利福霉素B发酵工艺研究
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６
文献标识码：Ａ
利福霉索（ｒｉｆａｍｙｃｉｎｓ）属于安莎类抗生素，由地中 海拟无枝酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｎｗｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）产生。广 泛应用于结核病、麻风病等分枝杆菌感染的治疗。 抗生素发酵水平的提高，主要依赖于菌种选育及 培养基和培养条件的优化。利福霉素通过菌种选育获 得高产菌株从而提高生产水平已有报道【１’２ Ｊ。新昌制 药厂的利福霉索Ｂ产生菌通过推理选育获得的突变 株，生产能力已提高了一倍，但在原发酵工艺中不能体 现出应有的优势。本文通过对利福霉素Ｂ发酵培养 基和培养条件优化，找到一条适合该高产菌种规模化 发酵的生产工艺，从而提高利福霉素Ｂ的生产水平。 ｌ材料和方法 １．１菌种 地中海拟无拟酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ） ＸＣ－３０１，浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供，该 菌种已经多次诱变处理。 １．２材料 种子培养基（％）葡萄糖１．５，黄豆饼粉１．０，淀 粉１．５，蛋白胨１．０，ＫＨ２ＰＯ，Ｉ ０．２，泡敌０．０４。 发酵培养基（％）葡萄糖１０．０，蛋白胨１．０，黄豆
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０ ２４ ４８ ７２ ９６ 丌ｈ１ Ａ：Ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｕｇａｒ １２０ １４４ １６８ ９２
Ｈ：Ａｍｉｎｏ
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Ｄ：Ｍｙｃｄｉｕ６ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ； ｆｅｅｄｉｎｇ ｒｌｆａｍｙｃｉｎ Ｂ
Ｅ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉ＇ｄｔｙ
１：Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｅｅｄｉｎｇ；２：Ｂａｔｃｈ
［４］Ｓｅ商Ｐ，Ｔｈｉｅｍａｎｎ Ｊ
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［５］Ｘｉｏｎｇ ［６］Ｎｉ
酵罐进行利福霉素Ｂ的工业化生产，培养温度（２７ 果见Ｆｉｇ．４。
０．５）℃，在７２ｈ左右开始流加补葡萄糖和氨水，发酵结
从Ｆｉｇ．４可以看出，在６０ｍ３罐利福霉素Ｂ发酵代 谢与１５Ｌ罐的发酵类似，但发酵效价比小试罐又有明 显提高，达到２２０００ｕ／ｍｌ以上，可能是放大后改善了补 料对发酵环境的影响，减少了搅拌剪切力对菌丝的影 响。 在６０ｍ３罐中发酵至１２０ｈ有氨基氮回升的现象， 是由于培养过程中糖耗较快，补糖增多引起ｐＨ下降， 促使氨水补人而引起。氨基氮回升对利福霉素Ｂ的 发酵影响正作进一步的研究。
Ｆｌｇ．３
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Ｒｉｆａｍｙｃｉｎ Ｂ ｌｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｅｅｄ ｉｎ
参考文献
【１］Ｊｉｎ
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Ｊ，Ｊｉｎ Ｙ Ｐ．ｄ ａｌ
Ｒａｔｉｅａ、ａｌ ｓｅｌｅｅｔｉｃｎａ ｏｆ
１０９
ｒｌｆａｍｙｄｎ Ｂ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ Ｎｏｃａｒｄｉａ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ ｉ Ａｎｔｉｂ÷ｏｔ，１９９５，２０（３）－：２６５
