LPS对新生大鼠肺组织MMP-2和t-PA,PAI-1表达影响的研究

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脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺炎模型筛选

脂多糖（LPS）诱导的小鼠肺炎模型筛选服务
脂多糖(LPS)是内毒素的主要成分，来源于革兰氏阴性菌细胞壁的外膜，在污染的空气、职业性粉尘(谷物粉等)、香烟中到处都有LPS，职业性和环境性的吸人一定浓度的上述物质后可引起或加重一系列临床病症，如哮喘、支气管肺炎等。

LPS引起支气管肺炎后经及时有效治疗可痊愈，否则，病程迁延，气道炎症反复发作可变成慢性支气管炎，如继续接触高浓度的脂多糖，病情将进行性加重，最终发展成为肺心病。

研究发现，LPS在体内外引起多种细胞高表达趋化因子和致炎因子，在肺组织中引起中性粒细胞聚集增多的主要细胞因子是IL-1β和TNF-α。

服务项目：
正常组肺组织基本正常。

（×200）
模型组血管周围水肿明显，局部肺泡壁明显充血。

（×200）
受试药物肺泡壁基本正常，无明显充血、无炎细胞浸润，肺泡腔清晰。

（×200）。

巨噬细胞极化在支气管肺发育不良机制中的研究进展2024(全文)

巨噬细胞极化在支气管肺发育不良机制中的研究进展2024（全文）摘要支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)是早产儿(尤其是极早产儿)常见的慢性呼吸系统疾病，其发病机制复杂，涉及遗传、早产、氧中毒、出生前和出生后感染、机械通气性肺损伤等多个方面，这些内源性和外源性刺激致使机体出现炎症级联反应。

近年来研究显示巨噬细胞调控着BPD的炎症反应，参与肺组织的损伤与修复，并吞噬和清除病原微生物和凋亡细胞，尽管关于巨噬细胞对BPD的调节机制知之甚少，但其极化分型可以影响多种炎症因子及信号通路的表达，可进一步明确BPD 的发病机制。

该文对巨噬细胞极化在BPD中的作用机制进行综述，以期为临床治疗提供新的靶点及途径。

支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)是早产儿常见的呼吸系统疾病之一。

一直以来，BPD受到机械通气和氧化应激等多种因素的影响。

然而，近年来随着无创呼吸支持、外源性肺表面活性物质的应用、产前糖皮质激素的应用及新生儿复苏等有效手段降低了BPD发生的风险，减少了机械通气的使用率，导致BPD的病理机理较过去有所变化[1,2,3,4]。

"新型"BPD主要以肺泡数目减少、体积增大、结构简单化和肺血管调节紊乱伴功能损害为主要特征，这可能与肺微环境中多种细胞之间的相互作用和炎症信号的激活有关[5,6]。

最近研究显示BPD的发生伴随着肺部巨噬细胞的浸润，其可能参与了BPD的炎症反应、肺组织再生以及生理平衡的维持[7]。

巨噬细胞受到多种细胞因子或转录因子的可逆调控，进而改变巨噬细胞极化的方向，使其由促炎的M1型向抗炎的M2型转化，这有可能成为BPD等炎症性肺部疾病治疗的新策略。

1 巨噬细胞概述巨噬细胞来源于骨髓源性的单核细胞、卵黄囊和胎儿单核细胞，它是先天免疫和获得性免疫的关键组成部分[8] 。

巨噬细胞具有高度异质性和高水平可塑性，可根据体内外不同微环境的影响，发生表型和功能上的适应性改变，即巨噬细胞极化。

乌司他丁和血必净抑制早期内毒素血症大鼠炎症反应的对比研究

乌司他丁和血必净抑制早期内毒素血症大鼠炎症反应的对比研究目的研究乌司他丁（ulinastatin，UTI）抑制早期内毒素（LPS）血症大鼠的炎症反应是否优于血必净（Xuebijing，XBJ）。

方法通过鼠尾静脉注射LPS 复制LPS血症大鼠模型。

54只SD大鼠随机分为LPS组、（LPS+UTI）组、（LPS+XBJ）组，每组18只，分别在用药后8 h、24 h、48 h时点随机快速处死6只大鼠，取心脏血分离血清，用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。

结果三组中各时间点TNF-α、IL-6、IL-1分别比较差异均有统计学意义（P 0.05）。

结论UTI 和XBJ均能有效抑制LPS大鼠的炎症反应；UTI在炎症早期抑制炎症反应优于XBJ。

标签：乌司他丁；血必净；炎症反应；白细胞介素-1；白细胞介素-6；肿瘤坏死因子-α革兰阴性菌（G-）是最常见的致病菌，内毒素（LPS）是G-菌感染的主要致病因子，在微生物感染的早期就开始发挥作用。

LPS通过受体结合后，触发机体产生一系列炎症级联反应，在炎症早期就释放大量早期炎症介质如TNF-α、IL-1β等，故抑制炎症因子的释放有重要的作用，目前大量研究表明乌司他丁（UTI）和血必净（XBJ）均具有抑制炎症反应作用，本研究通过检测早期炎症因子TNF-α、IL-1及IL-6，从而探讨UTI抑制LPS血症大鼠的炎症反应效果是否优于XBJ，旨在为临床治疗LPS血症选药提供理论支持。

1 材料与方法1.1 实验动物成年SPF级雄性SD大鼠54只，体重220～250 g，周龄8～10周，随机分为LPS组、UTI治疗组和XBJ治疗组，每组18只，大鼠由广东省医学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂LPS（美国，Sigma公司）；XBJ（天津红日药业股份有限公司，批号09091101）；UTI （广东天普生化医药股份有限公司，批号02091002）；IL-1、IL-6、TNF-α（美国，Biosource公司）。

mTORC1

mTORC1/2双重抑制剂OSI -027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化*吴黎虹，唐坤，党红星△，符跃强，刘成军，李静，许峰（重庆医科大学附属儿童医院重症医学科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014）［摘要］目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ， mTOR ）复合物1/2（mTORcomplex 1/2， mTORC1/2）双重抑制剂OSI -027对高体积分数氧（高氧）所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。

方法：高氧（95% O 2）处理人胚肺成纤维细胞MRC -5建立增殖分化模型，分为对照组、高氧组、高氧+OSI -027组和高氧+雷帕霉素组。

Western blot 检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ， α-SMA ）、I 型胶原蛋白（collagen type I ， Col I ）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、RhoA 、Rho 相关含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rho -associated coiled -coil -containing protein kinase 1， ROCK1）、蛋白激酶B （protein kinase B ， PKB/AKT ）、p -AKT 和mTOR 的表达； CCK -8实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期。

结果：与对照组相比，PCNA 、cyclin D1、Col I 和α-SMA 表达随高氧处理时间增加而增加（P <0.05）。

与高氧组相比，OSI -027及雷帕霉素干预后，细胞活力下降，细胞周期被抑制在G 1期（P <0.05）。

LPS诱导巨噬细胞凋亡的研究

结果
11 有效剂量 LPS、PKC 及 PDTC 对 NF2κB 核内水平的影响 :如图 1 所示 ,LPS 处理组的 NF2κB 测值 (0. 268 ±0. 016) 显著高于正常对照组 ( 0. 039 ± 0. 007) 、Cal C 阻断组 (0. 147 ±0. 010) 及 PDTC 阻断组 (0. 097 ±0. 011) ;用 Cal C 及 PDTC 阻断后 NF2κB 的核内水平均明显低于 LPS 处理组 ,其中 PDTC ( P < 0. 01) 的抑制作用强于 Cal C ( P < 0. 05) ,但二测值均
Corresponding author : WANG Zheng2qing , E2mail : wzq @mail . tmmu. com . cn 【 Abstract 】 Objective To study the molecular mechanism and signal transduction pathway of LPS2in2
实验分组 : 根据预实验结果进行实验分组。实验共分 4 组 : ①正常对照组 ,此组细胞不接受任何刺激 ; ②LPS(Sigma) 处理组 ,用 1mgΠL LPS 作用 60 min , 检测细胞 NF2κB 的核内浓度 ,培养 24 h 后测定培养液中 NO 含量 ; ③Cal C(Sigma) 阻断组 (Cal C + LPS) , 以 300nmolΠL Cal C 预处理 30 min 后 ,再用 1mgΠL LPS 刺激 60 min ,检测细胞 NF2κB 的核内浓度 ,培养 24 h
duced macrophage apoptosis. Methods NF2κB level in nuclear protein extraction of AMs (alveolar macrophage)

