尖锐湿疣患者治疗前后血清中VEGF、HIF-1 α水平的测定

尖锐湿疣患者治疗前后血清中VEGF、HIF-1 α水平的测定
摘要】目的检测尖锐湿疣（C A ）患者治疗前后血清中血管内皮生长因子（V E G F ）、缺氧诱导因子- 1 α( H I F - 1 α)的表达水平。

方法采用酶联免疫吸附法（E L I
S A ）检测4 0 例尖锐湿疣患者治疗前、治疗后2 周、治疗后1 月血清中V E G F 、HIF -1α的表达，并与10例健康人进行比较。

结果 CA组治疗前血清中VEGF的表
达水平明显高于健康对照组(P<0.001)，差异具有统计学意义(P< 0. 01)。

治疗后2
周血清中VEGF比治疗前明显下降(P< 0. 01)，治疗后1月下降至正常水平，与健
康对照组比较差异无统计学意义。

CA组治疗前血清HIF - 1α的表达水平与健康对
照组比较，差异无统计学意义(P> 0. 01 )；治疗后2月、治疗后1月与治疗前比较，无显著性变化。

结论 CA皮损组织产生过量的VEGF可能分泌至血液系统中引起血
清中VEGF的高水平表达，而H I F - 1α不能引起血清中的高水平表达。

【关键词】尖锐湿疣；血管内皮生长因子；缺氧诱导因子- 1 α；血清
Detection of Serum VEGF and HIF-1αin Condyloma Acuminatum Before and Afer TreatmentWANG Lu-mei,LI Jiu-jie,LIN Xue-XiangDepartment of Dermatology,Dongguan People’s Hospital,Guangdong 523000,China
【Abstract】Objective To delete the serum expression levels of vascular endothelial growth factor(VEGF) and Hypoxia jnducible factor-1α
（HIF-1α） before and after treatment in condyloma acuminatum (CA).Methods The serum expressions of VEGF and HIF-1αin 40 CA patients and10 normal human were detected by enzyme linked—immunosorbent assay technique (ELISA ).Results The serum level of VEGF were significantly higherthan that in nomal human and significantly reduced after treatment.The serum expression of HIF-1α were not significantly higher than that in nomal humanand not significantly reduced after treatment.Conclusion The over-expression of VEGF in CA tissiu induce high level expression of VEGF in serum. Theover-expression of HIF-1αin CA tissiu does not induce high level expression of HIF-1α in serum.
【Key words】Condylomata acuminata；Vascular endothelial growth factor；Hypoxia jnducible factor-1α；Serum
【中图分类号】R 5 5 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8231（2011）09-13 13-03
尖锐湿疣（CA）是由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起的生殖器部位皮肤黏膜
良性增生性疾病。

目前大量免疫组化实验证实，在CA病理组织中存在多种促血
管生成相关因子的高水平表达，其中最为重要的有血管内皮生长因子（VEGF）[1,2]、缺氧诱导因子(HIF-1α)[3]，在促进血管生成方面发挥重要作用。

而CA患者
血清中是否存在这两种因子的高水平表达及其与病情严重程度的相关性如何，国
内外尚无相关文献报道。

我们采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例CA患者治疗前、治疗后2周、治疗后1月血清中VEGF、HIF-1α的表达情况并与病情的严重程度做相关性分析。

1材料与方法
1.1材料
1.1.1病例资料：CA患者40例，男17例，女23例。

年龄19～58岁，平均31.6岁。

所有患者临床表现典型，5%醋酸白实验（+），并经病理学确诊。

取材
前未接受过任何治疗，且无其他系统疾病。

对照组为10例健康成年人，男4例，女6例。

年龄19～49岁，平均32.0岁。

1.1.2试剂与仪器：VEGF ELISA试剂盒购于晶美生物技术有限公司。

实验仪
器为美国STAT FAX-2100酶标仪。

2方法
2.1血清采集、保存：采用BD公司凝血型采血管收集学标本。

CA组于治疗前、治疗后2周、治疗后1月各无菌抽血2.0ml，不加抗凝剂，30min后
1000bpm离心15min，小心吸取血清，冻存于-20℃冰箱（避免反复冻融）待集中
后测定。

健康对照组采血一次，采集、保存同前。

2.2血清检测：采用双抗夹心ELISA法检测。

每份血清检测VEGF、HIF-1α两
种因子的表达水平。

检测步骤严格按照VEGF试剂盒、HIF-1α试剂盒说明书进行，操作步骤主要为：(1)每孔加人100ul RD1W稀释液；(2)在每个孔中加人
200ulConjugate，将酶标板封闭于塑料袋中，室温下孵育2h；(3)取出Color Reagent A和B，置于37℃避光预温30min，然后按1：1混合备用；(4)在每个孔
中加人2001ul 1：1混合显色液，室温避光孵育25min；(5)在每个孔中加人50ul
终止液，并在30min内用美国STAT FAX-2100酶标仪测定，采用双波长读取光密
度值(OD)及其相应的血清各因子浓度值(p g／m1 )，4 5 0nm为主波长，630nm为
副波长。

