AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中的表达及对患者预后的影响

AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中的表达及对患者预后
的影响
常亮;王鑫;谭春雷;张学新
【摘要】目的探讨AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中的表达及对患者预后的影响.方法选择我院收治并确诊的胶质母细胞瘤93例(观察组)和同期行脑血管畸形手术切除的正常脑组织20例(对照组),运用免疫组织化学染色法检测AKT1和AKT2蛋白的表达情况,采用Kaplan-Meier生存曲线对患者总生存期进行分析,应用Cox比例风险回归对影响胶质母细胞瘤患者预后的变量进行多因素分析.结果观察组AKT1与AKT2蛋白表达阳性率分别为74.19％ (69/93)、67.74％ (63/93),高于对照组的5％(1/20)、15％(3/20),差异有统计学意义(P＜0.05).Kaplan-Meier 生存分析显示,AKT1和AKT2蛋白表达阳性者总生存期低于蛋白表达阴性者,差异有统计学意义(P＜0.05).Cox比例风险回归分析显示,手术切除程度、辅助治疗、AKT1和AKT2蛋白的表达为胶质母细胞瘤预后的独立危险因素(P＜0.05).结论AKT1和AKT2蛋白的表达与胶质母细胞瘤患者预后密切相关,可作为判断预后的指标之一.%Objective To investigate the expression and prognostic value of AKT1 and AKT2 in patients with glioblastoma (GBM).Methods AKT1 and AKT2 expression was assessed by immunohistochemistry in 93 cases of GBM (tumor group) and 20 normal brain tissues (control group) which were obtained intraoperatively in patients with cerebral vascular malformation.Overall survival (OS) was evaluated graphically with Kaplan-Meier curves.The multivariate analysis for OS was performed using Cox regression analysis.Results The positive expressions of AKT1 and AKT2 in tumor group were 74.19％ (69/93) and 67.74％ (63/93) respectively,which
were significantly higher than those in control group
(5％,1/20;15％,3/20).Kaplan Meier method showed patients with positive AKT1 or AKT2 expression had significantly shorter OS relative to those with negative expression,indicating significant differences (P ＜ 0.05).The multivariate Cox regression analysis revealed that extent of surgical resection,adjuvant treatment,and AKT1 and AKT2 expression were independent risk factors for OS (P ＜ 0.05) in patients with GBM.Conclusion The expression of AKT1 and AKT2 may be associated with prognosis of GBM,and could be considered as significant prognostic indicators.
【期刊名称】《临床误诊误治》
【年(卷),期】2018(031)003
【总页数】4页(P96-99)
【关键词】胶质母细胞瘤;AKT1蛋白;AKT2蛋白;预后
【作者】常亮;王鑫;谭春雷;张学新
【作者单位】150081 哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第三医院神经外科;150081 哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第三医院神经外科;150081 哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第三医院神经外科;150081 哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第三医院神经外科
【正文语种】中文
【中图分类】R730.264
胶质瘤是起源于神经胶质细胞的恶性肿瘤，其发病率为颅内肿瘤之首，且胶质母细
胞瘤发病率占胶质瘤50%以上，恶性程度最高，加之许多分子生物学事件参与了
胶质母细胞瘤的发生、发展，故临床备受关注[1-3]。

AKT1和AKT2蛋白作为一
种潜在的人类癌基因，在多种肿瘤中表达升高[1-3]。

因此，进一步探讨胶质母细
胞瘤发生的分子生物学机制，对临床诊治具有重要意义。

本文观察AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中的表达及对预后的影响，为临床治疗提供理论依据。

1 资料与方法
1.1 一般资料选择我院1999年1月—2014年1月收治的胶质母细胞瘤93例作
为观察组，其中男39例，女54例；年龄37～79(48.9±5.3)岁；均无基础性疾病；均经病理检查确诊，且术前未行放疗和(或)化疗。

选取同期行脑血管畸形手术切除的正常脑组织20例作为对照组，其中男8例，女12例；年龄35～70(44.2±4.1)岁；均无基础性疾病。

本研究经医院伦理委员会同意。

1.2 主要试剂及仪器兔抗人AKT1单克隆抗体和兔抗人AKT2单克隆抗体均购自Cell Signaling Technology公司，辣根过氧化物酶标记二抗(山羊抗兔)购自武汉
博士德生物工程有限公司，枸橼酸钠抗原修复液、DAB试剂盒和苏木素均购自碧
云天生物技术公司。

1.3 免疫组织化学染色(免疫组化)方法及结果鉴定采用石蜡包埋标本，切成厚4
μm的薄片，60℃恒温电烤箱中过夜，脱蜡、脱水，用0.01 M枸橼酸缓冲液进行抗原修复(温度70℃，时间10 min)，非免疫血清封闭液室温下封闭30 min，滴
加相应一抗AKT1(1∶100)或AKT2(1∶100)，4℃过夜，滴加磷酸盐缓冲液稀释好的二抗(l∶200)，室温下作用1 h，DAB显色液进行化学显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，透明，树胶封片。

每张切片随机选取10个高倍镜视野，计算阳性细胞百分比评分，分别为0分(无
阳性细胞)、1分(阳性细胞占0～10%)、2分(阳性细胞占11%～50%)和3分(阳
性细胞占51%～80%)，其均值作为最后结果。