内毒素促进调节性T细胞增殖预防哮喘炎症反应

㊃论著㊃内毒素促进调节性T 细胞增殖预防哮喘炎症反应牟密1 胡超1 王润生1 胡鹏1 徐丽娜2 徐国纲31解放军医学院,北京100853;2解放军总医院第八医学中心保健科,北京100091;3解放军总医院第二医学中心老年病研究中心,北京100853通信作者:徐国纲,E m a i l g u o g a n g _x u @q qc o m ʌ摘要ɔ 目的探讨提前给予脂多糖(L P S )对支气管哮喘(哮喘)预防的作用及相关免疫机制,为哮喘的预防和治疗提供理论依据㊂方法提前用L P S 处理B A L B /c 背景6~8周小鼠,然后用卵清蛋白(O V A )联合铝佐剂诱导小鼠哮喘模型,阴性对照组用无菌生理盐水,分为以下4组:L P S 给药1次组(L P S 1组),L P S 给药2次组(L P S 2组),阴性对照组(N S 组),O V A 组㊂通过肺功能检测气道阻力㊁肺组织病理染色㊁支气管肺泡灌洗液分类细胞计数㊁酶联免疫吸附试验测T h 2型细胞因子及白细胞介素6(I L -6)㊁I L -10,流式细胞术测肺组织调节性T细胞(T r e g )比例等方法探索L P S 对哮喘有无预防作用㊂结果 L P S 预处理小鼠在O V A 诱导后,肺组织苏木精-伊红染色㊁过碘酸-希夫染色提示炎症减轻,炎细胞浸润减少,肺组织匀浆I L -5㊁I L -6㊁I L -13降低,L P S 2组I L -10及T r e g 比例增高,与O V A 组比较差异有统计学意义㊂结论 L P S 通过减少T h 2型细胞因子及刺激T r e g 细胞增殖减轻O V A 诱导的哮喘炎症反应㊂ʌ关键词ɔ 脂多糖素;哮喘;调节性T 细胞基金项目:北京市自然科学基金面上项目(7192197)D O I 10 3760 c m a jc n 131368-20191125-01650L i p o p o l y s a c c h a r ide p r o m o t e s p r o l if e r a t i o no fT r eg t o a l l e v i a t e i n f l a m m a t o r y r e s po n s e i na s t h m a M u M i 1 H uC h a o 1 W a n g R u n s h e n g 1 H uP e n g 1 X uL i n a 2 X uG u o g a n g 31C h i n e s e P L A M e d i c a l S c h o o l B e i j i n g 100853 C h i n a 2D e p a r t m e n to f H e a l t h t h eE i gh t h M e d i c a lC e n t e r C h i n e s e P L A G e n e r a l H o s p i t a l B e i j i n g 100091 C h i n a 3T h e S e c o n d M e d i c a l C e n t e r &N a t i o n a l C l i n i c a l R e s e a r c h C e n t e r f o r G e r i a t r i c D i s e a s e s C h i n e s e P L A G e n e r a l H o s p i t a l B e i j i n g 100853 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r X uG u o g a n g E m a i l g u o g a n g _x u @q q c o m ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T oe x p l o r et h eef f e c to fe a r l y a d m i n i s t r a t i o no fl i p o p o l y s a c c h a r i d e L P S o n t h e p r e v e n t i o n o f b r o n c h i a l a s t h m a a s t h m a a n d i t s r e l a t e d i mm u n em e c h a n i s m M e t h o d s B A L B c b a c kg r o u n d 6-8w e e k s o l d m i c e w e r ei n t r a n a s a l l y ad m i n i s t r a te d w i t h L P S t h e n o v a l b u m i n O V A a n d i s o p y k n i c a l u m i n u m w e r e u s e d t o i n d u c e a s t h m am o d e l T h e n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p w a s t r e a t e dw i t h a s e p t i c n o r m a l s a l i n e T h em i c ew e r e d i v i d e d i n t o t h ef o l l o w i ng f o u r g r o u p s n a s a l d r i p o n c ew i t hL P S L P S 1g r o u p n a s a l d r i p t w i c ew i t hL P S L P S 2g r o u p n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p N S g r o u p a n d p o s i t i v ec o n t r o l g r o u p O V A g r o u p W ed e t e c t e da i r w a y re s i s t a n c e i mm u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g of l u ng a n dc l a s s i f i e dc e l l c o u n t o fb r o n ch o a l v e o l a r l a v a g e f l ui d W e a l s o t e s t e dT h 2c y t o k i n e s I L -6 a n dI L -10b y E L I S Aa n dT r e g b y f l o wc y t o m e t r y t oe x p l o r et h e p r e v e n t i v e e f f e c t o fL P So na s t h m a R e s u l t s A f t e rO V Ai n d u c t i o n h e m a t o x y l i n -e o s i ns t a i n i n g a n d p e r i o d i c a c i d -s c h i f f s t a i n i n g i nl u n g t i s s u eo fL P S p r e t r e a t e d m i c es h o w e dt h a t i n f l a mm a t i o n w a s a l l e v i a t e d i n f l a mm a t o r y c e l l i n f i l t r a t i o n w a sd e c r e a s e d T h e r e w a ss i gn i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e n O V A g r o u p a n d L P S 1 L P S 2g r o u p L e v e lo fi n t e r l e u k i n -5 I L -5 I L -6a n d I L -13i n l u n gh o m o g e n a t ew e r e d e c r e a s e d i nb o t hL P S 1a n dL P S 2g r o u p c o m p a r e dw i t hO V A g r o u pL e v e l o f I L -10a n d f r e q u e n c y o f r e g u l a t o r y Tc e l l s T r e g i nL P S 2g r o u p w e r e i n c r e a s e dc o m pa r e dw i t hO V A g r o u p C o n c l u s i o n s L P S a t t e n u a t e st h ei n f l a mm a t i o n o fa s t h m ai n d u c e db y O V A b y do w n -㊃908㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.r e g u l a t i o no fT h2c y t o k i n e s a n d s t i m u l a t i n g t h e f r e q u e n c y o fT r e gʌK e y w o r d sɔ L i p o p o l y s a c c h a r i d e s A s t h m a R e g u l a t o r y Tc e l l sF u n d p r o g r a m B e i j i n g M u n i c i p a lN a t u r a l S c i e n c eF o u n d a t i o nP r o g r a m7192197 D O I103760c m a j c n131368-20191125-01650支气管哮喘(哮喘)是一种以T h2型细胞分化为主的炎症反应,临床表现为气道高反应性㊁炎细胞浸润㊁气道重塑[1-2]㊂内毒素是革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分,也叫做脂多糖(l i p o p o l y s a c c h a r i d e,L P S),通过被抗原递呈细胞识别,诱导机体炎症反应,过去被认为是一种毒素,比如诱导急性肺损伤模型㊂但也有研究表明,生命早期阶段接触L P S可以降低哮喘发病率,在幼年期给予L P S刺激后,哮喘的发生率及严重程度会降低[3]㊂在欧洲奥地利㊁德国㊁瑞士农村地区,农场有奶牛的家庭,儿童过敏性疾病患病率较低,同样也提示细菌具有某些预防过敏性疾病的作用[4]㊂L P S结构非常复杂,主要由O抗原㊁核心区域㊁脂质A三部分构成,功能㊁机制多样[5],既有细胞毒性作用,也可以减轻过敏性疾病,具体功能㊁机制目前存在争议,仍需进一步探讨㊂我们推测给予L P S可能会抑制哮喘炎症反应,且不同给药方式会对机体产生不同免疫反应,本实验用卵清蛋白(o v a l b u m i n,O V A)诱导哮喘模型,实验组提前给予L P S滴鼻,从肺组织病理㊁炎细胞浸润㊁细胞因子及分化趋向㊁蛋白水平等多维度,采用病理染色㊁酶联免疫吸附试验(e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y,E L I S A)㊁免疫印迹㊁流式细胞分析等多种方法,论证L P S不同时间节点和剂量预处理方式对哮喘的预防作用及机制,以期对哮喘的防治提供理论支撑㊂1材料与方法11构建动物模型采用6~8周龄B A L B/c雌性小鼠,动物饲养许可证号:S Y X K(京)2018-0002,体质量20~22g,购于北京维通利华实验动物有限责任公司,饲养于首都医科大学动物实验中心S P F级屏障动物部,喂养不含O V A的小鼠饲料和水,每笼5只,环境温度25ħ,湿度为45%~ 55%,每日光照12h㊂L P S给药1次组(L P S1组)小鼠在第3天给予30μg L P S溶于50μl无菌生理盐水滴鼻;L P S给药2次组(L P S2组)在第0天给予01μg L P S溶于无菌生理盐水滴鼻,第3天滴鼻30μg L P S溶于50μl无菌生理盐水㊂O V A 和氢氧化铝佐剂按体积1ʒ1混匀,第6㊁13天腹腔注射200μl致敏[O V A,500m g/L,阴性对照组(N S组)用无菌生理盐水代替O V A]㊂第17天至第22天用O V A滴鼻激发(溶于无菌生理盐水,50μl,1g/L),用O V A致敏和激发的O V A 组作为阳性对照组(O V A组),图1㊂12肺功能及取材在最后一次O V A滴鼻24h 