2.3统计学分析：所有实验数据采用均数±标准差(x ±s)，运用SPSS统计软
件包分析。

CA组治疗前与健康对照组进行成组u检验分析，治疗前后两组间进行配对u检验分析，以0．01≤P<0．05为显著性差异，P<0．01为非常显著性差异；CA组治疗前后与PASI相关性作直线相关性分析。

3结果
3.1血清中VEGF检测结果
治疗后2周血清中VEGF比治疗前明显下降，(P<0.05)。

治疗后1月下降至正
常水平，血清中VEGF表达水平无显著性差异(P＞0.1)。

3.2血清中HIF-1α检测结果
CA组治疗前血清HIF-1α水平与健康对照组比较，无显著性差异(P>0.1)。

CA
组治疗后2周、治疗后1月血清中HIF-1α与健康对照组比较，无显著性差异
(P>0.1)。

4讨论
CA具有与银屑病相似的病理学特征：真皮微血管明显增多，管腔明显扩张。

血管内皮细胞过度增生。

这是为表皮角质细胞过度增殖提供充足营养物质所引起
的代偿性反应。

微血管的过度增生有赖于促血管生成因子的产生，VEGF是目前发现的作用最强、特异性最高的促血管生成因子。

目前大量免疫组化实验证实，在CA[1-3]、银屑病[4,5]的病理组织中存在VEGF的高水平表达，在促进血管生成方
面发挥重要作用。

VEGF发挥的促血管生成机制为:促使微血管的通透性增加，使
血液中的大分子物质如纤维蛋白原等进入细胞外基质，形成纤维凝胶作为暂时性
基质支持新生血管和基质细胞生长；促使内皮细胞有丝分裂、增殖和迁移，从而
促进新生血管生成。

国内外研究证实[6]，在银屑病患者的血清中存在高水平的VEGF表达，部分与病情的严重程度相关。

本研究结果显示，在CA患者血清中，
同样存在VEGF的高水平表达，且其表达水平与病情的严重程度呈正相关，即CA
病情越重，其血清中VEGF表达水平越高。

这可能由于缺氧是产生VEGF的主要因素[7]；随CA病理组织过度增生越显著，所致微环境的缺氧程度越严重，病理组
织原位产生的VEGF也越多[2]，当其量达到一定水平时即进入血液系统引起血清
中VEGF的高表达。

因此二者的正相关关系，提示CA患者血清中VEGF的表达水
平可以作为评价病情的严重程度的相关性指标。

本研究结果显示CA患者治疗后2周、治疗后1月，血清VEGF表达进行性下
降并恢复正常。

这可能由于通过治疗，随病理组织的去除，局部缺氧微环境的恢复，不再产生过量的VEGF，血清中的VEGF也随之恢复正常。

通过本实验从血清
学的角度再次证实，CA病理组织是产生过量VEGF的部位所在，也是引起血清中VEGF高水平表达的原因所在。

这与免疫组化实验显示的CA过度增殖的表皮角质
形成细胞是产生VEGF的主要细胞的结果相一致。

治疗前后CA患者血清中VEGF
的表达下降水平与复发性有无相关仍有待进一步研究。

缺氧诱导因子1（HIF-1）是在缺氧状态下血管生成的核心调控因子，能通过
影响其它血管因子（如VEGF）的表达，直接参与血管生成的全过程。

它以异源二聚体的形式存在，由HIF-1α亚单位和HIF-1β亚单位组成。

其中HIF-1β与稳定
HIF-1及其二聚化有关，在正常细胞和缺氧细胞中均有表达，而HIF-1α是唯一的
氧调节亚单位，决定HIF-1的活性，常氧环境下很难检测到，缺氧状态下开始转录、表达[8]。

HIF-1α在人体多种恶性肿瘤中高水平表达[8]，在人体多种肿瘤的一
些癌前病变和早期癌变中也有高水平表达[8]，在良性肿瘤组织中处于正常水平[8]。

免疫组化实验证实，CA组织中HIF-1α的表达强度高于正常组织，且与VEGF的表
达呈正相关[3]，提示可能是由于CA的迅速生长导致组织缺氧，缺氧可能促使
HIF-1α产生增加，并诱导VEGF表达上调并过度表达以促进CA组织血管的形成、
血供增加。

本研究结果显示，治疗前CA患者血清中未检测到HIF-1α的高水平表达，治疗后亦无明显变化，表明HIF-1α仅限于CA病理组织的原位表达，并在原
位发挥促血管生成作用，而血清中无高水平表达的HIF-1α。

这可能由于HIF-1α虽
在CA组织中原位局部高表达，但其量尚不足以达到进入血液中的水平。

通过本实验，从血清学的角度证实CA病理组织是产生VEGF的原因所在，随
病理组织去除，原位组织和血清中的VEGF恢复正常。

而HIF-1α不存在与VEGF
相似的表达方式。

参考文献
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