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文章编号：１００１—８６８９（２００３）０３—０１３７。０４
利福霉素Ｂ发酵工艺研究
盂根水１・２孙新强２金一平２裘娟萍１金志华３
（１浙江工业大学药学院． 杭州３１００３２；
新昌３１２５００；
２浙－扛医药股份有限公司新昌制药厂，
３浙江大学材料与化工学院生物工程研究所，
１．５．５
饼粉１．０，鱼粉０．５，巴比妥纳０．１５，ＫＮ哂０．８，
ＫＨ２Ｐ０４
Ｏ．０２．ＣａＣ０３ ０．３，ＣｏＣｌ２
ｌｇｇ／ｍｌ，泡敌０．０４。
１．３培养条件 发酵瓶培养条件 时间７～８ｄ。
收稿日期：２００２＿０２．２２ 作者简介：盂根水，男，生于１９７０年．硕士，工程师。
ｐＨ的测定用ｐＨ电极测定。
Ｔａｂ．３ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＫＨｚＰ０４
ＸＣ－３０
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要巴比妥钠诱导就能大量台成利福霉素Ｂ，这样可大
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为巴比妥钠对利福霉索Ｂ的刺激作用是诱导现象”Ｊ。 采用在基础料中不加巴比妥钠及培养２４ｈ补加与原配 方等量的巴比妥钠，以原配方作为对照进行培养，发酵 结果见Ｔ曲２。
Ｔａｂ．２ ＩｎｆｌｕｅｎＣｅ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
２．２溶氧对利福霉素Ｂ的生物合成的影响 在１５Ｌ发酵罐中，在控制通气量１：ｌｖｖｍ，搅拌转 速５５０ｒ／ｍｉｎ，堵养温度２７℃的条件下，利福霉素Ｂ发 酵过程的溶氧变化见Ｆｉｇ．Ｉ。 从Ｆｉｇ．１结果可知，在利福霉素Ｂ的发酵过程中， 当培养至４０－７０ｈ时，发酵液中的溶氧达到最低值，说 明在４０－－７０ｈ时间段中菌体耗氧速率最快。通过改变 通气量、调节搅拌转速控制该段时问的溶氧水平进行 利福霉素Ｂ发酵，以研究溶氧对利福霉素Ｂ发酵的影 响，结果见Ｆｉｇ．２。 从Ｆｉｇ ２结果可以发现，当溶氧低于２０％时明显 对利福霉索Ｂ的生物合成有抑制作用。溶氧越低，发 酵效价也就越低，当发酵罐中的溶氧长时间处于０的
１．ｏ以上。
培养温度２７℃，通气
１：０．７ｖｍ，罐压Ｏ．０５ＭＰａ，搅拌转速１３０ｒ／ｍｉｎ，接种量
１．５分析方法 １．５．１还原糖的测定斐林试剂法旧』。 １．５．２氨基氮的测定甲醛法Ｌ３ｊ。 １．５．３菌丝浓度的测定取发酵液１０ｍｌ于离心沉淀 管中，在４０００ｒ／ｍｉｎ，测沉淀物在发酵液中的比例即得 菌丝浓度。 １．５．４发酵效价的测定分光光度法【４ Ｊ。
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Ａ：ｐＨ；Ｂ：Ａｍｉｎｏ ｎｉｔｒｏｇｅｒｔ；Ｃ：Ｍｙｃｅｌｉｍｎ Ｆｉｇ．４
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；Ｄ：Ｒｅｄｕｃｅｄ
Ｐｒｏｇ∞ｉｎ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂｉ∞ｙｎｔｈｅｆｔｓ ｏｆ
ｐｒｏｄｕｃｅｒ Ｎｏｃａｒｄｉａ
ｍｅｄｉｆｅｒｒａｎｅｉ［Ｊ］Ｃｈｉｎ，Ａｎｔｉｂｉｏｔ，１９９１．
Ｄ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｍ】Ｂｅｉ—
ａｎｔｂｉｏｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｋａｎｇｓｈｅｎｇｓｕ，１９８２．７（２）：６９
１
在１５ｌ。发酵罐中采用流加补料和分批补料两种 补料方式进行利福霉索Ｂ发酵，结果见Ｆｉｇ．３。 从发酵结果可以看出，流加补料明显优于分批补 料工艺，发酵效价比后者提高了２５％。主要原因有二 个：一是在分批补料时，每次补入的葡萄糖较多，虽然 在两个取样点还原糖浓度都在工艺控制范围内，但在 培养过程中还原糖浓度的波动幅度较大，葡萄糖的浓 度短时间内增多，会产生分解代谢阻遏；二是由于葡萄 糖的ｐＨ较低，一般在４．３－－４．８，当一次性加入葡萄糖 量较大时，会引起发酵液ｐＨ快速下降，从而促使氨水 加快朴人；当培养过程中没有补入葡萄糖时，由于菌体 的代谢，ｐＨ叉会上升，由于发酵环境波动的加剧，可能 会促使菌丝二次生长而影响次级代谢，同时随着氨水