后,腹腔注射2%戊巴比妥钠,待小鼠麻醉后,将小鼠置于解剖台上,用眼科剪剪开气管做T型切口,插入气管插管针,将小鼠以仰卧位方式通过气管插管与小动物肺功能测量仪相连接后,进行压力-容积曲线测定,用生理盐水和不同梯度的乙酰胆碱溶液(顺序:0㊁6㊁12㊁24㊁48g/L)雾化激发10s,1m i n后测定肺组织力学参数㊂得到总气道阻力与乙酰甲胆碱剂量反应曲线㊂各组小鼠采集完肺功能数据后,将小鼠置于解剖台上,分2次通过金属插管向气管注入1m l无菌P B S灌洗液,反复抽吸后回收约15m l肺泡灌洗液,取50μl涂在载玻片上,静置30m i n后滴4%多聚甲醛溶液固定㊂剩余肺泡灌洗液离心,上清-80ħ冻存㊂剪开胸腔,使用20m l注射器于右心室注入预冷P B S 冲洗肺部血液,待肺变白后,获取小鼠肺组织标本㊂13炎细胞分类计数将收集的肺泡灌洗液离心后,收集上清,-80ħ冻存,然后在细胞沉淀中加红细胞裂解液并室温孵育4m i n,加P B S终止反应,稀释后取10μl放入自动计数仪计数,计数完细胞总数后,取50μl细胞悬液制片,待快干燥后用50μl4%多聚甲醛固定㊂干燥后用刚果红染色,至少计数300个细胞并进行细胞分类,分别计算巨噬细胞㊁嗜酸粒细胞㊁中性粒细胞和淋巴细胞数量㊂14病理染色141 H E染色用切片机将肺石蜡包块切成厚度4μm切片,依次浸入二甲苯脱去石蜡,浸入降梯度乙醇㊁蒸馏水2m i n水化㊂苏木精染色5m i n,流水冲洗㊂1%盐酸酒精脱水后伊红染色10s,依次浸入升梯度乙醇脱水,浸入二甲苯透明㊂最后中性树胶封片,普通光学显微镜观察拍片㊂142过碘酸-希夫(p e r i o d i c a c i d-s c h i f f,P A S)染色石蜡切片放置在60ħ恒温箱中烘烤,浸入二甲苯Ⅰ脱去石蜡,依次浸入降梯度乙醇水化,用高碘酸溶液染色,切片充分蒸馏水洗10m i n,㊃018㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期I n t JR e s p i r,J u n e2020,V o l.40,N o.11Copyright©博看网. All Rights Reserved.S c h i f f 避光染色,苏木素浅染细胞核,升梯度酒精脱水,最后二甲苯透明,中性树胶封片㊂1 4 3 刚果红染色石蜡切片放置在60ħ恒温箱中烘烤,浸入二甲苯Ⅰ脱去石蜡,依次浸入降梯度乙醇水化,刚果红染色,流水冲洗后苏木精染色3m i n ,1%盐酸酒精脱水,升梯度酒精脱水,最后二甲苯透明,中性树胶封片㊂1 5 E L I S A 方法检测细胞因子采用E L I S A 试剂盒,按试剂盒说明书操作,包被后放入冰箱,隔日加入样品和配置标准品孵育,加入检测抗体孵育,加入A v i d i n -H R P 结合检测抗体,孵育30~60m i n 后加入T M B 显色,最后用稀释的硫酸终止后放入酶标仪检测底物吸光度值㊂1 6 流式细胞术将制备的单细胞悬液置于冰上待用,采用P E A n t i -M o u s eF o x p 3(3G 3)㊁F I T C A n t i -M o u s eC D 4(R M 4-5)㊁G h o s t D ye T MV i o l e t 510,购于美国T o n b o 公司㊂数据采集采用F A C S A r i a I I (B D B i o s c i e n c e s ),数据分析采用F l o w J o 10 0㊂图1 脂多糖预处理节点及卵清蛋白哮喘模型构建方法1 7 统计学分析采用S P S S19 0㊁G r a ph P a d P r i s m7等软件进行统计分析,所有实验数据符合正态分布,采用t 检验㊁T w o -w a y A N O V A 方法分析,P <0 05为差异有统计学意义㊂2 结果2 1 L P S 组小鼠的气道高反应性低为了探索哮喘机制,我们分2种方式用L P S 预处理随机分组的B A L B /c 小鼠,然后用O V A 联合铝佐剂诱导动物哮喘模型(图1),实验随机分为4组:L P S 1组㊁L P S 2组㊁N S 组㊁O V A 组㊂在最后1次O V A 滴鼻激发24h 后,连接动物呼吸机检测总气道阻力,不同乙酰甲胆碱浓度激发时组间比较㊂总气道阻力O V A 组最高,L P S 1组和L P S 2组较低,N S 组最低(图2),统计方法采用多因素方差分析,乙酰甲胆碱为24g /L ㊁48g /L 时,L P S 1组和L P S 2组的总气道阻力较O V A 组低,P <0 05㊂由此推断O V A 腹腔致敏前给予L P S 可以改善总气道阻力㊂2 2 各组炎细胞浸润和肺组织病理评分为了探㊃118㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.寻各组肺组织炎细胞浸润和黏液分泌情况,石蜡包埋肺组织切片后进行H E 染色和P A S 染色并评分㊂L P S 1组㊁L P S 2组比N S 组炎细胞浸润多,但较O V A 组炎症减轻(图3),H E 染色炎症评分也低于O V A 组(图4)㊂O V A 组支气管㊁血管周围大量炎细胞浸润,而L P S 1组和L P S 2组炎细胞浸润数量较少,L P S 2组减少更加明显㊂P A S 染色提示L P S 组黏液糖原分泌也较O V A 组有明显减少(图5),P A S 染色评分同样证实这一点(图6)㊂我们将收集的支气管肺泡灌洗液涂片染色,2人独立分别显微镜下计数至少300个细胞,炎细胞浸润绝对数提示O V A 组中性粒细胞和嗜酸粒细胞最高,L P S 组炎细胞绝对数较少,哮喘密切相关的嗜酸粒细胞组间较O V A 组降低非常明显,L P S 2组嗜酸粒细胞减少更为显著(图7)㊂可见L P S 可以抑制O V A 诱导哮喘黏液的分泌和炎细胞募集,具有显著的病理学差异㊂图2 各组不同乙酰甲胆碱浓度激发下的气道高反应性差异注:L P S 为脂多糖图3 肺组织H E 染色 H E ˑ100 A :生理盐水阴性对照组;B :卵清蛋白组;C :L P S 给药1次组;D :L P S 给药2次组2 3 L P S 预处理调节细胞因子和调节性T 细胞(r e g u l a t o r y Tc e l l s ,T r e g ) 为了比较各组之间细胞因子水平的炎症变化,我们采用E L I S A 的方法检测肺组织匀浆上清中细胞因子变化㊂I L -6是非常重要的炎症上游因子,与很多炎症相关[6],I L -5㊁I L -13是重要的哮喘代表性T h 2细胞因子[7],而I L -10家族细胞因子通过抑制炎症反应过度,上调先天免疫功能,促进组织修复机制,在感染和炎症过程中发挥维持组织稳态的重要作用[8]㊂L P S 1㊁L P S 2组与O V A 组比较,I L -6㊁I L -5㊁I L -13明显降低,而抑炎因子I L -10在L P S 组中呈升高趋势(图8~11)㊂T r e g 具有免疫保护的功能,能分泌转化生长因子β和I L -10调节炎症平衡,F o x p 3是T r e g 细胞最重要的标志,其表达决定了C D 4+T 细胞向T r e g 细胞分化㊂为了进一步探索这种保护机制,我们用C D 4+F o x p 3+标记肺组织单细胞悬液,通过比较C D 4+F o x p 3+T 细胞比例,可以看到L P S 2组的T r e g 细胞较O V A 组有所增加(图12),L P S 2组与O V A 差异有统计学意义(P <0 05),由此我们推断,早期给予低剂量L P S 联合中等剂量L P S 刺激后,可以促进T r e g 细胞增殖㊂注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;L P S 为脂多糖;每组小鼠4~5只,每只小鼠随机抽取3张片子进行t 检验;与N S 组比较,a P <005;与O V A 组比较,b P <0 05;与L P S 1组比较,cP <0 05图4 肺组织H E 染色炎症评分3 讨论细菌是与人类共生的微生物,在每一个人的身体中大概有500~1000种不同种类的细菌,这些细菌大多与其宿主建立有益的共生关系,对宿主的㊃218㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.注:L P S 为脂多糖图5 肺组织过碘酸-希夫染色过碘酸-希夫 ˑ100 A :生理盐水阴性对照组;B :卵清蛋白组;C :L P S 给药1次组;D :L P S给药2次组新陈代谢和消化效率做出重要贡献[9]㊂L P S 是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,在免疫系统识别细菌的过程中起到重要作用,但是具体机制仍然不清楚㊂在先天性免疫系统中,模式识别受体可以通过十多种T o l l 样受体识别L P S ㊁脂蛋白㊁鞭毛来识别细菌,让有限的配体受体结合方式识别数百种细菌成为可能,L P S ㊁脂蛋白等细菌的表面一定存在共同的结构模式[10]㊂通过识别细菌表面L P S ,机体产生预警机制,提高适应性免疫能力㊂注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;L P S 为脂多糖;每组小鼠4~5只,每只小鼠随机统计3张片子;与N S 组比较,a P <005;与O V A 组比较,b P <0 05;与L P S 1组比较,cP <005图6 肺组织过碘酸-希夫染色评分支气管嗜酸粒细胞浸润是过敏性哮喘重要特征之一,我们通过支气管肺泡灌洗液刚果红染色及电镜下分类细胞计数证明了L P S 1组㊁L P S 2组的嗜酸粒细胞数量较O V A 组明显减少㊂已经有研究证明,生命早期接触L P S 能通过J A K 激酶2-信号转导及转录激活因子6(j a n u s k i n a s e 2-s i gn a l t r a n s d u c e r s a n d a c t i v a t o r s o f t r a n s c r i p t i o n 6,J A K 2-S T A T 6)通路抑制M u c 5a c 黏蛋白,抑制气道黏液分泌[3],在本实验中肺组织H E 染色㊁P A S染色中也证实了L P S 减轻炎症和黏液分泌㊂过敏性哮喘T h 2型细胞因子分泌增多,I L -4和I L -13可以促进杯状细胞化生并分泌黏液,I L -5主要作用是促进嗜酸粒细胞募集并导致气道炎症㊁气流受限㊁气道高反应性,无论是儿童早发型哮喘还是成人迟发型哮喘都伴随着嗜酸粒细胞的增高,I L -5抗体有效并已经在临床上运用[11]㊂本研究检测了I L -5和I L -13,发现L P S 能阻碍O V A 诱导小鼠产生T h 2型细胞因子I L -5和I L -13,但L P S 1组和L P S -2组的T h 2型细胞因子2组之间差异无统计学意义㊂注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;L P S 为脂多糖;每组小鼠4~5只;与N S 组嗜酸粒细胞比较,a P <0 01;与O V A 组嗜酸粒细胞比较,b P <0 01图7 肺泡灌洗液中各组间中性粒细胞㊁嗜酸粒细胞㊁巨噬细胞㊁淋巴细胞比较I L -6是早期的炎症因子,通过与I L -6受体g p130结合,调控J A K /S T A T 信号通路参与众多炎症反应,调控T 细胞的增殖㊁存活和分泌并调节其效应细胞因子的产生,影响T h 1型和T h 2型细胞增殖和活性[12]㊂I L -10是重要的抑炎因子,属于I L -10家族,通过J A K /S T A T 信号通路调控免疫,虽然几乎所有的T 细胞亚群都能够分泌I L -10,但对于调节性T 细胞来说尤为重要,来源于胸腺的F o x p 3+T r e g 细胞能够分泌IL -10抑制免疫应答[13]㊂有研究表明金黄色葡萄球菌特异的T h 17细胞产生大量的I L -17,但不产生I L -10,但当在激活状态(刺激后3~5d )测试时,相同的细㊃318㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.