)为美国学者Pake t 于1974年首次提出,其定义为使肠道微生物达到平衡的有机体和物质[2],具有调节和促进肠道菌群平衡、抑制有害细菌、增强机体免疫力及提高饲料转化率等功能[3-5]。
益生素主要包括双歧杆菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌、曲霉、酵母等,乳酸杆菌及其他菌属不耐受饲料加工和长期存放,而芽孢杆菌以孢子形式可耐受饲料加工、储藏及胃内酸性环境,并能在肠道萌发为具新陈代谢作用的营养物质[6]。
因此,应用芽孢杆菌类益生素作防治畜禽腹泻制剂和饲用添加剂有广阔的前景。
本文以3株猪源益生芽胞杆菌分别测定了菌体、代谢产物及两者组合的培养菌液对大肠杆菌的抑制作用,为探明其在猪消化道的定植抑菌效应及进一步研制猪用益生制剂奠定基础。
1 材料与方法1 1 材料营养琼脂、营养肉汤粉及麦康凯培养基购自广东环凯微生物科技有限公司,按常规方法制备平板;猪源益生芽孢杆菌M A 1、MA 2、M A 3株为佛山科学技术学院动物医学实验室分离保存;大肠杆菌K 88株(C83901)、F41株(C83707)、987P 株(C83916)购自中国兽药监察所。
1 2 菌种复苏及菌液的制备芽胞杆菌MA 1、M A 2、MA 3株经琼脂平板培养复苏后,分别挑取单菌落接种于营养肉汤37 培养18h ;大肠杆菌K 88、F41、987P 株在麦康凯平板复苏后,钓取单菌落于营养肉汤培收稿日期:2006 04 18基金项目:广东省科技攻关项目(2005B20201015);佛山市专项基金项目(03020011)。
作者简介:冼琼珍(1973 ),女,硕士,实验师。
*通讯作者。
养10h ,菌液于-4 保存备用。
1 3 芽孢杆菌菌体对大肠杆菌的抑制作用采用平板纸片法,取直径约0 6c m 灭菌圆形滤纸片浸泡在3株芽孢杆菌培养液振荡1h ,置37 烘干即为芽孢杆菌菌敏纸片。
分别压贴于已均匀涂布大肠杆菌K 88、F 41、987P 菌液的营养琼脂平板,37 培养18h 后测量芽孢杆菌对大肠杆菌的抑菌圈大小。
试验重复2次,计算平均值。
1 4 芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌的抑制作用采用平板打孔法,3株芽孢杆菌菌液10000r /m i n 离心10m in ,无菌操作取上清液为代谢产物。
3株大肠杆菌菌液分别均匀涂布于麦康凯培养基,以直径约1 0cm 灭菌圆管在培养基中央打孔,挑出孔内琼脂以火焰封底,移取代谢产物加满到孔中至不溢为止,于37 培养18h 后观测抑菌圈的大小。
试验重复2次,求平均值。
1 5 芽孢杆菌培养菌液对大肠杆菌的协同抑制作用同1 4平板打孔法,摇匀及移取3株芽孢杆菌培养菌液至圆孔内,测定其对不同血清型大肠杆菌的协同抑制作用。
1 6 不同浓度芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌的抑制作用依上述结果,选取抑菌作用最好的芽孢杆菌MA 2株作进一步检测,其代谢产物制备方法同1 4。
取2mL 代谢产物分别与2、4、6mL 灭菌营养肉汤混合成3个不同浓度,以总体积的5%接种大肠杆菌菌液,置37 培养4、8、18h 后,将培养菌液梯度稀释成10-2~10-4,各稀释度作3个平行样。
最后取0 2mL 稀释菌液均匀涂布于麦康凯琼脂平板上,37 培养18h ,按文献[7]取菌落数在50~150个的平皿计数,求平均值,计算每毫升培养液中大肠杆菌数量。
1 7 不同浓度芽孢杆菌培养菌液对大肠杆菌协同抑制作用以M A 2株测定不同浓度的芽孢杆菌培养菌液对大肠杆菌的抑制作用,试验操作及菌落计数方法同1 6。
2 结果与讨论2 1 芽孢杆菌菌体、代谢产物及培养菌液对大肠杆菌的协同抑制作用从表1可见,3株芽孢杆菌的菌体、代谢产物及培养菌液在涂布大肠杆菌的琼脂平板均有不同大小的抑菌圈,其中以芽38 A n i m a lH usbandry &V e teri nary M edicine 2007 V ol 39 N o 1孢杆菌培养菌液的抑菌圈间距最大,其次为菌体,抑菌作用最弱为代谢产物,说明含有菌体及代谢产物的培养菌液其协同抑制作用,比单一菌体或代谢产物的抑菌作用更强;从同一芽孢杆菌的各产物对不同大肠杆菌的抑菌作用看,均对大肠杆菌K88株抑制作用最强;而不同芽孢杆菌对同一大肠杆菌的抑制作用也存在差异,以M A2株抑菌作用最强,表明不同芽孢杆菌对不同血清型大肠杆菌有不同的抑制作用。