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１０３
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７
Ｔａｂ
３结果表明，磷酸盐的浓度０．０００５％～
０．０７％对利福霉素Ｂ的生物合成不产生影响，磷酸盐 浓度为０．１％对利福霉素Ｂ的生物合成产生明显的抑 制作用．此结果在１５Ｌ发酵罐已得到验证；但在培养 基中适当增加磷酸盐，可延缓菌丝衰老、自溶，减少发 酵液的泡洙，可以改善发酵液的质量，有利提取过滤， 另外，研究还发现用菌种Ａ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ ＸＣ－３０Ｊ进
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Ｂ
结果发现三者的发酵效价基本接近，说明在利福 霉素Ｂ的发酵过程中，巴比妥对利福霉素Ｂ的生物合 成没有影响，表明菌种Ａ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ 大降低生产成本。 ２．４磷酸盐的影响 磷酸盐是菌丝生长所必需的重要元素，能促进菌 丝的生长，但磷酸盐能抑制次级代谢产物的合成，在利 福霉素Ｂ的发酵中，过多的磷酸盐会形成大量无活性 的利福霉素Ｙ。在培养基中加入不同量的磷酸二氢钾 在摇瓶中进行发酵，结果见Ｔａｂ
培养温度为３０℃，装量２５０ｍｌ
１．５．６溶氧的测定用溶氧电极在线测定。 ２结果与讨论 ２．１温度对利福霉索Ｂ发酵的影响
三角瓶装２５ｍｌ，摇床转速２２０ｒ／ｍｉｎ，接种量５％，培养
万 方数据
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在１５Ｌ发酵罐中研究了温度（２７℃、２５＇１２、３０＂Ｃ） 条件下，基本不产利福霉素Ｂ；溶氧高于２５％时，对利 对利福霉素Ｂ发酵的影响，结果见Ｔ扎１。结果表明 培养温度２７℃对利福霉素Ｂ发酵最有利，其发酵效价 比原工艺（３０℃）提高了４３％，而在２５℃下发酵，发酵 效价很低，同时糖利用也很慢。
１３９
行利福霉素Ｂ发酵生产，在培养基中加入适量磷酸盐 不会产生利福霉素Ｙ。 ２．５流加补料和分批补料对利福霉素Ｂ的生物合成
的影响
的补人，Ｎ瞄来不及消耗，ＮＨｉ的大量存在，对利福
霉素生物合成的前体物质３．氨基．５一羟基苯甲酸的合 成产生抑制作用［“，从而抑制利福霉素的生物合成。
２．６
６０ｍ３发酵罐的工业化生产 利用以上１５Ｌ小试罐的培养结果，在６０ｍ３的发
Ｏ．０５，ＫＮ０３ ０．１，ｃａｃ０３
１５Ｌ自动发酵罐培养条件通过ｌ：１（ｖｍ）；搅拌
转速５００ｒ／ｍｉｎ；接种量１０％；培养温度０～１３０ｈ： ３０℃；１３０ｈ～放罐：２８℃。 ６０ｍ３发酵罐培养条件 １０％，培养时间９ｄ。 １．４补料控制 在发酵培养８０ｈ左右，当还原糖低于３．０时开始 补人葡萄糖，控制还原糖浓度在１．０％～１．５％。当 ｐＨ在６．４时，自动补入氨水，控制ｐＨ在６．４左右。 流加补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖 的浓度，设定每小时的补料量，以匀速自动补人，控制 发酵液中还原糖在１．ｏ以上。 分批补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖 的浓度，采用每隔６ｈ补一次葡萄糖，控制还原糖在
Ｔａｂ．１ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
福霉素Ｂ的生物合成基本没有影响，说明只需控制溶
氧在２５％以上即可满足利福霉素Ｂ菌丝生长和产物 合成的需要。因此利福霉素Ｂ的发酵过程中最低溶 氧应控制在２５％以上，以此来确定发酵罐的通气量和 搅拌功率。
Ｏｎ
ｒｉｆａｍｙｃｉｎ Ｂ
２．３
巴比妥对利福霉素Ｂ生物合成的影响 巴比妥钠能刺激利福霉素Ｂ的生物合成，一般认
杭州３１００２７）