胞产生高水平的I L -10,同时瞬时降低I L -17的产生,推断I L -10产生的延迟动力学可能是由于需要重塑I L -10位点以允许转录[14-15]㊂注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;每组小鼠4~5只;与N S 组比较,a P <001;与O V A 组比较,b P <0 05,cP <001图8 肺组织匀浆用酶联免疫吸附试验检测I L -6注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;每组小鼠4~5只;与N S 组比较,a P <001;与O V A 组比较,bP <005图9 肺组织匀浆用酶联免疫吸附试验检测I L -5因此在时间节点的选择上,我们选择了提前3d或6d 这个节点,在实验中我们发现,提前给予小剂量1μg L P S 的L P S 2组能够促进C D 4+F o x p3+细胞增殖㊂我们还发现与致敏滴鼻1次相比,提前给予小剂量联合中等剂量L P S 滴鼻的小鼠比单纯致敏前滴鼻1次的小鼠嗜酸粒细胞数量更低,T r e g 细胞数量也较多㊂但是LP S 1组和L P S 2组为何存在差异的具体机制仍然不清楚,可能与L P S 给药时间和剂量有关㊂L P S 结构和作用非常复杂,L P S 被机体识别可能涉及的细胞信号通路包括核因子激活的B 细胞的κ-轻链增强途径㊁干扰素调节因子3途径㊁J A K /S T A T 途径㊁丝裂原活化蛋白激酶途径等[16-19],我们将继续探索L P S干预免疫调控的相关机制,为哮喘的防治提供新的思路㊂利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;每组小鼠4~5只;与N S 组比较,a P <001;与O V A 组比较,bP <005图10 肺组织匀浆用酶联免疫吸附试验检测I L -13注:N S 组为生理盐水阴性对照组;O V A 组为卵清蛋白组;L P S 1组为L P S 给药1次组;L P S 2组为L P S 给药2次组;每组小鼠4~5只;与O V A 组比较,a P <005图11 肺组织匀浆用酶联免疫吸附试验检测I L -10参考文献1 F a h y J V T y p e2i n f l a mm a t i o ni na s t h m a --pr e s e n t i n m o s t a b s e n t i n m a n y J N a tR e vI mm u n o l 2015 15 1 57-65 D O I 10 1038 n r i 37862 L a m b r e c h t B N H a mm a dH T h e a i r w a y e pi t h e l i u mi n a s t h m a J N a t M e d 2012 18 5684-692 D O I 10 1038 n m 27373 D i n g F L i u B Z o u W e ta l L P S e x p o s u r ei n e a r l y li f e p r o t e c t sa g a i n s t m u c u sh y pe r s e c r e t i o ni no v a l b u m i n -i n d u c e d a s t h m ab y d o w n -r e g u l a t i o n o ft h eI L -13a n dJ A K -S T A T 6p a t h w a y s J C e l lP h ys i o lB i o c h e m 2018 46 3 1263-1274 D O I 10 1159 000489109㊃418㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图12 各组肺组织单细胞悬液调节性T 细胞比例 A 生理盐水阴性对照组 B 卵清蛋白组 C 脂多糖给药1次组 D 脂多糖给药2次组 4 I l l i S D e pn e rM G e n u n e i t J e t a l P r o t e c t i o n f r o mc h i l d h o o d a s t h m a a n d a l l e r g y i n a l pi n e f a r m e n v i r o n m e n t s -t h e G A B R I E La d v a n c e ds t u d i e s J J A l l e r g y C l i nI mm u n o l 2012 129 6 1470-1477 e 6 D O I 10 1016 j j a c i 2012 03 0135 B e u t l e r B R i e t s c h e l E T I n n a t e i mm u n e s e n s i n g an d i t s r o o t s t h e s t o r y o f e n d o t o x i n J N a t R e v I mm u n o l 2003 3 2 169-176 D O I 10 1038 n r i 1004 6 H u n t e rC A J o n e sS A I L -6a sak e y s t o n ec yt o k i n e i nh e a l t h a n dd i s e a s e J N a t I mm u n o l 2015 16 5448-457 D O I 10 1038 n i 31537 N a k a ya m aT H i r a h a r a K O n o d e r a A e ta l T h 2c e l l si n h e a l t ha n dd i s e a s e JA n n uR e vI mm u n o l 2017 35 53-84 D O I 10 1146 a n n u r e v -i mm u n o l -051116-0523508 O u y a n g W O 'G a r r aA I L -10f a m i l y c yt o k i n e s I L -10a n d I L -22 f r o m b a s i cs c i e n c et oc l i n i c a l t r a n s l a t i o n J I mm u n i t y 2019 50 4 871-891 D O I 10 1016 j i mm u n i 2019 03 0209 H o o p e rL V D os y m b i o t i cb a c t e r i as u b v e r th o s ti mm u n i t yJ N a tR e v M i c r o b i o l 2009 7 5 367-374 D O I 10 1038 n r m i c r o 211410 R a t h i n a m V A K Z h a o Y S h a o F I n n a t e i mm u n i t y to i n t r a c e l l u l a rL P S J N a tI mm u n o l 2019 20 5 527-533 D O I 10 1038 s 41590-019-0368-311 Le c k i e M J t e n B r i n k e A K h a n J e t a l Ef f e c t s o f a n i n t e r l e u k i n -5b l o c k i ng m o n o c l o n a la n t i b o d y o ne o s i n o phi l s a i r w a y h y p e r -r e s p o n s i v e n e s s a n d t h e l a t ea s t h m a t i c r e s p o n s e J L a n c e t 2000 356 92482144-2148 D O I 10 1016 s 0140-6736 00 03496-6 12 R i n c ón M A n gu i t aJ N a k a m u r aT e t a l I n t e r l e u k i n I L -6d i r e c t s t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f I L -4-p r o d u c i n g CD 4+Tc e l l s J JE x p M e d 1997 185 3 461-469 D O I 10 1084 j e m 185 3 46113 Sh o u v a l D S B i s w a s A G o e t t e l J A e t a l I n t e r l e u k i n -10r e c e p t o r s i g n a l i n g i ni n n a t ei mm u n ec e l l sr e g u l a t e s m u c o s a l i mm u n e t o l e r a n c e a n d a n t i -i n f l a mm a t o r y m a c r o p h a g e f u n c t i o n J I mm u n i t y 2014 40 5 706-719 D O I 10 1016 ji mm u n i 2014 03 01114 D o n g J I v a s c uC C h a n g H De t a l I L -10i s e x c l u d e df r o mt h e f u n c t i o n a lc y t o k i n e m e m o r y o f h u m a n C D 4+m e m o r y Tl y m p h o c yt e s J J I mm u n o l 2007 179 4 2389-2396 D O I 10 4049 ji mm u n o l 179 4 2389 15 Z i e l i n s k iC E M e l e F A s c h e n b r e n n e r D e t a l P a t h o ge n -i n d u c e dh u m a n T H 17c e l l s p r o d u c eI F N -γo r I L -10a n da r e r e g u l a t e db y I L -1β J N a t u r e 2012 484 7395 514-518 D O I 10 1038 n a t u r e 1095716 S h a k h o v A N C o l l a r t MA V a s s a l l iP e ta l K a p p a B -t y pe e n h a n c e r s a r e i n v o l v e d i n l i p o p o l ys a c c h a r i d e -m e d i a t e d t r a n s c r i p t i o n a la c t i v a t i o no f t h et u m o rn e c r o s i sf a c t o ra l p h a g e n e i n p r i m a r y m a c r o p h a g e s J JE x p Me d 1990 171 1 35-47 D O I 10 1084 je m 171 1 35 17 H a nJ L e eJ D B i b b sL e ta l A MA P k i n a s et a r g e t e db ye n d o t o x i n a n d h y p e r o s m o l a r i t y i n m a mm a l i a n c e l l s J S c i e n c e 1994 265 5173808-811 D O I 10 1126 s c i e n c e 791403318 Ha mb l e t o n J W e i n s t e i nS L L e m L e t a l Ac t i v a t i o no f c -J u n N -t e r m i n a lk i n a s ei n b a c t e r i a ll i p o p o l ys a c c h a r i d e -s t i m u l a t e d m a c r o p h a ge s J P r o c N a t lA c a dS c iU S A 1996 93 7 2774-2778 D O I 10 1073 pn a s 93 7 2774 19 He r r e r a -V e l i t PK n u t s o nK LR e i n e rN EP h o s p h a t i d y l i n o s i t o l 3-k i n a s e -d e pe n d e n ta c t i v a t i o nof p r o t e i n k i n a s eC -z e t ai n b a c t e r i a ll i p o p o l y s a c c h a r i d e -t r e a t e d h u m a n m o n o c yt e s J JB i o lC h e m 1997 272 26 16445-16452 D O I 10 1074 jb c 272 26 16445 收稿日期 2019-11-25㊃518㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第11期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .11Copyright ©博看网. 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LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立

