几种食用菌多糖抗氧化活性比较

研究发现, 许多天然食品具有清除自由基和抗氧化的 能力, 目前国内外已将抗氧化检测用于抗衰老等保健食品 的评价, 对保健品的开发具有积极的作用, 食用菌作为一 种天然的食品已有上千年的历史, 长期的应用实践表明食
用菌在药用保健方面也具有重要价值。已有的研究表明, 食用菌种含有多种活性成分, 除了能提高人体免疫力, 增 强肝功 能 外, 还 具 有 抗 肿 瘤、降 血 脂、抗 氧 化 等 多 种 功效 [ 12] 。
实验组
对照组 F e2+ + H 2O2
F e2+ + H 2O2 + 多糖
多糖 ( g /m L )
0 0 62 5 125 250 500 1000
金钱菇
花菇
冬菇
A 532nm
抑制率 (% )
A532nm
抑制率 (% )
A 532nm
抑制率 (% )
0 392
ห้องสมุดไป่ตู้
0 392
0 392
1 444 100 1 444 100 1 444
100
1 059 26 7 0 575 60 1 0 558 1 172 18 8 1 159 19 4 0 616 1 224 15 2 1 025 29 0 0 282
61 4 57 3 80 5
1 055 26 9 0 879 39 1 0 290 0 911 36 9 0 739 48 9 0 188
的体系组分别下降 0 139, 0 151, 0 190, 0 211 和 0 233,
图 1 多糖还原力的测定
由图 1 可以看出, 随浓度的增加, 金钱菇、花菇、冬菇 的还原力逐渐增强, 其中花菇与冬菇的还原力增强相对较
冬菇多糖的体系组分 别下降 0 159, 0 157, 0 155, 0 225 和 0 243, 表明金钱菇、花菇、冬菇多糖可抑制 OH 所致 的氧化损伤, 减轻肿胀度。
量浓度的多糖溶液 1 0m L, 加入 pH 8 2的 T ris H C l溶液 (取 0 2m ol/L tris 溶液 25mL, 另 取 0 1m ol/LHC l溶 液 22 5m L, 两者混合后稀释至 100m L即得 ) 5 0mL 及 50 L
醛生成量比 Fe2+ + H 2 O2 组明显减少, 说明金钱菇、花菇、 冬菇多糖能强烈的抑制 OH 诱导的脂质过氧化作用。
弱。总的来说, 金钱菇的抗氧化性最强, 花菇次之, 冬菇则 表现为最弱。 2 2 金钱菇、花菇、冬菇多糖对肝组织脂质过氧化产物丙
吸光值, 线 粒 体, 膜 受 氧 化 损 伤 发 生 肿 胀, 其 吸 光 值 下降 [7] 。 1 2 5 对超氧阴离子自由基的清除作用 [ 8- 9] 取不同质
二醛生成的影响 从表 1 知, Fe2+ + H2 O2 组丙二醛含量 比对照组有所增加, 说明 Fe2+ + H 2O2 产生的 OH 可诱 导脂质过氧化反应, 在有金钱菇、花菇、冬菇多糖时, 丙二
次之、冬菇则表现得最差; 都能明显地 抑制 OH 所致的丙二 醛增长; 减少 OH 所 致的线 粒体肿 胀, 抑 制邻苯 三酚自
氧化, 所以金钱菇、花菇、冬菇均具有抗氧化活性。
关键词: 金钱菇; 花菇; 冬菇; 多糖; 抗氧化
中图分类号 S646
文献标识码 A
文章编号 1007- 7731( 2010) 05- 76- 02
医疗设备厂、超速冷冻离心机。
1 2 实验方法
1 2 1 多糖的提取 分别取 20g金钱菇, 花菇和冬菇子
实体, 剪碎, 提取温度 94. 34 , 提取时间为 3. 5h, 料液比 为 1 60[ 4], 提取液离心, 过滤, 水浴浓缩, 离心, 乙醇沉淀 12h, 4000r/m in离心, 真空干燥得粗多糖制品。 1 2 2 还原力测定 参考 Oyaizu 的方法 [ 5], 其原理是样 品将铁氰化钾 ( K3 Fe( CN ) 6 ) 还原成 亚铁 氰化 钾 ( K4 Fe ( CN) 6 )亚铁氰化钾再与 Fe3+ 作用, 生成亚铁氰化铁 ( 普 鲁士蓝 ), 以在 700nm 波长处检测普鲁士蓝的吸光度表示 还原里的大小, 吸光度 越高, 样品 的还原 力就越强。取 pH 6. 