禽流感的流行特点和检测技术

中国动物保健2021.06
禽流感（avian influenza ，AI ）的潜伏期一般较短，通常为4～5d 。

发病时精神沉郁，食欲、饮欲降低甚至废绝，被毛散乱，体温升高，趴卧不动，偶有流泪。

头部、面部水肿，脚鳞发紫出血，肉垂和鸡冠呈干枯紫色，甚至坏死。

呼吸困难，咳嗽，听诊呈啰音；下痢，粪便呈淡黄或白色。

出现神经症状，共济失调，不能站立或行走。

并且该病为人畜共患病，处理不好不但会危害养禽业的经济发展，还会危害人类身体健康。

1禽流感的流行病学特点
1.1传染源
主要由感染或携带禽流感病毒的鸡、鸭、鹅等家禽，野外野生鸟类，特别是迁徙性水禽相互传染所致。

1.2传播途径
主要通过病禽的分泌物、排泄物、尸体，污染的饮水、饲料和其他物体，直接或间接接触引发感染，主要感染途径为呼吸道和消化道，以及直接接触病毒毒株感染。

人工接种可通过气溶胶经口鼻内、气管内、眼结膜、腹腔、肌肉、静脉和泄殖腔内等途径使易感禽类感染。

1.3易感动物
禽流感病毒在世界范围内广泛分布。

许多家禽、野禽、人类、特别是鸭等迁徙水禽，发生病毒感染的概率比其他禽类高，而家养的鸡和火鸡所发生的流感最为严重。

1.4特点
多为大流行，世界范围流行。

过去呈三年小流行，五年大流行。

该病主要在寒流较多，气温变化大的秋冬、冬春交替季节流行。

2禽流感的检测技术
2.1血清学诊断技术
中和试验中和试验的操作步骤复杂，容易造成材料的浪费，临床上不常用，但其为最原始的病毒检测技术，常用来做标准与其他检测方法作比较。