LPS 与ATP 共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立①刘慧玲吴传新② 龙贤梨李丽李飞郭晖孙航（重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所，重庆 400010）中图分类号 R392.1 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2023）10-2028-06［摘要］目的：探索脂多糖（LPS ）和三磷酸腺苷（ATP ）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。

方法：采用流式细胞仪F4/80和CD -11b 染色检测巨噬细胞纯度，Annexin V -PE/7-AAD 双染色法筛选出LPS 和ATP 共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。

巨噬细胞随机分为control 组、LPS 组、ATP 组和LPS+ATP 组；Western blot 检测GSDMD 、caspase -1、caspase -11、NLRP3、ASC 、pro -IL -1β、pro -IL -18和HMGB1蛋白表达水平；ELISA 检测培养上清中IL -1β和TNF -α表达水平；透射电镜（TEM ）和扫描电镜（SEM ）观察巨噬细胞焦亡形态。

结果：巨噬细胞的纯度达到90%；500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h 为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式；LPS+ATP 组的GSDMD 、caspase -1、caspase -11、NLRP3、ASC 、pro -IL -1β、pro -IL -18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组（P <0.05）；培养上清中IL -1β和TNF -α表达量显著高于对照组（P <0.05）；电镜下可观察到明显的焦亡特征。

结论：成功建立了LPS 和ATP 共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞的焦亡模型，为深入探讨免疫细胞焦亡的分子机制提供了稳定的细胞模型。

［关键词］ LPS ；ATP ；细胞焦亡；原代腹腔巨噬细胞；脓毒症Establishment of pyroptosis model on primary peritoneal macrophages induced by LPS and ATPLIU Huiling ， WU Chuanxin ， LONG Xianli ， LI Li ， LI Fei ， GUO Hui ， SUN Hang. Institute for Viral Hepatitis , the Second Affiliated Hospital ， Chongqing Medical University ， Chongqing 400010， China［Abstract ］ Objective ：To explore optimal condition of a model of pyroptosis on primary peritoneal macrophages induced by thelipopolysaccharide （LPS ） and adenosine triphosphate （ATP ）. Methods ：Purity of macrophages was detected by flow cytometric with F4/80 and CD11-b ， and Annexin V -PE/7-AAD double staining was used to detect pyroptosis cell for screening the optimum concentra‑tion and time of pyroptotic cells induced by LPS and ATP. Macrophages were randomly divided into control group ， LPS group ， ATP group and LPS+ATP group. Expressions of GSDMD ， caspase -1， caspase -11， NLRP3， ASC ， pro -IL -1β， pro -IL -18 and HMGB1 proteins were detected by Western blot. Levels of IL -1β and TNF -α in culture supernatant were measured by ELISA. Structure of pyroptosis macrophages was observed by transmission electron microscope （TEM ） and scan electron microscope （SEM ）. Results ：Purity of primary peritoneal macrophages could be 90%； 500 ng/ml LPS 24 h and 5 mmol/L ATP 4 h was the optimal combination of inducing macrophages pyroptosis. Compared with control group ， LPS and ATP group had significantly increased protein expressions of GSDMD ， caspase -1， caspase -11， NLRP3， ASC ， pro -IL -1β， pro -IL -18 and HMGB1 （P <0.05）， and levels of IL -1β and TNF -α in culture supernatant were significantly higher than that in control group （P <0.05）； structure of pyroptosis macrophages could be obviously observed by TEM and SEM. Conclusion ：Pyroptosis model of primary peritoneal macrophages induced by LPS and ATP is successfully established ， whichprovides a cell model for exploring the molecular mechanism of pyroptosis on immune cells in the future.［Key words ］ LPS ；ATP ；Pyroptosis ；Primary peritoneal macrophages ；Sepsis细胞焦亡是一种依赖半胱天冬蛋白酶（caspase -1/-4/-5/-11）活化的炎症细胞死亡方式，其形态介于细胞凋亡和细胞坏死之间，且细胞焦亡的发生机制和调控机制与凋亡和坏死大不相同［1］。

槲皮素对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的作用机制

槲皮素对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的作用机制汤海波;杨萍【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2016(032)004【摘要】目的：探讨槲皮素对内毒素（Lipopolysaccharide， LPS）诱导的急性肺损伤作用及机制。

方法：检测氧分压（PaO2），二氧化碳分压（PaCO2），呼吸频率（RR）、酸碱度（pH）、IL-6、IL-1β、TNF-α、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3表达以及肺组织病理变化和干／湿比（D／W）。

结果：槲皮素能明显减轻肺组织病理改变，降低PaCO2，RR，IL-6、IL-1β、TNF-α、p- JAK2和p-STAT3表达，增加PaO2，pH和D／W，但对JAK2和STAT3表达无影响。

结论：槲皮素组预处理可通过抑制JAK2／STAT3信号通路激活而改善气体交换功能，抑制炎性介质的释放，从而减轻LPS诱导的急性肺损伤。

%Objective To investigate the effect and mechanism of quercetin in LPS-induced acute lung injury. Methods The PaO2, PaCO2, RR and pH, the expression of IL-6、IL-1β、 TNF-α、 JAK2、 STAT3、 p-JAK2、 p-STAT3, the pathological change and Dry/Wet of Lung tissues were evaluated in rats. Results Quercetin can significantly decrease the pathological change of Lung tissues, the PaCO2, RR and the expression of IL-6、IL-1β、 TNF-α、 p-JAK2 and p-STAT3 with increasing the PaO2, pH and D/W. Therefore, with on influence on the expression of JAK2. Conclusion Quercetin pretreatment decreased LPS-induced acute lung injury by suppressing JAK2/STATA3 signallingto improve exchange ability though reducing inflammation.【总页数】4页(P531-534)【作者】汤海波;杨萍【作者单位】610000 成都市，四川大学华西第四重症监护室;610000 成都市，四川大学华西第四重症监护室【正文语种】中文【相关文献】1.瑞芬太尼缓解氧化应激对内毒素诱导的SD大鼠急性肺损伤的保护作用 [J], 高聪;林大勇;刘兵;陈峰2.瑞芬太尼对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠氧自由基、炎症因子及肺纤维化的影响[J], 刘宇; 李耀; 万永灵3.粪菌移植对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠Keap1-Nrf2/ARE信号通路的影响 [J], 谭乂珉;汪玉磊;李波;尹国芳;范贤明4.金纳多对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的保护作用机制研究 [J], 肖跃群;郭争鸣;陈懿;罗自强5.胍丁胺对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的治疗效果 [J], 孙惠萍;徐惠娟;戴加乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