摘要：研究温度、溶氧、巴比妥、磷酸盐及补料方式对利福霉素Ｂ发酵的影响。结果表明在控制培养温 度２７１２、溶氧２５Ｉｊ６以上的条件下，采用流加补料工艺，利福霉素Ｂ的发酵效价较原工艺有明显提高，此工艺已 在６０ｍ３发酵罐中进行工业化生产，发酵效价比原生产工艺提高了一倍叭上。 关键词：利福霉素Ｂ；发酵；工艺 中国分类号：ＴＱ９２０
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Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ １３０
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ｒｉｆａｍｙｃｉｎ Ｂ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
万 方数据
～————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一——
中国抗生素杂志２００３年３月第２８卷第３期
文献标识码：Ａ
利福霉索（ｒｉｆａｍｙｃｉｎｓ）属于安莎类抗生素，由地中 海拟无枝酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｎｗｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）产生。广 泛应用于结核病、麻风病等分枝杆菌感染的治疗。 抗生素发酵水平的提高，主要依赖于菌种选育及 培养基和培养条件的优化。利福霉素通过菌种选育获 得高产菌株从而提高生产水平已有报道【１’２ Ｊ。新昌制 药厂的利福霉索Ｂ产生菌通过推理选育获得的突变 株，生产能力已提高了一倍，但在原发酵工艺中不能体 现出应有的优势。本文通过对利福霉素Ｂ发酵培养 基和培养条件优化，找到一条适合该高产菌种规模化 发酵的生产工艺，从而提高利福霉素Ｂ的生产水平。 ｌ材料和方法 １．１菌种 地中海拟无拟酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ） ＸＣ－３０１，浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供，该 菌种已经多次诱变处理。 １．２材料 种子培养基（％）葡萄糖１．５，黄豆饼粉１．０，淀 粉１．５，蛋白胨１．０，ＫＨ２ＰＯ，Ｉ ０．２，泡敌０．０４。 发酵培养基（％）葡萄糖１０．０，蛋白胨１．０，黄豆
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Ｅ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉ＇ｄｔｙ
１：Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｅｅｄｉｎｇ；２：Ｂａｔｃｈ
［４］Ｓｅ商Ｐ，Ｔｈｉｅｍａｎｎ Ｊ
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Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９６７；６：２Ｉ
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酵罐进行利福霉素Ｂ的工业化生产，培养温度（２７ 果见Ｆｉｇ．４。
０．５）℃，在７２ｈ左右开始流加补葡萄糖和氨水，发酵结
从Ｆｉｇ．４可以看出，在６０ｍ３罐利福霉素Ｂ发酵代 谢与１５Ｌ罐的发酵类似，但发酵效价比小试罐又有明 显提高，达到２２０００ｕ／ｍｌ以上，可能是放大后改善了补 料对发酵环境的影响，减少了搅拌剪切力对菌丝的影 响。 在６０ｍ３罐中发酵至１２０ｈ有氨基氮回升的现象， 是由于培养过程中糖耗较快，补糖增多引起ｐＨ下降， 促使氨水补人而引起。氨基氮回升对利福霉素Ｂ的 发酵影响正作进一步的研究。
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Ｒｉｆａｍｙｃｉｎ Ｂ ｌｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｅｅｄ ｉｎ
参考文献
【１］Ｊｉｎ
Ｚ Ｈ，Ｚｈａｎｇ Ｇ
Ｊ，Ｊｉｎ Ｙ Ｐ．ｄ ａｌ
Ｒａｔｉｅａ、ａｌ ｓｅｌｅｅｔｉｃｎａ ｏｆ
１０９
