新型电喷雾式检测器CAD与蒸发光散射检测器ELSD用于分析黄芪甲苷的

自从２００５年对乙脑减毒活疫苗实施批签发至今，已签发该制品１７００余批，３亿多人份。

总体合格率在９９．７％以上。

对某企业生产的乙脑减毒活疫苗应用趋势分析后发现，该企业生产的乙脑减毒活疫苗质量较为稳定，批间一致性较好。

绝大部分检测结果都在警戒限内，偶尔有超出行动限的结果，在展开详细的调查后，未发现严重影响产品质量的因素。

总体上说明企业的生产工艺较为稳定，质量控制方法也比较稳定，从而保证了乙脑减毒活疫苗质量的稳定性。

标准品的检测结果是判定试验是否成立的关键因素，对标准品和内控品活性的趋势分析，首先可以反映标准品和内控品的稳定性，若其活性降低，不符合要求，则应制备新一代标准品。

其次可以间接反映试验方法的稳定性，试验系统中人员、仪器、试剂等若出现重大的变更或出现重大的操作失误，都可能对标准品的结果有重大的影响，可表现在结果超出警戒限或行动限，此时应溯源整个试验系统，查明原因后及时纠正，以保证试验结果的准确性。

对乙型脑炎病毒滴度参考品滴定结果的趋势分析结果，除反映参考品的稳定性较好，仍可继续分发使用。

也反应中检院和企业的方法都比较稳定，一致性也较好。

除对成品和标准品进行趋势分析外，企业在对原辅材料及工艺用水的质量控制中，也可纳入趋势分析的理念。

对供应商的检定结果及企业的检定结果进行趋势分析，以保证原辅材料的稳定性，从而从源头上保证生产过程的稳定性。

在对生产环境的控制中，也可纳入趋势分析的理念，对空气净化系统及温度控制系统监测结果进行趋势分析，及时发现异常并加以纠正。

在对生产环节的质量控制中，每一质控点的数据都可纳入到趋势分析中，以保证早期发现问题，及时解决问题。

在进行趋势分析时，有时需考虑一些特殊情况。

如标准品换代（特别是用于相对定量的标准品），实验系统、生产工艺中重大改变，都需重新累积批数来计算均值及标准差。

在对趋势分析结果进行分析时，也应考虑检定结果可能来自不连续批次的情况。

本文对乙型脑炎减毒活疫苗质量控制中的趋势分析原则和方法进行了阐述，并通过趋势分析，发现该制品的生产工艺和产品质量较为稳定，检定方法也比较稳定可靠。

趋势分析的方法可对其它生物制品、化学药品、医疗器械、食品及化妆品的质量控制有一定的借鉴意义。

参考文献：１．国家食品药品监督管理局．关于进一步实施生物制品批签发工作的通知〔ｚ〕．国食药监注〔２００５〕４２４号，２００５．２．中国药品生物制品检定所．关于对预防性疫苗类制品实行批签发相关事宜的通知〔ｚ〕．中检生〔２００５〕２０４７号，２００５．３．中国药品生物制品检定所．关于对乙型脑炎、脑膜炎球菌多糖疫苗实行生物制品批签发相关事宣的通知〔Ｚ〕．中检生〔２００５〕１５３１号，２００５４．贾丽丽，杨悦，董关木．完善我国生物制品批签发管理体系的研究〔Ｊ〕．中国药事，２０１０，２４（６）：５２３—５３０．４．贾丽丽，杨悦，王志伟等．乙型脑炎减毒活疫苗批签发管理与质量评价．中国药事，２００９，２３（１０）：９８９—９９２．６．ＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒＩｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔＬｏｔＲｅｌｅａｓｅｏｆＶａｃｃｉｎｅｓｂｙＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＡｕｔｈｏｒｉｔｉｅｓ．新型电喷雾式检测器ＣＡＤ与蒸发光散射检测器ＥＬＳＤ用于分析黄芪甲苷的对比研究刘兴国１，李丽红酗，李仁勇１，梁立娜１（１．赛默飞世尔科技，北京１０００８０；２．华北制药新药中心，石家庄０５００１５）摘要目的：比较质量型检测器ＥＬＳＤ和ＣＡＤ用于测定无紫外发色团物质黄芪甲苷的优劣。

方法：ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法，采用Ａｃｃｌａｉｍ１２０Ｃ１８色谱柱，流动相为乙
腈一水（３１：６９），流速ｌｍＬ／ｍｉｎ，ＥＬＳＤ检测器漂移管温度６５℃，雾化器温度４０℃，载气流速１．３Ｌ／ｍｉｎ；ＨＰＬＣ—Ｃ粒姆ǎ 捎茫粒悖悖欤幔椋?１２０Ｃ１８色谱柱，流动相为乙腈一水（３１：６９），流速ｌｍＬ／ｍｉｎ，ＣＡＤ检测器雾化器温度２５℃，载气压力３５ｐｓｉ。

结果：ＥＬＳＤ和ＣＡＤ都能够准确可靠地对黄芪甲苷进行测定，ＣＡＤ的检出限和定量限要比ＥＬＳＤ低很多。

结论：两种检测方法都可用来对中药复方制剂补心气口服液进行质量控制，两种检测器都是非线性响应的，可以通过对数关系转化为线木通讯作者李丽红，！竺！；！Ｑ§昼§塑呈塑§，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｌｈｏｎ９２１＠１６３．ｃｏｍ作者简介刘兴国，工程师，主要从事液相分离与分析方法开发，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｘｉｎｇｇｕｏ．１ｉｕ＠ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ——２９０——性响应；相对ＥＬＳＤ，ＣＡＤ具有更高的灵敏度和重现性。