本试验常用鸡胚或组织培养细胞作为样本鉴定禽流感病毒。

中和试验是具有高度的灵敏性和特异性的血清学方
法，抗体只和病毒上表面抗原相对应，特别是已吸附的宿主细胞上的病毒颗粒表面的抗原相对应。

所以，在某种特定血清型的中和实验中，抗体只和组内的其他病原发生有限的交叉反应。

琼脂扩散试验琼脂扩散试验检测禽流感时，以具有血凝素活性的鸡胚尿囊液作为样品，采用已知的阳性血清和未知抗原进行病毒抗原型的特异性鉴定。

琼脂扩散试验可以通过检测基质蛋白和抗核糖蛋白等禽流感病毒群特异性血清抗体鉴定禽流感病毒。

该方法步骤简单，易于操做，但其敏感性低，容易发生假阳性。

血凝和血凝抑制试验血凝和血凝抑制试验作为一种常用的亚型鉴定方法，其特异性较好，但是步骤复杂，程序繁琐，材料消耗较大，并且不能检出新的血凝亚型的禽流感病毒。

通常进行血凝和血凝抑制试验前，要采用琼脂扩散试验鉴定所分离毒株的甲型流感病毒核蛋白或基质蛋白的抗原型，从而确定禽流感病毒，再通过血凝亚型进行鉴定。

由于许多禽类血清均存在可以和红细胞表面受体竞争性作用于病毒表面的血凝素从而发生非特异性凝集反应的非特异性因子，所以在进行血凝抑制试验时要先排除非特异性凝集反应。

神经氨酸酶抑制试验神经氨酸酶抑制试验是禽流感病毒抗体检测和病毒分类的快速检测方法。

该方法通过检测禽流感病毒的表面抗原特性，尤其是血凝素和神经氨酸酶的特异性，从而鉴定禽流感病毒。

该方法成本低，可重复，且操做简便，常应用于日常诊断之中。

免疫荧光技术检测禽流感病毒时常采用直接荧光抗体法，可以使用一种禽流感病毒的荧光抗体来检测不同亚型的其他病毒。

该方法成本低，敏感性高，过程便捷，直接在组织涂片上进行染色，置于荧光显微镜下镜检即可。

酶联免疫吸附法（ELISA ）ELISA 能检测特异性抗原，且敏感性高，是一种具有特异性、敏感性、样本微量、方便快捷，可诊断禽流感病毒血清特异性抗体的技术。

需要注意的是，本试验中抗原的纯度会直接影响到试验的敏感性和特异性，目前ELISA 已成为快速诊断及流行病学调查的最有效、实用、便捷的方法[1]。

2.2分子生物学技术
PCR 和荧光PCR 法PCR 是一种发展迅速可以在数小时内大量增加DNA 的一种体外扩增技术，目前广泛地应用于检测多种病毒的基因和流行病学调查中。

该方法可以找出传染性因子的特异
DNA 序列，从而进行待检样品的PCR 扩增。

如果检测结果出现相应的扩增带，则为阳性；若无扩增带，则为阴性[2]。

禽流感的流行特点和检测技术
王海平
（甘肃省渭源县畜牧兽医服务中心甘肃定西748200
）
流感又称鸡瘟，是由A 型流感病毒所引起的一种禽类的疾病综合征。

野鸟、水禽、海鸟等野生禽类和鸡、鸭、鹅、火鸡、鹌鹑等家禽均可感染。

该病是由世界动物卫生组织（OIE ）规定的A 类传染病，同时也被我国列为一类动物疫病。

一旦感染，会降低家禽生产性能，发生免疫抑制，甚至死亡。

所以要及时检测，及时预防，避免带来养禽业的经济损失，本文将从禽流感的流行特点和检测技术两方面进行简要的概述。

流感；流行特点；检测
技术
疾病防治
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2021.06.041
作者简介：王海平（1976.8—），甘肃渭源人，大学本科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控和兽医实验室工作。

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使用荧光PCR方法检测禽流感病毒比PCR法更加快速便捷，该方法不需要将鸡胚病毒分离培养，而且时间也相应缩短。

核酸探针技术核酸分子杂交技术是可以定性定量检测特异性的DNA和RNA，广泛应用于分子生物学和生物化学研究中的一种技术[3]。

在进行杂交时，通过已知的分离纯化后的DNA或RNA 序列片段检测未知的样品，而该这段已知片段即为核酸探针。

在一定条件下，探针可以和已变性分开的DNA或RNA单链上互补区段产生氢键，之后形成杂交双链，洗涤后去除标记物，可进行放射显影确定检测样品的DNA或RNA序列。

2.3电镜技术
禽流感病毒是一种形态特征性强的正粘病毒，所以也可以使用电镜技术来诊断。

而采样的时间和部位，样品的处理制备是保证电镜技术诊断结果准确的关键。

3结语
禽流感作为一种传染性极强的人畜共患病，危害性极强。

所以应当对禽类实施强制免疫，加强禽流感的综合防控。

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参考文献：
[1]李海燕,辛晓光,田国斌,等.间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件[J].中国畜禽传染病,1998(4):42-44.
[2]崔尚金,陈化兰,唐秀英,等.禽流感RT-PCR诊断法的建立[J].中国畜禽传染病,1998(2):42-44.
[3]童英林.核酸分子杂交技术在环境微生物研究中的应用[J].硅谷,2011 (10):133-134.
2.4酶联免疫吸附试验
随着免疫学诊断技术的发展，酶联免疫吸附试验（ELISA）也被广泛的应用于病原的检测，其中最为常用的检测方法是基于兔病毒性出血症病毒结构蛋白VP60所建立的间接ELISA检测方法和VP60抗体建立的双抗夹心ELISA及抗原捕获ELISA。

间接ELISA 检测方法操作简单，灵敏度高，且该方法不仅可以应用于对临床样品的检测，还可以去检测疫苗免疫后兔群的抗体水平，从而对疫苗的免疫保护能力进行评价。

ELISA检测方法的操作简单，对技术要求不高，因此比较适用于基层兽医站和养殖企业的使用。

2.5胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术是目前为止动物疫病检测中最简单、快速、敏感的免疫学检测技术之一，由于其实验过程简单仅需几分钟，操作简单，不需要复杂的实验平台和专业的工作人员，仅需肉眼便可判断实验结果且结果易保存，这些优点使疫病的现场快速诊断变为可能。