细胞着色强度评分按照染色强度不
同分为0分(无染色)、1分(淡黄色)、2分(黄色)和3分(棕黄色)。

阳性结果评分=
细胞着色强度评分×阳性细胞百分比评分，结果0～2分为(-)，3～4分为(+)，5～6分为(++)，>6分为(+++)。

1.4 随访采用电话或信件联系方式对胶质母细胞瘤患者进行随访，截止至2016年6月，记录总生存期(OS)，即患者第一次手术至死亡的时间。

本研究无失访病例。

1.5 统计学分析采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行处理，利用卡方或Fisher
确切概率检验进行差异性分析，应用Kaplan-Meier生存曲线对OS进行分析，采用Cox比例风险回归对影响预后的变量进行多因素分析。

以α=0.05为检验水准。

2 结果
2.1 AKT1和AKT2蛋白的表达情况 AKT1和AKT2蛋白主要在细胞质中表达，呈
黄色或棕色(图1)。

对照组AKT1与AKT2蛋白表达阳性率分别为5%(1/20)、15%(3/20)，观察组分别为74.19%(69/93)、67.74%(63/93)，差异有统计学意
义(P<0.05)。

图1 AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中的表达(HE×200)
注：1a为AKT1蛋白表达，1b为AKT2蛋白表达
2.2 AKT1和AKT2蛋白的表达对胶质母细胞瘤患者OS的影响 Kaplan-Meier生
存分析显示，观察组AKT1及AKT2蛋白表达阳性者OS明显低于蛋白表达阴性者，差异有统计学意义(AKT1蛋白Log-rank=11.012，AKT2蛋白Log-rank=9.519，P<0.05)，见图2。

图2 AKT1和AKT2蛋白表达对胶质母细胞瘤患者总生存期的影响
2.3 胶质母细胞瘤患者预后相关因素分析运用多变量Cox比例风险回归分析显示，患者预后与年龄、性别、肿瘤大小和行为状态量表评分无关，与手术切除程度、辅
助治疗、AKT1和AKT2蛋白的表达风险系数密切相关，为胶质母细胞瘤预后的独立危险因素(P<0.05)，见表1。

表1 胶质母细胞瘤患者预后相关因素分析变量危险比95%可信区间P年龄(岁)1．2850．869，1．8980．21 <50 ≥50性别0．8720．579，1．3140．51 女男肿瘤大小(mm)1．0100．989，1．0320．35 <30 ≥30行为状态量表评分1．2150．797，1．8500．30 <80 ≥80手术切除程度1．3891．146，1．7600．02 全切其他辅助治疗1．8221．237，
2．438<0．01 放疗+化疗其他AKT1蛋白2．0861．344，3．238<0．01 阴性阳性AKT2蛋白2．8741．791，4．610<0．01 阴性阳性
3 讨论
胶质母细胞瘤主要起源于神经胶质细胞，是恶性程度最高的胶质瘤，也是最常见的神经系统恶性肿瘤，发病率占颅内肿瘤的10.2%[2-5]。

近年胶质母细胞瘤的治疗方法不断改进，但预后仍未明显改善。

因此，研究胶质母细胞瘤发生的生物学机制对进一步提高治疗效果及预后具有重要意义,同时也为胶质母细胞瘤的靶向药物治疗提供理论依据。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide3-kinase/protein kinase B，PI3K/AKT)信号通路是由细胞外向细胞内传递信号的主要途径之一[6-8]。

有研究表明，PI3K/AKT信号通路异常活化可引起正常细胞的无限增殖，促进恶性肿瘤的发生、发展。

AKT又称蛋白激酶B，是PI3K/AKT信号通路中的关键成员[8]。

目前已发现三个AKT同源基因，分别为AKT1、AKT2和AKT3，编码分子量为57 kd的相应蛋白，其中AKT1和AKT2蛋白在多种肿瘤中高表达[7-8]。

国内外研究显示，AKT1及AKT2蛋白的表达与胃癌、乳腺癌和黑色素瘤等恶性肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移密切相关[9-13]。

本研究通过免疫组化发现AKT1和AKT2蛋白在胶质母细胞瘤中均呈不同程度的高表达，且明显高于正常脑组织，说明
AKT1及AKT2蛋白可能在胶质母细胞瘤的发生、发展中起一定的作用。

目前关于AKT1及AKT2蛋白的表达及其与肿瘤预后的研究较少。

Wang等[14]研究发现AKT1和AKT2蛋白表达与鼻咽癌预后相关，且高表达患者预后更差。

Gu
等[7]研究显示，PI3K/AKT在胃癌组织中的阳性表达率均高于正常胃黏膜，且高表达患者OS亦较短。

本研究发现AKT1与AKT2蛋白表达阳性的患者OS明显低于阴性患者。

运用多变量Cox比例风险回归分析显示，胶质母细胞瘤的预后与手术
切除程度、辅助治疗、AKT1和AKT2蛋白的表达风险系数密切相关，说明AKT1、AKT2蛋白表达阴性的患者预后较好。

综上，AKT1和AKT2蛋白过度表达可能是胶质母细胞瘤重要的分子生物学特征，与预后密切相关，表明AKT1和AKT2蛋白表达可能作为胶质母细胞瘤预后的判断指标之一。

然而，本研究样本量小，观察指标单一，需大规模多中心循证医学证据支持。

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