NaCl法提DNA
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
DNA粗提取解读
溶 解 度
0.14mol/L
NaCl浓度
利用该特点，选择适当的盐浓度就能 使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相 反，以达到分离的目的。
提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一 定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实 验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二 步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的 关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步 是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及 高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与 杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整 个实验的结果的检测。
此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。
3、溶解细胞核内的DNA
在浓度较高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚， 游离出的DNA溶解在溶液中。在溶液中加入两倍 体积的浓度为2 mol/L的NaCl溶液，搅拌1 min。 注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。
如果使用植物材料，必须研磨充分。
2、破碎细胞，释放DNA
向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并且搅拌，从 而使血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加
速细胞的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，
但也不蒸能馏太水快对太于猛鸡，血防细止胞打来碎说D是NA一。种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂， 再加释上放搅出拌来的的机大械量作D用N，A和就R加N速A往了往鸡与血蛋细白胞质的 结破合裂在(细一胞起膜，和应核用膜3～的4破层裂纱)布，进从行而过释滤放，出除D去NA一。 些颗粒较大的杂质。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
高中生物实验：DNA的粗提取与鉴定
高中生物实验:DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定实验原理
粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时，DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA溶解度又增大。
扩展资料
纯化原理：DNA不溶于酒精，但细胞中的.某些蛋白质溶于酒精。
鉴定DNA原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
实验材料的选择及处理
(1)不选择猪血等哺乳动物的血液，因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
(2)需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液，防止血液凝固。
(3)需除去鸡血中的血浆，因为血浆中无DNA。
特别提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
DNA提取液配方,粗体方法
主要成分是：NaCl，Tris-HCl（PH=7.4），EDTA（PH=8），SDS。
NaCl，Tris-HCl主要是调节溶液的PH，维持一定的离子浓度,提供一个缓冲液的环境，防止核酸被破坏；EDTA主要是二价金属离子的螯合剂，使影响DNA的DNA酶中的钙离子，锰离子，镁离子等和EDTA结合，使酶失去活性，有利于提取完整DNA；SDS主要是和蛋白质结合，使其变形沉淀，从而利于DNA的提取，减少和清除带白质杂质；裂解细胞！配方：每升中加入EDTA 9.3g， SDS 5g， NaCl 14.6g， Tris 24.2g 相当于Tris 200mM PH=7.4 EDTA 25mM PH=8注意：Tris与EDTA 应当分别配好调PH值器材：灭菌的研磨棒，离心管，配好的DNA提取液，1000ul的移液枪，预冷的异丙醇，离心机，７５％的乙醇，灭超水拟南芥ＤＮＡ粗提步骤；１．选取两片适当大小的叶片放入１．５ｍｌ离心管（已标记）中，用液氮浸没１—２ｓ，取出立刻磨碎至粉末状。
或不用液氮，研磨至匀浆状；２．加入ＤＮＡ提取液８００ｕｌ溶解，同时再次磨样，使之彻底为匀浆，摇匀；３．在１２０００ｒｐｍ条件下，离心１０ｍｉｎ，取上清至另一新离心管（同标记）中，弃去沉淀，（切记：宁少勿沉淀）；４．加入７００ｕｌ异丙醇（－２０℃预冷）至管中，摇晃混匀，然后放置－２０℃下１－２ｈ，或者４℃下过夜，析出ＤＮＡ；５．在１２０００ｒｐｍ下，离心１０ｍｉｎ，弃上清，留沉淀；６．向沉淀中加入７００ｕｌ、７５％的乙醇，进行洗涤，然后在１２０００ｒｐｍ下，离心４ｍｉｎ，重复三次；７．倒出乙醇，在超净工作台上吹干，加入５０ｕｌ灭超水溶解，１２０００ｒｐｍ下，离心４ｍｉｎ，吸取上清液，转至另一新管中备用。
DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.(2).阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.(3).苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。