表1 芽孢杆菌菌体、代谢产物及培养菌液抑制大肠杆菌产生的抑菌圈的大小c m菌株芽孢杆菌菌体K88F41987P代谢产物K88F41987P芽孢杆菌菌液K88F41987PM A11 30 60 50 40 10 22 81 20 7 M A21 40 50 41 10 20 51 91 00 6 M A30 70 30 30 60 10 20 90 60 5注:抑菌圈大小表示大肠杆菌与芽孢杆菌或其产物的间距。
2 2 不同浓度的芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌的抑制作用从表2看出,3株大肠杆菌在含不同浓度M A2株代谢产物的营养肉汤中培养4h、8h后,其细菌CFU值均有下降,但至18h后CFU值上升,比作用0h的数值更高;不同比例代谢产物的抑菌作用有一定差异,其中大肠杆菌K88株经1/2代谢产物作用4h后其数量下降了40倍,经1/3、1/4的代谢产物作用4h后则分别下降了15、8倍;经不同比例代谢产物作用8h后检测,大肠杆菌数量有些继续下降,有些开始出现上升,至培养18h后其数值全都上升,推测芽孢杆菌代谢产物在最初的0~4h内能发挥一定的抑菌作用,但抑制过程中随着芽孢杆菌代谢产物不断消耗,而后期缺乏抑菌产物的补充最终无法抑制大肠杆菌生长,致使大肠杆菌竞争性生长数量上升。
从芽孢杆菌对不同大肠杆菌的抑制作用看,以对K88株抑制作用最强,以对F41株最弱,这与MA2株平板纸片法及打孔法的抑菌结果趋于一致。
表2 肉汤中不同浓度芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌的抑制作用CFU/mL代谢产物比例E c oli菌株0h4h8h18h1/2K883 9!10111 0!10106 3!1074 3!1017 F412 9!10101 3!10111 4!10121 6!1022987P5 8!10101 7!10105 0!10103 5!10201/3K883 9!10112 7!10102 8!1082 1!1018 F412 9!10101 6!10111 8!10121 3!1022987P5 8!10102 4!10107 9!10105 3!10201/4K883 9!10114 8!10106 5!1084 0!1018 F412 9!10102 3!10112 0!10121 5!1022987P5 8!10103 6!10101 3!10118 9!10212 3 不同浓度的芽孢杆菌培养液对大肠杆菌的抑制作用从表3可见,不同浓度M A2培养菌液对不同大肠杆菌均有抑制作用,在培养4h、8h后检测,大肠杆菌数量呈明显的下降趋势,至18h后已检测不出大肠杆菌,说明不同大肠杆菌均被抑制灭活。
大肠杆菌在相同比例的芽孢杆菌培养菌液经不同作用时间其数量下降速度存在一定差异,培养4h后数量平均下降50~60倍,再经4h培养,其下降速度更快,平均下降2000~3000倍;但在最初培养的4~8h内,含1/2芽孢杆菌培养液比1/3、1/4含量的抑菌作用更强,至18h后3种不同比例芽孢杆菌液中的大肠杆菌均无法生长,最终抑菌效果趋于一致,说明芽孢杆菌菌液的浓度对抑菌作用无显著差异,可能是随着营养供给及培养时间的延长,不同比例的芽孢杆菌均不断生长及积累代谢产物,进一步增强了协同抑菌作用。
表3 肉汤中不同浓度的芽孢杆菌培养液对大肠杆菌的协同抑制作用CFU/mLM A2菌液比例E coli菌株0h4h8h18h 1/2K882 0!1093 3!1075 0!1030F414 8!1088 8!1061 7!1030987P2 5!1095 1!1071 2!1040 1/3K882 0!1095 0!1073 9!1040F414 8!1081 6!1071 9!1040987P2 5!1091 0!1082 1!1050 1/4K882 0!1096 4!1075 3!1040F414 8!1082 2!1073 8!1040987P2 5!1091 7!1086 3!10503 结论不同的试验方法均表明含芽孢杆菌菌体及其代谢产物的培养菌液对大肠杆菌的协同抑制作用比单一产物作用更强;不同比例的芽孢杆菌培养菌液对大肠杆菌抑制作用随着时间的延长其最终抑菌效果差异不显著,分离的芽孢杆菌以MA2株抑菌效果最好,提示可作今后研制猪源益生素的参考菌株。
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