ｒｌｆａｍｙｄｎ Ｂ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ Ｎｏｃａｒｄｉａ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ ｉ Ａｎｔｉｂ÷ｏｔ，１９９５，２０（３）－：２６５
！里垫竺茎墨查！竺！！！望竺翌童竺！塑—————————————二里一
文章编号：１００１—８６８９（２００３）０３—０１３７。０４
利福霉素Ｂ发酵工艺研究
盂根水１・２孙新强２金一平２裘娟萍１金志华３
（１浙江工业大学药学院． 杭州３１００３２；
新昌３１２５００；
２浙－扛医药股份有限公司新昌制药厂，
３浙江大学材料与化工学院生物工程研究所，
１．５．５
饼粉１．０，鱼粉０．５，巴比妥纳０．１５，ＫＮ哂０．８，
ＫＨ２Ｐ０４
Ｏ．０２．ＣａＣ０３ ０．３，ＣｏＣｌ２
ｌｇｇ／ｍｌ，泡敌０．０４。
１．３培养条件 发酵瓶培养条件 时间７～８ｄ。
收稿日期：２００２＿０２．２２ 作者简介：盂根水，男，生于１９７０年．硕士，工程师。
ｐＨ的测定用ｐＨ电极测定。
Ｔａｂ．３ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＫＨｚＰ０４
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要巴比妥钠诱导就能大量台成利福霉素Ｂ，这样可大
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为巴比妥钠对利福霉索Ｂ的刺激作用是诱导现象”Ｊ。 采用在基础料中不加巴比妥钠及培养２４ｈ补加与原配 方等量的巴比妥钠，以原配方作为对照进行培养，发酵 结果见Ｔ曲２。
Ｔａｂ．２ ＩｎｆｌｕｅｎＣｅ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
２．２溶氧对利福霉素Ｂ的生物合成的影响 在１５Ｌ发酵罐中，在控制通气量１：ｌｖｖｍ，搅拌转 速５５０ｒ／ｍｉｎ，堵养温度２７℃的条件下，利福霉素Ｂ发 酵过程的溶氧变化见Ｆｉｇ．Ｉ。 从Ｆｉｇ．１结果可知，在利福霉素Ｂ的发酵过程中， 当培养至４０－７０ｈ时，发酵液中的溶氧达到最低值，说 明在４０－－７０ｈ时间段中菌体耗氧速率最快。通过改变 通气量、调节搅拌转速控制该段时问的溶氧水平进行 利福霉素Ｂ发酵，以研究溶氧对利福霉素Ｂ发酵的影 响，结果见Ｆｉｇ．２。 从Ｆｉｇ ２结果可以发现，当溶氧低于２０％时明显 对利福霉索Ｂ的生物合成有抑制作用。溶氧越低，发 酵效价也就越低，当发酵罐中的溶氧长时间处于０的
１．ｏ以上。
培养温度２７℃，通气
１：０．７ｖｍ，罐压Ｏ．０５ＭＰａ，搅拌转速１３０ｒ／ｍｉｎ，接种量
１．５分析方法 １．５．１还原糖的测定斐林试剂法旧』。 １．５．２氨基氮的测定甲醛法Ｌ３ｊ。 １．５．３菌丝浓度的测定取发酵液１０ｍｌ于离心沉淀 管中，在４０００ｒ／ｍｉｎ，测沉淀物在发酵液中的比例即得 菌丝浓度。 １．５．４发酵效价的测定分光光度法【４ Ｊ。
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Ｄ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｍ】Ｂｅｉ—
ａｎｔｂｉｏｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｋａｎｇｓｈｅｎｇｓｕ，１９８２．７（２）：６９
１
在１５ｌ。发酵罐中采用流加补料和分批补料两种 补料方式进行利福霉索Ｂ发酵，结果见Ｆｉｇ．３。 从发酵结果可以看出，流加补料明显优于分批补 料工艺，发酵效价比后者提高了２５％。主要原因有二 个：一是在分批补料时，每次补入的葡萄糖较多，虽然 在两个取样点还原糖浓度都在工艺控制范围内，但在 培养过程中还原糖浓度的波动幅度较大，葡萄糖的浓 度短时间内增多，会产生分解代谢阻遏；二是由于葡萄 糖的ｐＨ较低，一般在４．３－－４．８，当一次性加入葡萄糖 量较大时，会引起发酵液ｐＨ快速下降，从而促使氨水 加快朴人；当培养过程中没有补入葡萄糖时，由于菌体 的代谢，ｐＨ叉会上升，由于发酵环境波动的加剧，可能 会促使菌丝二次生长而影响次级代谢，同时随着氨水
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Ｔａｂ