此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.(4).水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%٠；80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定dna的粗提取与鉴定实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法2、观察提取出来的DNA物质实验原理1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液(5～10mL);体积分数为XX%的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂;烧杯(100mL，1个，50mL， 500mL，各2个)，漏斗，试管(20mL，2个)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1个)，纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排一课时课前准备制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血(约180mL)，用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。
静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。
也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。
用吸管吸去上清液。
板书实验十一 DNA的粗提取与鉴定实验原理1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2、溶解细胞核内的DNA3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4、过滤：取黏稠物5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
高中生物实验—DNA的粗提取和鉴定
鉴定
自变量
比较
加入物质
结果
图示
实验组 对照组
均加入：
丝状
①4 mL二苯胺 物
试剂
(DNA)
②2mol/LNaCl
溶液5 mL
——
溶液逐渐 变蓝
不变蓝
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，
加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。
鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
DNA量，所以一般采用鸡血 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用 鸡全血，主要原因是 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA， 全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。
（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按 实验要求完成实验步骤后，结果是 在实验中很难提取到DNA，
4
3、方法与过程
1).制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，
活鸡鲜血180mL
离心或静置沉淀。
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
5
关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较， 最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：
（新1陈）代鸡谢血旺中盛红，细因胞而含血有液完中整红的、细成胞形数的目细较胞多核，，可家以鸡提属供于丰鸟富类的，
能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；
3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中 加入预冷的10ml乙醇溶液，静置，可产生
絮状的DNA。DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质
4、取两支试管，分别加入5ml生 理盐水，将DNA挑至其中一支试 管中，轻轻搅拌使其溶解。
细菌DNA提取方法
细菌DNA提取方案细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。
一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。
2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。
3、12000转/分钟离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。
操作最简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。
但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。
有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。
编者建议：此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作一次。
二、CTAB/NaCl 法1、接种一单菌落于5mlLB中,30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml2%LB中,37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀,-20℃保存备用。