6的磷酸缓冲液和质量分数为 1% 的铁氰化钾溶液各 2 5mL, 加入不同质量浓度的多糖溶液 1m L, 混匀后 50 水浴 20m in, 然后加入质量分数为 10% 的三氯乙酸溶液 2 5mL, 混匀, 800 r/m in离心 10m in, 取上清液 2 5mL, 再加 入蒸馏水和质量分数为 0 1% 的氯化铁各 2 5mL, 混匀, 静 置 10m in, 在 700nm 处测定吸光度。 1 2 3 金钱菇、花菇、冬菇多糖提取物抗 H2 O2 引起的小 鼠肝组织丙二醛 ( MDA ) 的生成 迅速去血后的小鼠肝, 用冷生理盐水洗 净后称重, 冰浴 中匀浆, 制 成体积分 数 0 5% 的悬浮液, 500 r/m in 离心去杂得匀浆液。各取匀浆 液 1mL, 加 不同 质量 浓度 的多 糖溶 液和 6mm ol/LFeSO4 100 L , 最后加 60mm ol/LH 2O2 40 L在 37 下水浴 1h后, 加入 1mL15% TCA 终止反应, 再加入 1mL体积分数 0 7% TBA, 于沸水中显色 15m in, 冷却后离心, 测 532 处上清液 的 OD值, 以吸光值表示 MDA 含量的多少, 吸光值越大, MDA 含量越高 [ 6] 。 1 2 4 金钱菇、花菇、冬菇多糖对 OH 引起的小鼠干线 粒体肿 胀度 的抑 制作 用 同 1 2 3 法取 肝, 冰 浴下 用 0 25m ol/L 蔗糖制成 10% 匀浆液, 1000r/m in 离心 20m in, 沉淀用 pH 7. 4的 20mm ol/LT ris- H CL缓冲液洗涤两次后 用生理盐水配成吸光值为 0 5 ~ 0 6 的干线粒体悬浮液。
76
安徽农学通报, A nhu i A gri Sci Bu ll 2010, 16 ( 5)
几种食用菌多糖抗氧化活性比较
党 蕾 郝佳欣 江海涛*
( 南京晓庄学院生物化工与环境工程学院, 江苏南京 211171)
摘 要: 以热水浸提、乙醇沉淀的方法 , 分别从金钱菇、花菇、冬菇子实体 中提取多糖, 通过 对还原力的 测定、用硫代巴
表 1 多糖对 Fe2+ + H 2O 2 诱导的小鼠肝组织丙二醛生成的影响
邻苯三酚 ( 50mm ol/L), 迅速摇匀, 以生理盐水和 V c溶液 (取 100m gV c溶于 100mL 水中即可 ) 为对照组, 每隔 30 s 测定在 325nm 处的吸收值。 2 结果与分析 2 1 还原力测定结果 抗氧化剂的还原力与其抗氧化性 之间存在关系, 抗氧化剂是通过自身的抗氧作用给出电子 而清除自由基, 还原力越强, 抗氧化性越强, 因此, 可通过 测定还原力来说明其抗氧化活性的大小 [ 10] 。
细胞膜脂质过氧化会使膜的通透性增加, 引起膜内外 物质的内流和外泻, 促使肝线粒体肿胀的发生。因而这些 指标能反映机体的抗氧化能力和自由基水平。由本实验 可知, 金钱菇、花菇、冬菇多糖提取物均具有较强的抗氧化 性能, 在还原力抑制方面, 随着多糖浓度的增大, 其抗氧化 活性逐渐增强, 金钱菇表现为最强、花菇次之、冬菇则表现 得最差; 能明显地抑制 OH 所致的过氧 (下转 128页 )
79 9 87 0
2 3 金钱菇、花菇、冬菇多糖对 Fe2+ + VC 引起的小鼠干 线粒体肿胀的影响 从表 2知对照组在 60m in 后, 520nm
处的吸光值下降 0 027; Fe2+ + VC 组下降 0 158; 即 OH 诱导加速了膜线粒体氧化损伤; 但有金钱菇多糖的体系组
分别下降 0 083, 0 097, 0 130, 0 153和 0 145, 花菇多糖
菇多糖提取及抗氧化作用进行研究, 旨在为金钱菇、花菇、 冬菇的开发利用提供参考依据。
1 材料和方法 1 1 材料 1 1 1 实验原料
金钱菇, 花菇, 冬菇子实体均购自南京
市沃尔玛超市; 昆明系小鼠。 1 1 2 试剂 95% 乙醇、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢
钠、铁氰化钾、三氯乙酸、氯化铁、七水硫酸亚铁、30% 双氧
0 485 0 475 0 470 0 458 0 485 0 475 0 470 0 458 0 485 0 475 0 470 0 458
0 505 0 377 0 399 0 347 0 505 0 377 0 399 0 347 0 505 0 377 0 399 0 347