且有研究人员发现基于VP60单克隆抗体建立的胶体金免疫层析检测方法较传统的血凝检测灵敏性更高，且更具有特异性。

3兔病毒性出血症的疫苗
3.1组织灭活苗
目前最为常见的兔病毒性出血症疫苗是由感染兔肝脏组织，经甲醛灭活并加入适当佐剂后所制备的组织灭活苗。

目前常用的佐剂有油乳剂、氢氧化铝胶佐剂、弗氏佐剂等，佐剂的加入可以提高抗原的免疫原性，刺激机体相关免疫细胞的活化，以及延长抗原存在时间[3]。

但由于组织灭活苗存在灭活不完全的风险，且因为兔病毒性出血症病毒无法在细胞上有效增殖，因此组织灭活苗必须感染兔子进行制备。

近年来随着动物福利相关呼声的提高，越来越多的研究人员关注于兔病毒性出血症亚单位疫苗的研发。

3.2VP60重组蛋白疫苗
由于VP60蛋白是兔病毒性出血症病毒的主要抗原蛋白，因此大量研究人员利用大肠杆菌原核表达系统、酵母载体真核表达系统或植物载体表达系统表达VP60蛋白全长或其主要的抗原表位区域，并将表达的蛋白纯化后加入适当的佐剂并免疫兔子，该方法制备的疫苗能够给兔提供一定的保护，但由于仅有一部分线性表位被免疫细胞识别，因此保护率不高。

3.3病毒样颗粒疫苗
病毒样颗粒是由病毒的结构蛋白所形成的空的病毒衣壳，由于
其不含有遗传物质，因此不具有致病性，同时其又保留了病毒粒子的
空间结构，因此其不仅可以激活机体的体液免疫，也可以激活机体的
细胞免疫水平。

有研究人员发现可溶性表达兔病毒性出血症病毒的
主要结构蛋白VP60，该蛋白可以自我包装形成病毒样颗粒，目前已
经通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统、酵母表达系统、大肠杆菌表达
系统等多个系统成功表达了兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒，添
加适当的佐剂后免疫兔都可以抵抗强毒株的攻击，且此类疫苗刺激
机体产生的抗体水平较单纯表达VP60重组蛋白的疫苗水平更高。

3.4重组病毒载体疫苗
有研究人员通过将一些弱毒和结构蛋白VP60进行重组，进而
构建能够表达VP60蛋白的重组病毒。

目前有报道的研究有利用黏
液瘤病毒、腺病毒、羊口疮病毒、痘病毒等病毒载体所制备的重组
病毒载体疫苗，且动物试验结果发现这些疫苗可以有效激活机体
的抗体水平，并能够抵抗强毒株的攻击。

且其中部分病毒能够在动
物之间传播，这为野生兔群免疫提供了新的思路。

4总结
由于目前没有针对兔病毒性出血症的特效药物，因此对其快
速诊断和免疫预防仍然是控制该疫病的关键手段，临床诊断时应
根据现场条件，选择最合适的诊断方法，当一种方法检测无法确定
时，应几种检测方法联合使用；疫苗免疫时，应选择正规厂家的合
格疫苗进行免疫，确保充足的免疫剂量和合理的免疫规程，杜绝使
用自家苗。

且由于新的变异亚型的出现，传统的兔病毒性出血症疫
苗无法对其提供完全保护，这也需要科研人员加紧对新的疫苗的
研发，以保障我国兔养殖业的健康发展。

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参考文献：
[1]刘胜江,薛华平,浦伯清,等.兔的一种新病毒病--兔病毒性出血症[J].畜牧
与兽医,1984(6):253~255
[2]李娇,王金良,谢金文,等.兔病毒性出血症诊断与防控的研究进展[J].中国
养兔,2013(4):22-26+43.
[3]郑艳利,王开,马红霞,等.兔病毒性出血症疫苗研究进展[J].动物医学进展,
2013,34(3):95-100.
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