5、取3.5ml菌悬液,加入184μl10%SDS,混匀,加入37μl10mg/ml蛋白酶K,混匀,37℃温育1小时6、加入740μl5mol/LNaCl,再加入512μlCTAB/NaCl,混匀,65℃温育10分钟。
7、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
9、加入0.6倍的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟,收集DNA沉淀,用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。
10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/mlRNaseA,4℃保存。
CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA 加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。
dna的粗提取方法
dna的粗提取方法DNA的粗提取方法DNA是生物体内最基本的遗传物质，对于研究生物学、医学等领域具有重要意义。
因此，DNA的提取方法也成为了科学研究中的一项重要技术。
下面将介绍一种简单易行的DNA粗提取方法。
材料准备1. 10% SDS溶液：称取10克SDS加入100毫升去离子水中，混合均匀后加热至70℃左右，搅拌至SDS完全溶解即可。
2. 0.5M EDTA溶液：称取186.1克EDTA加入500毫升去离子水中，调节pH至8.0。
3. 1M Tris-HCl缓冲液：称取121.14克Tris-HCl加入1000毫升去离子水中，调节pH至8.0。
4. NaCl溶液：称取58.44克NaCl加入1000毫升去离子水中，搅拌均匀后过滤灭菌。
5. 蛋白酶K：用去离子水将蛋白酶K稀释至10mg/ml浓度。
6. 高锰酸钾：用去离子水将高锰酸钾稀释至0.1%浓度。
7. 95%乙醇：用去离子水将95%乙醇稀释至70%浓度。
8. 细胞样品：可以是动物组织、细菌、真菌等样品。
步骤步骤一：制备细胞裂解液1. 取适量的细胞样品，用PBS缓冲液洗涤3次，去除细胞外的杂质。
2. 向含有10% SDS的裂解液中加入适量的蛋白酶K，搅拌均匀后在60℃水浴中孵育2小时。
3. 将孵育后的裂解液加入相同体积的高锰酸钾溶液中，搅拌均匀后再加入相同体积的4M NaCl溶液中，轻轻摇晃混合即可。
步骤二：沉淀DNA1. 将上述混合溶液离心10分钟，收集上清液至新离心管中。
2. 向上清液中滴加等体积的冷乙醇（70%），轻轻摇晃后放置于-20℃冷冻库中保存至少30分钟以上。
3. 将离心管取出，离心10分钟，倒掉上清液，将沉淀用无菌去离子水洗涤3次。
步骤三：纯化DNA1. 将沉淀加入含有0.5M EDTA的去离子水中，搅拌均匀后放置于60℃水浴中孵育30分钟。
2. 在孵育过程中，制备1M Tris-HCl缓冲液，并调节pH至8.0。
3. 孵育结束后，向上述溶液中加入相同体积的1M Tris-HCl缓冲液，轻轻摇晃混合均匀。
(完整版)实验一CTABNaCl法细菌基因组DNA提取
实验一CTAB/NaCl 法细菌基因组DNA提取一、培养基A. LB培养基（1L）胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g pH调至7.0二、菌种大肠杆菌野生型三、缓冲液A. 1M Tris-HCl ( pH 8.0, 1L)1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中，加入约800 ml的ddH2O，充分搅拌溶解，加浓HCl约42ml，将溶液定容至1 L。
C. TE缓冲液（pH 8.0）10 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)，1mmol/L EDTA (pH8.0)D. 10% SDS溶液10 gSDS，定容至100mlE. CTAB/NaCl缓冲液CTAB 4gNaCl 16.364 g1M Tris-HCl 20ml ( PH8.0)0.5M EDTA 8ml先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌，冷却后0.2-1% β-巯基乙醇（400ul）。
F. 5mol/L NaCl溶液292.5 gNaCl了，定容至1LG. 氯仿：异戊醇（24：1）480ml氯仿+20ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
H. 酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）250mlTris饱和酚+240ml氯仿+10ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
I. 上样缓冲液（6×）0.25%溴酚蓝，20%蔗糖J. 电泳缓冲液（1×, 1L）Tris碱10.8g，硼酸5. 5g，0.5mol/L EDTA （pH8.0）4ml, 用ddH2O定容至1L。
K. 0.7%琼脂糖凝胶（100 ml）0.7 g琼脂糖凝胶, 加入1×电泳缓冲液，微波炉加热至凝胶完全融化即可三、实验具体步骤1、接种一单菌落于5mlLB中, 30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml LB中, 37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀。
实验三盐析法提DNA及HLA多态性分析
实验四 NaCl盐析法提DNA及HLA多态性分析一、实验目的（1）掌握盐析法提取DNA方法；（2）掌握PCR扩增HLA基因序列的方法；（3）了解HLA多态性。
二、实验原理（1）盐析法提取DNA原理DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解而使杂质沉淀或者相反以达到分离目的。
DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小，在DNA溶解度最低时DNA从溶液中析出，而其他杂质还留在溶液中达到粗提取的目的。
（2）PCR技术的原理在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA 互补的子链DNA的过程。
是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。
三、实验材料（1）全血样品；NaCl；Tris-HCl；蛋白酶K；70%乙醇；无水乙醇；MgCl2；SDS；乙二胺四乙酸(EDTA)；琼脂糖；PCR试剂。
四、操作方法DNA提取：1.新鲜抗凝全血或冻存抗凝全血0.5ml置于2ml离心管中,补3倍体积的红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)混合，2500 rpm离心15 min，移去上清，再用同体积的红细胞裂解液两次裂解红细胞，沉淀用生理盐水洗涤1次，收集白细胞沉淀。
2.沉淀中加入150μl TE混匀，再加15μl 10% SDS及蛋白酶K 20μl，56℃消化过夜, 得到清亮粘绸的液体。
加入235μl 5mol/L NaCl，轻轻摇匀至少1min，5000rpm离心10min；3.将上清转至另一支1.5ml离心管中，加860μl无水乙醇颠倒摇动数次至DNA絮状析出，离心10000转/分，10分钟；4.加860μl冰冻70%乙醇混合去盐，12000rpm离心3min，弃上清，重复一次。
实训 DNA的提取分离
实训DNA的提取分离［任务描述］利用DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
当氯化钠的物质的量浓度为 2mol/L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14mol/L 时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
同时，利用DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
本次实训任务以鸡肝为实验材料，鸡的细胞中含有78条染色体，DNA含量丰富。
核酸分子中的碱基含有共轭双键，具有一定的紫外吸收特性，其最大吸收峰的波长为260nm。
在波长为260nm，光程为1cm，A260＝1时，相当于双链DNA 浓度为50μg/mL，单链DNA为40μg/mL。
紫外分光光度法可用于测定浓度大于0.25μg/mL的核酸浓度。
DNA浓度计算公式：C（μg/mL）＝40μg/mL×1/光程×A260 ×稀释倍数。
［任务实施］一、准备工作1.建立工作小组，制定工作计划，确定具体任务，任务分工到个人，并记录到工作表。
2.收集利用鸡肝为原材料，提取分离DNA工作中必须信息，掌握相关知识及操作要点，与指导教师共同确定出一种最佳的工作方案。
3.完成任务单中实际操作前的各项准备工作。
（1）材料准备新鲜的鸡肝（2）试剂生理盐水（冷）、5%十二烷基磺酸钠溶液、45%乙醇、95%乙醇（冷）、乙醇（冷）、丙酮（冷）、氯化钠粉末（3）器具组织捣碎机、离心机、切菜板、菜刀、紫外分光光度计（260nm）、天平、烧杯（500ml、100ml、1000ml）、10ml量筒、移液管、滴管。
二、操作过程图1 DNA制备操作流程（一）操作流程见图1（二）操作步骤1、组织破碎：取一定量的新鲜的鸡肝，加4倍量生理盐水，经组织捣碎机捣碎l min，匀浆，2500r/min离心30min,沉淀用同样体积生理盐水洗涤3次，每次洗涤后离心，将沉淀物悬浮于20倍量的冷生理盐水中，再捣碎3min。
四种提取花生DNA的方法
氯化钠法：取3mL 精练棉子油, 加入 3 mL 正己烷,加入3mLN aCl( 1. 4 m ol # L- 1) , 继续于旋转搅拌器上振荡混合1h ; 120 00 r # min- 1离心20 m in, 使有机相和水相分离, 小心取出下层水相; 加入与水相溶液等体积的异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置40 min后, 1 2000 r /min- 1离心20 m i n , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后用 1 mL T E 溶解沉淀, 加入 1 mL 异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置10 min，后, 1 2000 r # m in- 1离心20min , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后加入60 L L T E, 充分溶解沉淀, 2 min 过后generay biotech 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)GK2041 50次( 仅进行纯化部分) , 最后将离心获得的溶液( 经核酸蛋白浓度检测仪检测浓度) 取5微升进行琼脂糖凝胶电泳, 同时可作为PCR 反应的模板[ 5 - 6]。
建议一个P CR 反应使用1微升DN A 。
纯化部分：1．从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶，估计重量或精确称量重量。
2．每100mg 琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution ，于50～60℃水浴3～5min，期间每2～3min 间断轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。
注：为操作方便，可统一加入400μl Binding Solution。
3．将上述混合液转移至套有2ml 收集管的吸附柱GC-3u中，室温放置2min，6,000rpm 室温离心1min，取出吸附柱GC-3u，并倒掉收集管中废液。
4．将将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500µl WASolution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。