0 464 0 386 0 385 0 381 0 476 0 354 0 354 0 337 0 500 0 354 0 351 0 341
20100128几种食用菌多糖抗氧化活性比较党蕾郝佳欣江海涛南京晓庄学院生物化工与环境工程学院江苏南京211171以热水浸提乙醇沉淀的方法分别从金钱菇花菇冬菇子实体中提取多糖通过对还原力的测定用硫代巴比妥酸法测小鼠肝组织丙二醛用分光光度法测小鼠肝线粒体肿胀实验及测金钱菇花菇冬菇多糖提取物对邻苯三酚自养化体系的抑制作用3种不同来源的多糖进行了抗氧化活性研究结果表明
作用 [2] 。而真菌多糖是一类具有高活性的生命大分子物
质, 它在抗肿瘤、抗凝血、抗炎症、刺激免疫以及降血糖方
面都有一定的作用, 已逐渐发展成为一种免疫疗法, 越来 越受到研究人员的重视 [ 3] 。本实验所取的真菌金钱菇、花
菇、冬菇中, 多糖是其主要生物活性物质, 但目前国内外对 其保健功能的研究尚未见报道, 实验中对金钱菇、花菇、冬
比妥酸法测小鼠肝组织丙二 醛、用分光光度法测小鼠肝线粒体肿胀实验 及测金钱菇、花菇、冬菇多 糖提取物 对邻苯三
酚自养化体系的抑制作用, 对 3种不同来源的多糖进行了抗氧化活性研 究, 结 果表明: 金钱菇、花菇、冬菇多 糖提取物
均具有较强的抗氧化性能, 且在还原力方面, 随 着多糖浓度的增大, 其抗 氧化活性逐 渐增强, 金钱菇表 现为最强、花菇
作者简介: 党蕾 ( 1988- ) , 女, 在读本科生。* 通讯作者 收稿日期: 2010- 01- 28
16卷 05 期
党蕾等 几种食用菌多糖抗氧化活性比较
77
由 Fe2+ VC产生 OH, 取 2 5mL 悬浮液各加不同质量浓 度的 金 钱 菇、花 菇、冬 菇 多 糖, 1mm ol/LFeSO4 50 L 和 1mm ol/LVC 50 L, 在 520nm 处测定隔 20m in 反应时间的
水、三氯乙酸、硫代巴比妥酸 ( TBA )、抗坏血酸 ( Vc) 、Tris 碱、HC 、l 蔗糖、邻苯三酚均为国产分析纯。 1 1 3 仪器 电子分析天平、上海精密科学仪器有限公
司、UV 754N 紫外分光光度计、上海精密科学仪器有限公
司、HH - 4数显恒温水浴锅、国华电器有限公司、GZX 9070 MBE 电热恒温鼓风干燥箱、上海博迅实业有限公司
表 2 金钱菇、花菇、冬菇多糖对 Fe2+ + VC 引起的小鼠干线粒体肿胀的影响
组别 多糖 ( g /mL)
对照 F e2+ + VC
F e2+ + VC + 多糖
0 0 625 125 250 500 1000
金钱菇
A520nm 花菇
冬菇
0m in 20m in 40m in 60m in 0m in 20m in 40m in 60m in 0m in 20m in 40m in 60m in
0 472 0 389 0 380 0 375 0 485 0 344 0 338 0 334 0 498 0 349 0 344 0 338
0 491 0 393 0 369 0 361 0 510 0 349 0 328 0 320 0 528 0 396 0 373 0 373
0 497 0 395 0 362 0 355 0 534 0 358 0 334 0 323 0 514 0 308 0 290 0 289
生物体内在新陈代谢过程中不断地产生自由基, 当它 的存在超出机体防护系统所具有的清除能力, 就会直接或
间接的引起蛋白质变性、酶失活、多糖降解、DNA 链断裂、 生物膜结构损伤、细胞解体乃至机体病变和死亡 [ 1]。研究
发现, 许多天然食品具有清除自由基和抗氧化的能力, 文 献报道了关于蔬菜、水果、红酒、茶叶等天然产物的抗氧化
0 504 0 392 0 362 0 359 0 520 0 328 0 300 0 287 0 499 0 292 0 275 0 256
2 4 金钱菇、花菇、冬菇多糖对超氧阴离子自由基的清除 超氧阴离子自由基 ( O-2 )式细胞在代谢过程中产生的
另一种重要的自由基, 具有很强的氧化能力, 它不仅具有 重要的生物学功能, 当其超出一定量时, 还能够引起多种 疾病 [11]。实验表明, 金钱菇、花菇、冬菇多糖提取物对超 氧阴离子自由基均有清除作用, 结果见表 3。 3 讨论