３结果表明，磷酸盐的浓度０．０００５％～
０．０７％对利福霉素Ｂ的生物合成不产生影响，磷酸盐 浓度为０．１％对利福霉素Ｂ的生物合成产生明显的抑 制作用．此结果在１５Ｌ发酵罐已得到验证；但在培养 基中适当增加磷酸盐，可延缓菌丝衰老、自溶，减少发 酵液的泡洙，可以改善发酵液的质量，有利提取过滤， 另外，研究还发现用菌种Ａ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ ＸＣ－３０Ｊ进
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结果发现三者的发酵效价基本接近，说明在利福 霉素Ｂ的发酵过程中，巴比妥对利福霉素Ｂ的生物合 成没有影响，表明菌种Ａ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ 大降低生产成本。 ２．４磷酸盐的影响 磷酸盐是菌丝生长所必需的重要元素，能促进菌 丝的生长，但磷酸盐能抑制次级代谢产物的合成，在利 福霉素Ｂ的发酵中，过多的磷酸盐会形成大量无活性 的利福霉素Ｙ。在培养基中加入不同量的磷酸二氢钾 在摇瓶中进行发酵，结果见Ｔａｂ
培养温度为３０℃，装量２５０ｍｌ
１．５．６溶氧的测定用溶氧电极在线测定。 ２结果与讨论 ２．１温度对利福霉索Ｂ发酵的影响
三角瓶装２５ｍｌ，摇床转速２２０ｒ／ｍｉｎ，接种量５％，培养
万 方数据
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在１５Ｌ发酵罐中研究了温度（２７℃、２５＇１２、３０＂Ｃ） 条件下，基本不产利福霉素Ｂ；溶氧高于２５％时，对利 对利福霉素Ｂ发酵的影响，结果见Ｔ扎１。结果表明 培养温度２７℃对利福霉素Ｂ发酵最有利，其发酵效价 比原工艺（３０℃）提高了４３％，而在２５℃下发酵，发酵 效价很低，同时糖利用也很慢。
１３９
行利福霉素Ｂ发酵生产，在培养基中加入适量磷酸盐 不会产生利福霉素Ｙ。 ２．５流加补料和分批补料对利福霉素Ｂ的生物合成
的影响
的补人，Ｎ瞄来不及消耗，ＮＨｉ的大量存在，对利福
霉素生物合成的前体物质３．氨基．５一羟基苯甲酸的合 成产生抑制作用［“，从而抑制利福霉素的生物合成。
２．６
６０ｍ３发酵罐的工业化生产 利用以上１５Ｌ小试罐的培养结果，在６０ｍ３的发
Ｏ．０５，ＫＮ０３ ０．１，ｃａｃ０３
１５Ｌ自动发酵罐培养条件通过ｌ：１（ｖｍ）；搅拌
转速５００ｒ／ｍｉｎ；接种量１０％；培养温度０～１３０ｈ： ３０℃；１３０ｈ～放罐：２８℃。 ６０ｍ３发酵罐培养条件 １０％，培养时间９ｄ。 １．４补料控制 在发酵培养８０ｈ左右，当还原糖低于３．０时开始 补人葡萄糖，控制还原糖浓度在１．０％～１．５％。当 ｐＨ在６．４时，自动补入氨水，控制ｐＨ在６．４左右。 流加补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖 的浓度，设定每小时的补料量，以匀速自动补人，控制 发酵液中还原糖在１．ｏ以上。 分批补料依据发酵液中还原糖的含量和补料糖 的浓度，采用每隔６ｈ补一次葡萄糖，控制还原糖在
Ｔａｂ．１ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
福霉素Ｂ的生物合成基本没有影响，说明只需控制溶
氧在２５％以上即可满足利福霉素Ｂ菌丝生长和产物 合成的需要。因此利福霉素Ｂ的发酵过程中最低溶 氧应控制在２５％以上，以此来确定发酵罐的通气量和 搅拌功率。
Ｏｎ
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２．３
巴比妥对利福霉素Ｂ生物合成的影响 巴比妥钠能刺激利福霉素Ｂ的生物合成，一般认
杭州３１００２７）
摘要：研究温度、溶氧、巴比妥、磷酸盐及补料方式对利福霉素Ｂ发酵的影响。结果表明在控制培养温 度２７１２、溶氧２５Ｉｊ６以上的条件下，采用流加补料工艺，利福霉素Ｂ的发酵效价较原工艺有明显提高，此工艺已 在６０ｍ３发酵罐中进行工业化生产，发酵效价比原生产工艺提高了一倍叭上。 关键词：利福霉素Ｂ；发酵；工艺 中国分类号：ＴＱ９２０
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中国抗生素杂志２００３年３月第２８卷第３期