LPS诱导鼠急性肺损伤模型的评价分析

LPS诱导鼠急性肺损伤模型的评价分析急性肺损伤（Acute lung injury，ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是通过干扰与肺泡毛细血管屏障有关的临床急危重症。

过去由于对ALI和ARDS机制研究不清、临床上没有针对性治疗方法，导致疾病的死亡率很高。

近年来，随着利用脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）创建ALI动物模型实验的研究的不断深入，在ALI模型的建立及其机制方面有了较新的进展，新的研究指导临床有望降低ALI和ARDS的死亡率。

本文对LPS诱导鼠急性肺损伤不同模型进行评价分析，以便广大研究者对急性肺损伤动物模型建立和研究提供进一步认识，为前临床研究提供动物实验基础。

目前，在已發表通过对急性肺损伤动物模型的实验研究中，研究人员发现活化多形核白细胞（polymorphonuclear leukocyte，PMN）在肺组织内的聚集的现象，在ALI和ARDS的发展中发挥关键作用[1-2]。

然而PMN移动到肺部不同部位引起ALI和ARDS的原理尚未完全阐明。

目前用于研究PMN与ALI和ARDS 的关系主要方法为在LPS诱导下复制肺损伤鼠模型[3-4]，来阐明LPS刺激对化学引诱物的反应增加炎症部位的PMN迁移的作用。

虽然单独使用LPS没有预先考虑存在的疾病、液体复苏或机械通气等客观条件的存在[5-6]，无法反映整体人类疾病的复杂性，但是通过对鼠肺损伤模型过程的，能够在一定程度上反映模拟体内ALI和ARDS的病理生理状态[7]，为前临床研究提供研究思路。

本文就LPS 急性肺损伤模型建立总结和分析，为前临床研究提供动物实验基础提供合适的参考。

1 LPS诱导下复制肺损伤机制内毒素模型的基础：LPS是一种糖脂，是存在于组成革兰氏阴性细菌的外膜中的极性脂质头组（脂质A）和链重复二糖[8]。

LPS大多数的生物学效应是由脂质A复制的，即使存在或不存在寡糖O抗原的影响。

22电源。转膜电流为90mA转膜...

分类号R772.1 学校代码10601 密级公开编号Y1002072硕士学位论文rhEPO对宫内炎性暴露和高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及PI-3K，AKT表达的影响学科专业: 内科学研究方向: 新生儿危重症研究生姓名: 刘漫君学号: Y1002072学位类型科学学位导师姓名: 张华教授二O一三年三月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。

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（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日目录中文摘要 (Ⅰ)ABSTRACT (Ⅲ)英汉缩略词对照表 (Ⅵ)前言 (1)1 材料与方法 (2)1.1实验材料 (2)1.2主要试剂 (3)1.3主要试剂的配制 (3)1.4主要实验仪器 (6)1.5 实验方法 (7)1.5.1建立动物模型及分组 (8)1.5.2 LPS孕囊注射方法........................................................ (8)1.5.3高氧干预方法........................................................ .. (8)1.5.4 rhEPO治疗方法 (9)1.5.5 灌注固定和取材................................ .. (9)1.5.6 肺组织石蜡切片的制作 (9)1.5.7 肺组织切片HE染色 (10)1.5.8 采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡 (11)1.5.9 肺组织PI-3K/Akt 通路mRNA表达 (12)1.5.9.1 肺组织总RNA提取过程 (12)1.5.9.2 提取的RNA浓度、纯度、完整性测定 (14)1.5.9.3 逆转录过程 (14)1.5.9.4 PCR扩增步骤 (15)1.5.9.5 PCR结果检测 (16)1.5.10 采用蛋白印迹方法检测PI-3K/AKT通路蛋白质的表达 (17)1.5.10.1肺组织总蛋白质的提取 (17)1.5.10.2 采用BCA法检测肺组织的蛋白质浓度 (18)1.5.10.3 制备电泳凝胶 (19)1.5.10.4 准备蛋白样品 (20)1.5.10.5 目的蛋白AKT和pAKT蛋白质电泳 (21)1.5.10.6 目的蛋白AKT和pAKT蛋白质转膜 (21)1.5.10.7 目的蛋白AKT和pAKT蛋白质免疫杂交 (22)1.5.10.8 目的蛋白AKT和pAKT蛋白检测 (22)1.5.10.9 Western印迹蛋白条带积分光密度分析 (23)1.6 统计分析 (23)2. 结果 (23)2.1 各组新生大鼠肺组织形态学情况 (23)2.2各组新生大鼠肺组织细胞凋亡的表达 (23)2.3肺组织PI-3K/AKT通路mRNA表达情况 (24)2.4 肺组织PI3K/Akt通路相关蛋白的表达情况 (25)3. 讨论 (25)4. 结论 (28)参考文献 (28)附表 (31)附图 (33)综述 (45)综述参考文献 (51)攻读学位期间发表的学术论文目录和参与研究的科研课题 (56)致谢 (57)rhEPO对宫内炎性暴露和高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及PI-3K，AKT表达的影响中文摘要目的：探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对宫内炎性暴露和高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡，磷酯酰肌醇-3激酶（PI-3K）和蛋白激酶B（AKT）表达的影响，为临床治疗新生儿支气管肺发育不良（BPD）提供理论依据。

有氧运动改善慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的机制分析

第 44 卷第 10 期 2023 年 10 月安徽医学Anhui Medical Journal有氧运动改善慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的机制分析叶和江王巧云田学敏王保健［摘要］　目的　探讨有氧运动通过影响肺部炎症调控慢性阻塞性肺疾病（COPD ）大鼠肺功能的机制。

方法　建立COPD 大鼠模型并分为对照组和运动组。

运动组进行9周跑台运动；对照组不干预。

检测两组大鼠第1秒用力呼气量（FEV1）、用力呼气量（FVC ）、最大呼气中段流速（MMEF ）、呼气峰流速（PEF ）。

处死大鼠进行HE 染色，采用Western blot 法检测肺组织的趋化素（CHEM ）、趋化因子受体-1（CMKLR1）、白细胞介素（IL ）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF ）-α蛋白表达水平。

结果　运动组大鼠MMEF 、PEF 高于对照组（P <0.05）；两组大鼠FEV1、FVC 水平接近（P >0.05）。

运动组大鼠肺组织CHEM 、IL-1β、IL-8蛋白表达高于对照组，CMKLR1低于对照组（P <0.05）；两组肺组织IL-6、TNF-α蛋白表达接近（P >0.05）。

结论　有氧运动可改善COPD 大鼠肺功能及肺组织病理损害，且这一作用与有氧运动对炎症的抑制作用有关。

［关键词］有氧运动；慢性阻塞性肺疾病；肺功能；炎症反应；信号通路doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2023.10.005Mechanism analysis of aerobic exercise improving pulmonary function in rats with chronic obstructive pulmonary disease YE Hejiang ，WANG Qiaoyun ，TIAN Xuemin ，WANG BaojianDepartment of Respiratory Medicine ， 988 Hospital ， Joint Logistic Support Force ， Chinese People ’s Liberation Army ， Zhengzhou 450007， ChinaFunding project ： Medical Science and Technology Research Project of Henan Province （No.LHGJ20190867）Corresponding author ：WANG Baojian ，*****************[Abstract ] Objective To explore the mechanism of aerobic exercise regulating lung function in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) rats through its effect on pulmonary inflammation. Methods The COPD rat model was established and divided into control group andexercise group. The exercise group ran the table for nine weeks. The control group received no intervention. Forced expiratory volume in onesecond(FEV1), forced expiratory volume (FVC), maximum mid-expiratory flow rate (MMEF) and peak expiratory flow rate (PEF) of the twogroups were detected. The rats were sacrificed for HE staining, and the expression levels of chemokine (CHEM), chemokine receptor-1 (CMKLR1), interleukin (IL) -1β, IL-6, IL-8 and tumor necrosis factor (TNF) -α in lung tissues were detected by Western blot. Results The MMEF and PEF in the exercise group were higher than those in the control group (P <0.05). The levels of FEV1 and FVC in the two groups were close (P >0.05). The expression of CHEM, IL-1β and IL-8 protein in lung tissue of the exercise group was higher than that of the control group, and CMKLR1 was lower than that of the control group (P <0.05). The expressions of IL-6 and TNF-α in lung tissue were similar between the two groups (P >0.05).Conclusion The aerobic exercise can improve lung function and pathological damage of lung tissue in COPD rats, andthis effect is related to the inhibitory effect of aerobic exercise on inflammation.［Key words ］ Aerobic exercise; Chronic obstructive pulmonary disease; Lung function; Inflammatory response; Signaling pathway慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonarydisease ，COPD ）为常见呼吸系统疾病，目前40岁以上人群的COPD 患病率已达15%左右［1］。

LPS诱导小鼠急性肺损伤TLR4及TNF―α表达

LPS诱导小鼠急性肺损伤TLR4及TNF―α表达【摘要】目的：研究脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤机制。