5．将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500μl WashSolution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。
dna浓盐法
dna浓盐法
DNA浓盐法是一种常见的提取DNA的方法，其原理是基于DNA可以溶解在盐溶液中，但不溶于酒精的特点。
以下是DNA浓盐法的一般步骤：
1. 称取一定质量的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎。
2. 提取DNA：量取肝糜4ml于10毫升离心管，在4000r/min下离心10min，沉淀中再加入8ml缓冲液于4000r/min离心5min；弃上清，取沉淀；将沉淀用10ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯，加入5ml氯仿-异戊醇混合液、1mISDS，振荡30min；缓慢加入固体NaCl（约0.9g），使其最终浓度为1mol/L；将溶液分装到2个10毫升离心管中，在4000r/min 离心5min，取上清水相；在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品。
DNA浓盐法操作简便，但在提取过程中需要注意细节，以确保提取的DNA质量。
如果你想了解更多关于DNA浓盐法的信息，可以继续向我提问。
dna融解温度nacl
dna融解温度nacl
DNA 的融解温度是指在一定条件下，DNA 分子中的核苷酸碱基之间的吸引力不足以抵抗外部电场或温度等因素的干扰，从而使 DNA 分子在水中解开成为两条单链。
DNA 的融解温度可以通过加入氯化钠等化学物质来调节，从而提高 DNA 的融解温度。
DNA 的融解温度对于生物细胞的生长和繁殖具有重要的影响。
在生物体内，DNA 的融解温度决定了细胞是否能够进行分裂和繁殖。
如果 DNA 的融解温度过低，细胞就无法进行分裂和繁殖，反之如果 DNA 的融解温度过高，细胞则会因为温度过高而受到伤害。
为了提高 DNA 的融解温度，科学家在研究过程中使用了氯化钠等化学物质来调节 DNA 的融解温度。
这是因为氯化钠等化学物质可以与 DNA 分子中的核苷酸碱基相互作用，增强它们的吸引力，从而提高 DNA 的融解温度。
这种调节 DNA 融解温度的方法被广泛应用于生物制药、基因编辑等领域。
DNA 的融解温度对于生物细胞的生长和繁殖具有重要的影响，而氯化钠等化学物质则可以调节 DNA 的融解温度，从而为生物科学研究提供了重要的工具。
饱和氯化钠法提取外周血DNA
饱和氯化钠法提取外周血DNA
实验原理
以蛋白酶K 和SDS 裂解细胞释放DNA，而DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高，Na与带负电的DNA 结合成DNA钠盐，这时DNA 在溶液中呈溶解状态。
以氯仿抽提DNA，去除溶液中蛋白杂质后以3M NaAc沉淀DNA。
实验步骤
1. 取0.5 ml 抗凝外周全血，加入0.8 ml 生理盐水混匀后，室温离心10000rpm 1min。
2. 弃上清，留0.1 ml 沉淀，加入0.4 ml TE，悬浮细胞后加入10 mg/ml 蛋白酶K 5 μl (终浓度100 μg/ml)，10% SDS 50 μl (终浓度1%)，并轻轻混匀。
3. 37℃水浴消化过夜。
4. 加入1/3 体积饱和氯化钠，并充分混匀，静置10 min 后以10000 rpm 离心10 min。
5. 取上清液于另一新管内（1.5 ml Eppendorf 管），加入等体积氯仿并充分混匀，离心同步骤4。
6. 小心吸取水相至另一新管内，加入1/10体积的3 M NaAc（pH 5.2）混匀后，加入0.7体积的异丙醇并轻轻混匀， 10000 rpm 离心5 min。
7. 弃上清，加入70%乙醇0.5 ml，可见乳白色絮状DNA团块，充分洗涤DNA沉淀，离心步骤同6。
8. 尽可能弃净上清液，空气中干燥或置37℃温箱，干燥DNA 5 min。
9. 加入TE（pH 8.0）20～50 μl溶解DNA，4℃存放待用。
注意事项
步骤6 中，在将上清转移到一个新管过程中，注意只吸取水相液体，该步骤是获得高纯度DNA的关键。
DNA的粗提取与鉴定51672
鉴定：将DNA丝状物溶于盛有5ml的2mol/LNaCl溶液中， 向试管中加4ml的二苯胺试剂，水浴加热。
结果：溶液变蓝。
被染成蓝色。
此外，蛋白酶能水解蛋白质而不影响DNA，洗涤剂能够
瓦解细胞膜，但对DNA没有影响，80℃以下温度不会使
DNA变性，都是DNA提取与鉴定时可利用的。
二、实验材料：DNA含量相对较高的生物组织，如鸡血、猪 肝、香蕉、菜花、洋葱等 三、实验过程 （一）破碎细胞，获取含DNA的滤液
动物细胞破碎较容易，如在鸡血细胞中加一定量的蒸馏 水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。
如植物材料则加洗涤剂和食盐进行研磨。 （二）去除滤液中的杂质
在滤液中加NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L， 滤除不溶杂质，再调NaCl溶液到0.14mol/L，析出DNA，再 滤去溶液中的杂质，再用2mol/LNaCl溶液溶解DNA。
也可在滤液中加蛋白质酶分解蛋白质。
（三）DNA的析出与鉴定 析出：在含DNA的NaCl溶液中加冷却的酒精溶液，溶
溶解度
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理
0 0.14mol/L NaCl 浓度
1、DNA提取的原理：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液
中溶解度不同，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而
使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。利用D与蛋白质进一步分离。
2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会