CCK_8操作说明及检测步骤

CCK_8操作说明及检测步骤
CCK-8是一种常用的细胞增殖和细胞毒性检测方法，该方法通过评估
细胞内脱氢酶的活性来间接反映细胞的代谢活性。

其操作步骤如下：
1.常规细胞培养
选择要测试的细胞系，并在合适的培养基中进行培养。

通常使用细胞
培养瓶或培养皿，并在37摄氏度的培养箱中保持恒定的温度。

确保培养
基中含有足够的养分和补充物，以支持细胞的正常生长和代谢。

2.细胞计数和均匀分布
细胞生长到适当的密度后，使用显微镜和细胞计数板计数细胞数目。

根据需求，将细胞以适当比例分装到不同的瓶中，再将细胞以适当比例分
装到96孔板中，以保证每个孔中的细胞数量和均匀分布。

3.平台适应性试验
在进行正式的实验前，可以进行平台适应性试验。

为此，将不同细胞
浓度的细胞悬液加入到96孔板中，并使用CCK-8试剂进行处理。

根据
CCK-8处理后的细胞的吸光度读数，选择适当的浓度范围和时间点进行后
续实验。

4.细胞处理
在进行CCK-8实验之前，确保细胞在适当的生长条件下。

将上一步骤
中准备好的细胞悬液加入到96孔板中，使每个孔中的细胞数目均匀分布。

可以提前设计不同实验组的处理方式，如对照组、实验组和阴性对照组等。

K-8处理
按照CCK-8试剂说明书的建议将CCK-8试剂加入到96孔板中的每个
孔中。

通常建议每个孔中加入10%的CCK-8试剂，并与细胞悬液充分混合。

注意避免气泡的产生。

6.孵育
将96孔板放置在37摄氏度的培养箱中，孵育一段时间。

孵育时间可
以根据实验要求设定，通常为1-4小时。

7.吸光度测量
使用酶标仪或多功能板读取器测量每个孔的吸光度值。

通常使用450
纳米的波长进行测量。

根据吸光度值的变化，可以评估细胞的代谢活性，
并进行细胞增殖或毒性分析。

通过以上步骤，可以使用CCK-8试剂评估细胞的增殖和毒性。

这种方
法快速、简单且灵敏，被广泛应用于细胞实验中。

需要提醒的是，在进行
实验前要仔细阅读CCK-8试剂的使用说明，并根据实际情况进行操作。