方法：实验分为正常对照组、模型组及抗体组；正常对照组小鼠腹腔腔内注射等量0.9%NaCl。

模型组腹腔内注射LPS（4 mg/kg）。

抗体组在造模前8～10 h，应用小鼠Toll样受体4/髓样分化蛋白2（TLR4/MD2）复合物抗体腹腔内注射50 μg。

各组均在造模5 h后留取血和肺组织，采用细菌内毒动态浊度法检测血浆LPS的含量，HE染色判定小鼠肺组织病理变化，RT-PCR测定小鼠肺组织TLR4基因表达，Western-blot测定TLR4蛋白表达；ELISA检测小鼠血清中TNF-α的水平。

结果：和正常对照组比较，模型组及抗体组小鼠血浆内毒素含量显著升高（P<0.05），模型组小鼠肺组织HE染色呈ALI表现；和模型组比较，抗体组TLR4 mRNA、蛋白及TNF-α的表达明显下调（P<0.05）。

结论：急性肺损伤机制可能与LPS和TLR4受体结合介导TNF-α信号途径相关。

【关键词】脂多糖；急性肺损伤； Toll样受体4；肿瘤坏死因子-αExpression of Toll Like Receptor 4 and TNF-α on Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide inMice/GU Zhi-long，JIANG Hua-mao，HU Zhan-sheng.//Medical Innovation of China，2015，12（24）：016-019【Abstract】 Objective：To study mechanism of acute lung injury induced by lipopolysaccharide in mice.Method：The mice were randomly divided into normal control group， model group and antibody group.Control group was given 0.9%NaCl. Model group of acute lung injury was induced by LPS at a dose of 4 mg/kg. Aitibody group mice were given anti-TLR4/MD antibody（50 μg）before 8-10 h of building model group. Blood and lung tissue were taken after modeling in 4 hours. A mount of endotoxin in plasma was measured by kinetic turbidimetric assay.Degree of lung damage was grated by HE staining. Expressions of TLR4 at both mRNA and protein levels were measured by RT-PCR and Western Blot.Content of TNF-α in mice serum was detected by ELISA.Result：Compared with the control group，endotoxin in serum，in model group and ayibody group significantly increased（P<0.05），with obvious ALI lung damages in model pared with the model group，antibody group presented that expression of TLR4 mRNAand protein lower regulated（P<0.05） and ELISA results of TNF-αsignificantly decreased （P<0.05）.Conclusion：The mechanism of acute lung injury induced by lipopolysaccharide may be related to TLR4 signal passway that mediates the TNF-α level.【Key words】 Lipopolysaccharide； ALI； Toll like receptor 4； TNF-αFirst-author’s address：The First Affiliated Hospital of Liaoning Medical College，Jinzhou 121001，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.24.006 急性肺损伤（Acute Lung Injury，ALI）是在创伤、重症感染、休克等等非心源性疾病过程中，肺泡上皮细胞和肺毛细血管内皮细胞损伤造成的弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭[1]；脂多糖（LPS）诱导的ALI在重症感染后早期出现[2]，并且死亡率较高[3]。

叔丁基对苯二酚对急性肺损伤小鼠的保护作用

叔丁基对苯二酚对急性肺损伤小鼠的保护作用陈冠楠;魏娟;刘美云;周焕平;吕欣【摘要】目的探究叔丁基对苯二酚(tBHQ)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中调节炎症反应的作用和机制.方法通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立C57BL/6J小鼠ALI模型,将C57BL/6J雄性小鼠随机分组.LPS组小鼠按两种剂量(10 mg/kg和20 mg/kg)腹腔注射,高剂量组观察小鼠生存率,低剂量组观察炎症反应;磷酸盐缓冲液(PBS)组小鼠给予等体积PBS腹腔注射;tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠预先24h腹腔给予tBHQ并在LPS处理的同时给予tBHQ;LPS/tBHQ组小鼠在LPS处理的同时给予tBHQ.监测7d生存率;LPS诱导3h后病理组织学观察评估其肺组织损伤程度,实时定量PCR(RT-qPCR)和多重液相蛋白定量技术分别检测小鼠肺组织和血清中IL-6、TNF-α和IL-10的水平,Western印迹法和RT-qPCR检测各组小鼠肺组织中核外转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)的表达.结果与LPS组相比,LPS/tBHQ组和tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠的死亡率均明显降低(P分别为0.0005和0.0001),并且小鼠肺组织损伤程度明显减轻,小鼠肺组织和血清中促炎症介质IL-6和TNF-α的表达降低,抗炎介质IL-10的表达增加;同时与LPS组相比,tBHQ可明显增加肺组织中Nrf2的mRNA水平以及核内蛋白水平.结论 tBHQ能够通过调节小鼠肺组织中促炎、抑炎反应平衡发挥对ALI的保护作用,其机制可能与促进Nrf2核转位有关.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2019(040)001【总页数】6页(P22-27)【关键词】急性肺损伤;急性呼吸窘迫综合征;叔丁基对苯二酚;核外转录因子NF-E2相关因子;炎症反应【作者】陈冠楠;魏娟;刘美云;周焕平;吕欣【作者单位】同济大学附属上海市肺科医院麻醉科,上海200433;同济大学附属上海市肺科医院麻醉科,上海200433;同济大学附属上海市肺科医院麻醉科,上海200433;同济大学附属上海市肺科医院麻醉科,上海200433;同济大学附属上海市肺科医院麻醉科,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R453.9急性肺损伤(acute lung injury, ALI)及其严重形式急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是临床上常见的急危重症。

LPS联合z-VAD-FMK介导IFN-γ预处理巨噬细胞发生程序性坏死

LPS联合z-VAD-FMK介导IFN-γ预处理巨噬细胞发生程序性坏死章述军;肖晴;黄文祥【摘要】目的:探讨脂多糖(LPS)联合z-VAD-FMK介导M1亚型巨噬细胞程序性坏死的机制.方法:使用佛波酯(PMA)和干扰素γ(IFN-γ)诱导THP-1细胞系分化得到M0和M1亚型巨噬细胞.以LPS(100μg/L)分别处理M0和M1巨噬细胞,检测不同时点的乳酸脱氢酶释放和DNA断裂情况,并观察不同抑制剂的影响.采用Western blot法检测受体相互作用蛋白(RIP)1、RIP3、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、P38和NOD样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白水平.结果:LPS能够诱导M1亚型巨噬细胞发生死亡,联合z-VAD-FMK可特异性介导M1亚型巨噬细胞发生程序性坏死,而对M0亚型巨噬细胞无此作用.IFN-γ能够上调RIP3表达,并增强LPS介导的JNK磷酸化,RIP3和JNK抑制剂可部分阻断LPS联合z-VAD-FMK介导的M1亚型巨噬细胞程序性坏死.结论:IFN-γ上调RIP3和增强LPS介导的JNK磷酸化,使得LPS联合z-VAD-FMK能特异性诱导经过IFN-γ预处理的巨噬细胞发生程序性坏死.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)009【总页数】7页(P1653-1659)【关键词】程序性坏死;干扰素γ;巨噬细胞;脂多糖;z-VAD-FMK【作者】章述军;肖晴;黄文祥【作者单位】重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆市传染病与寄生虫重点实验室,重庆400016;重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆市传染病与寄生虫重点实验室,重庆400016;重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆市传染病与寄生虫重点实验室,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R392.32;R363巨噬细胞是天然免疫的重要成员之一，在感染、自身免疫疾病和肿瘤的发生发展中均起着十分重要的作用，根据诱导其分化的细胞因子的种类和细胞功能的不同，主要包括M1和M2亚型。

表观遗传修饰在支气管肺发育不良发病机制中作用的研究进展

第47卷第6期2021年11月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.47No.6Nov.2021DOI：10.13481/j.1671‑587X.20210634表观遗传修饰在支气管肺发育不良发病机制中作用的研究进展Research progress in role of epigenetic modification in pathogenesis of bronchopulmonary dysplasia霍梦月,梅花（内蒙古医科大学附属医院新生儿科，内蒙古呼和浩特010050）［摘要］支气管肺发育不良（BPD）是早产儿常见的慢性呼吸系统危重疾病之一。

BPD的发病机制涉及遗传因素和环境因素之间复杂的相互作用，而表观遗传学则在整合遗传因素与环境因素中起关键作用。

目前国内外关于表观遗传修饰在BPD形成过程中作用的研究较少，现就DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA（ncRNA）等表观遗传修饰在BPD发病机制中的作用进行阐述，为BP发病机制的研究提供新思路。

［关键词］支气管肺发育不良；DNA甲基化；组蛋自修饰；微小RNA；长链非编码RNA［中图分类号］R722.19［文献标志码］A支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）多见于小早产儿或极低出生体质量儿，是目前新生儿科最常见且最棘手的呼吸系统危重疾病之一。

