大肠感受态简介

大肠杆菌感受态细胞
克隆感受细胞：
1、XL2-Blue感受态细胞适用于大质粒DNA和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建，可用于蓝、白斑筛选。

经pUC19质粒检测转化效率可达1×109cfu/μg。

2、DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

3、Top10感受态细胞，采用特殊化学试剂制作，可用于DNA的化学转化。

使用pUC19质粒DNA检测，转化效率可达109cfu/μg DNA。

可用于蓝白斑筛选；转化效率高；有利于稳定、高纯度质粒DNA的提取。

表达感受态细胞：
1、BL21(DE3) 菌株，该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET 系列）的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

2、BL21(DE3) pLysS菌株，该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

转化实验操作
操作方法
1. 取100μl冰上融化的XL2-Blue感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物）并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。