随着近年来产前生育管理工作的完善和产后新生儿救治水平的不断提高，早产儿的生存率逐年升高，但BPD的发病率并未降低却呈逐年上升的趋势［1-2］。

BPD不仅发病率高，其严重的远期后遗症也是临床医生必须面对的问题［3］。

当前BPD的治疗方式主要为对症支持治疗，尚无一项特异性治疗能改善BPD患儿的症状和远期预后［4］，因此，深入研究BPD的发病机制，明确如何早期预测BPD，寻找有效的防治手段对提高早产儿存活率、减少儿童致残率和提升儿童生活质量具有重要意义。

211246891_PTEN抑制剂BPV通过下调细胞焦亡水平改善LPS诱导的急性肺损伤

doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.05.003PTEN抑制剂BPV通过下调细胞焦亡水平改善LPS诱导的急性肺损伤①李瑞晟王琴李晶晶穆清爽（新疆医科大学第二附属医院干部一科，乌鲁木齐 830063）中图分类号R563 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）05-0911-06［摘要］目的：探究第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因（PTEN）抑制剂过氧化氢氧化矾酸钾（BPV）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）的影响及作用机制。

方法：将60只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham 组）、BPV组、LPS组和BPV+LPS组，其中又将LPS组分为LPS刺激后6 h、12 h、24 h、48 h组；Western blot检测LPS各组小鼠肺组织中PTEN蛋白表达变化；检测小鼠肺组织湿/干重（W/D），分析Sham组，BPV组、LPS组及BPV+LPS组小鼠肺组织水肿情况；HE染色观察4组小鼠肺组织病理学改变；ELISA和流式细胞术分别检测4组小鼠肺组织灌洗液（BALF）中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平及巨噬细胞数量变化；组织免疫荧光染色检测各组小鼠肺泡巨噬细胞中pyrin结构域NLRP3表达；Western blot检测4组小鼠肺组织中NLRP3介导的焦亡途径中NLRP3、caspase-1 p10、ASC和GSDMD p30蛋白表达及PTEN/ Akt/NF-κB信号通路中PTEN蛋白、Akt s473的磷酸化水平及TLR4和NF-κB p65的蛋白表达。

结果：与Sham组相比，LPS能以时间依赖性刺激小鼠肺组织中PTEN表达，且作用24 h的促进效果最为显著（P<0.01），并诱导小鼠肺组织损伤（P<0.05），促进BALF中巨噬细胞比例及炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α表达（P<0.05或P<0.01），同时肺组织巨噬细胞中NLRP3表达明显增加（P<0.05）；与LPS组相比，BPV+LPS组小鼠肺组织损伤明显减轻（P<0.05），BALF中上述炎症因子表达水平显著降低（P< 0.05），肺泡巨噬细胞中NLRP3表达亦明显降低（P<0.05）。

LPS诱导的巨噬细胞来源外泌体促进巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬

LPS诱导的巨噬细胞来源外泌体促进巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬方芳;杨珂佳;王瑞祥;钱中清【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2024(49)4【摘要】目的:探讨LPS诱导的巨噬细胞来源外泌体对巨噬细胞抗结核分枝杆菌(M.tb)自噬的作用及机制研究。

方法:使用THP-1细胞诱导建立H37Ra感染巨噬细胞模型,抽提并鉴定巨噬细胞外泌体;抽提LPS诱导的巨噬细胞外泌体与H37Ra 感染巨噬细胞共培养,使用Dil荧光标记外泌体,荧光显微镜观察外泌体吸收情况,采用荧光定量PCR、流式细胞术、Western blotting等方法,明确外泌体对巨噬细胞抗M.tb自噬的影响。

结果:成功抽提并鉴定LPS刺激的巨噬细胞外泌体,吸收普通外泌体的巨噬细胞自噬水平无明显变化,吸收LPS诱导的外泌体后的巨噬细胞其自噬水平显著提高,共培养时加入外泌体抑制剂后促进巨噬细胞自噬作用消失;H37Ra 感染的巨噬细胞吸收LPS诱导的外泌体后,其自噬水平增强,显著提高对M.tb的杀伤能力及人白细胞介素12的分泌。

结论:LPS诱导的巨噬细胞来源外泌体可促进巨噬细胞抗M.tb自噬。

【总页数】6页(P438-442)【作者】方芳;杨珂佳;王瑞祥;钱中清【作者单位】蚌埠医科大学检验医学院;蚌埠医科大学慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R329.24【相关文献】1.iPSC-MSC来源的外泌体对LPS刺激肺泡巨噬细胞产生炎性因子的影响2.CP-25调控巨噬细胞来源的外泌体分泌对子宫内膜癌Ishikawa细胞系自噬性细胞死亡的影响3.M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1通过激活JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞的极化4.鸟结核分枝杆菌感染巨噬细胞后的外泌体刺激巨噬细胞产生的细胞因子及其蛋白质表达改变5.低氧条件下食管癌来源外泌体调控巨噬细胞M2型分化与自噬的机制研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

低剂量脂多糖对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL-17的影响

低剂量脂多糖对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL-17的影响雷盛钦;胡水婷;程丽;黄小燕【期刊名称】《中国当代医药》【年(卷),期】2017(024)003【摘要】目的探讨低剂量脂多糖(LPS)刺激对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL-17的影响及其机制.方法复制哮喘小鼠模型,体外分离培养脾脏来源的T淋巴细胞,分为对照组和LPS组,其中LPS组又分为LPS1组和LPS2组,分别以1、2 ng/ml的LPS 体外刺激T细胞72 h.对照组以生理盐水代替LPS.采用ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-17水平,观察IL-17的水平浓度变化.结果以低剂量LPS刺激哮喘小鼠T 淋巴细胞后,其培养上清液中IL-17的水平较对照组明显降低,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论低剂量LPS可以抑制哮喘T细胞IL-17的分泌,可能与机体的免疫耐受相关.【总页数】3页(P120-122)【作者】雷盛钦;胡水婷;程丽;黄小燕【作者单位】江西省九江市妇幼保健院&九江市儿童医院耳鼻咽喉科,江西九江332000;江西省九江市妇幼保健院&九江市儿童医院耳鼻咽喉科,江西九江332000;江西省九江市妇幼保健院&九江市儿童医院耳鼻咽喉科,江西九江332000;江西省九江市妇幼保健院&九江市儿童医院耳鼻咽喉科,江西九江332000【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.探讨雷公藤甲素对 BALB／c 哮喘小鼠 IL－23／Th17（IL－17）炎症轴的影响[J], 杨志明;成俊芬;陈鸣娣;梁一波2.实验性哮喘小鼠T淋巴细胞对B淋巴细胞产生特异性IgG的调节作用 [J], 胡素贤;黄瑾3.趋化素对肥胖哮喘小鼠气道IL-17表达的影响 [J], 闫屹;朱述阳;朱洁晨;卞宏4.布地奈德对哮喘小鼠IL-17表达的影响 [J], 张艳霞;王文革5.不同浓度过敏原对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL-5的影响 [J], 孙鲲;王长征因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

抗胆碱药物应用于肺保护的研究

肺保护作用的相关研究
▪ 对于新生大鼠内毒素性ALI，盐酸戊乙奎醚可以抑制内毒素受体 CD14、Toll样受体4（TLR4）表达，阻断炎性信号传导通路，降低炎症介质产生，阻止肺损伤的发展。
▪ 当预先给予盐酸戊乙奎醚可抑制肺组织中核因子-kB（NF-kB）的活化，抑制调控免疫炎性基因转录的NF-kB信号通路，可降低肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-10的表达。
胆碱能受体与抗胆碱药
▪ 抗胆碱能药是指阻断胆碱受体、取消乙酰胆碱的生理效应的药物，其应用于临床的时间较长，种类繁多。其中盐酸戊乙奎醚是一种选择性作用于M1、M3受体亚型，对M2、M4选择性弱的抗胆碱药。
▪ 和目前国内外常用的非受体选择性抗胆碱药阿托品（对M亚型无选择性）相比，盐酸戊乙奎醚具有多方面的优越性，近年来在临床应用中逐渐被认识。
滑肌痉挛，减少腺体分泌，通过保护M2受体对神经系统的反馈性调节作用，即能使交感、副交感系统趋于平衡；
肺保护作用的相关研究
▪ 作用于神经节及中枢的N1受体，对其产生抑制作用，可以使应激的交感神经恢复常态，减少肾上腺素及去甲肾上腺素的释放，解除血管平滑肌痉挛。
▪ 其次，盐酸戊乙奎醚可通过非神经性胆碱能系统抑制免疫细胞炎性介质的产生，从而发挥肺保护作用。
抗胆碱药物应用于肺保护的研究
副标题
前言
▪ 抗胆碱药物盐酸戊乙奎醚在动物模型如内毒素诱导的新生大鼠急性肺损伤以及缺血/再灌注诱发大鼠肺损伤中的重要肺保护机制，以及在临床工作中观察到盐酸戊乙奎醚对围手术期肺损伤的保护作用。
▪ 盐酸戊乙奎醚不仅对肺脏，对心脏、肠道、肾脏、脑组织等器官均有不同程度的保护作用，但是其在损伤后修复过程中的作用机制仍然需要进一步的探索，从而揭秘盐酸戊乙奎醚在临床应用中的价值。