关键词：电喷雾式检测器；蒸发光散射检测器：黄芪甲苷；补心气口服液Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｎｅｗｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ１ｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶＬＩＵＸｉｎｇｇｕ０１，ＬＩＬｉｈｏｎｇ孔，ＬＩＲｅｎｙｏｎ９１，ＬＩＡＮＧＬｉｎａｌ（１．ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８０，Ｃｈｉｎａ：２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＮＣＰＣ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１５，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｍｅｒｉｔｓａｎｄｄｅｍｅｒｉｔｓｉｎｔｈｅａｎａｌｙｓｉＳｏｆＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶｂｙＥＬＳＤａｎｄＣＡＤ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅａｎａｌｙｓｉＳｂｙＨＰＬＣ－ＥＬＳＤｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎＡｃｃｌａｉｍ１２０Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄＩｍＬ／ｍｉｎｏｆｆｌｏｗｒａｔｅ，ｔｈｅｄｒｉｆｔｔｕｂｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ６５℃，ｔｈｅｎｅｂｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ４０℃，ｃａｒｒｉｅｒｇａｓｆｌｏｗｗａｓ１．３Ｌ／ｍｉｎ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉＳｂｙＨＰＬＣ—ＣＡＤｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄｌｍＬ／ｍｉｎｏｆｆｌｏｗｒａｔｅ，ｔｈｅｎｅｂｔｅｍｐｅｒａｔＵｒｅｗａｓ２５℃，ｃａｒｒｉｅｒｇａｓｐｒｅｓｓｕｒｅｗａｓ３５ｐｓｉ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＢｏｔｈＣＡＤａｎｄＥＬＳＤｄｅｔｅｃｔｏｒｓａｒｅａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｉｎｄｅｔｅｃｔｉｎｇＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ．ＦｏｒＣＡＤ，ｔｈｅＬＯＤａｎｄＬＯＱａｒｅｍｕｃｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＥＬＳＤ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｃａｎａ１１ｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＢｕｘｉｎｑｉｏｒａｌ１ｉｑｕｉｄ．ＢｏｔｈＣＡＤａｎｄＥＬＳＤｄｅｔｅｃｔｏｒｓｈａｖｅｎｏｎ—ｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｔｈａｔｃａｎｂｅｃｈａｎｇｅｄｔｏ１ｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅ
ｓｂｖｌｎ—ｌｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏＥＬＳＤ，ＣＡＤｈａｓｈｉｇｈｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｂｅｔｔｅｒｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＣＡＤ）：Ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ１ｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＥＬＳＤ）；ＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ；Ｂｕｘｉｎｑｉｏｒａｌ１ｉｑｕｉｄ近年来科研工作者一直致力于通用型检测器的研发和不断地更新，如示差、质谱和气溶胶型检测器，这类检测器可以测定紫外检测器所不能测定的没有发色团的物质，其中气溶胶型检测器是这类检测器中应用最广泛的。

蒸发光检测器和电雾式检测器（Ｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）都属于气溶胶型检测器。

蒸发光检测器发展于２０年前…，但由于其较差的灵敏度在一些领域不能有很好的应用晗１；电雾式检测器又称荷电气溶胶检测器，于２００４年推出，基于其高的灵敏度和更宽的动态响应范围，很快得到认可并在各种分离分析模式下（如反相色谱、离子色谱和空间排阻色谱等）均得到很好的应用Ｈ。

，被誉为新型通用型检测器，可以很好地用来分析常规化合物、大分子化合物、酸碱中性化合物和一些有机无机离子等诸多类化合物Ｈ。

本文研究了蒸发光检测器和电喷雾式检测器在测定中药成方制剂补心气口服液中黄芪甲苷时的一些性能对比。

１材料高效液相色谱仪（戴安Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ｓｅｒｉｅｓ）；ＥＬＳＤ（Ｖａｒｉａｎ３８５ＬＣ）；ＣＡＤ（Ｄｉｏｎｅｘｅｓａｃｏｒｏｎａｕｌｔｒａ）；超声波清洗器（ＫＱ－ＩＯＯＢ，浙江昆山）；电子天平（ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＡＢ２０４一Ｓ）；超纯水机（ＴｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃＤ１１９３１ｏ所用水均为超纯水。

黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１０７８１—２００６１３，规格２０ｍｇ），补心气口服液（湖北福人金身药业有限公司，规格１０ｍＬ／支）。

２方法与结果２．１色谱条件２．１．１ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ条件色谱柱ＡｃｃｌａｉｍＣ１８５ｕｍ，４．６Ｘ２５０ｍｍ，流动相：乙腈一水（３１：６９），流速：ｉｍＬ／ｍｉｎ；ＥＬＳＤ检测器漂移管温度６５℃，雾化器温度４０℃，载气流速１．３Ｌ／ｍｉｎ。

ＨＰＬＣ—ＣＡＤ条件色谱柱ＡｃｃｌａｉｍＣｌ８５ｕｍ，４．６ｘ２５０ｍｍ，流动相：乙腈一水（３１：６９），流速：ｌｍＬ／ｍｉｎ；２。

１．２ＣＡＤ检测器雾化器温度２５℃，载气压力３５ｐｓｉ。

２．２溶液制备２．２．１对照品溶液制备：精密称取黄芪甲苷１２．２ｍｇ置５０ｍＬ量瓶中，加入流动相使溶解并定容至刻度，即得。

２．２．２供试品溶液制备：精密量取补心气口服液２０ｍｌ，用水饱和正丁醇溶液振摇提取５次，每次２５ⅢＬ，一２９１—合并正丁醇液，用氨试液洗涤３次，每次２０ⅢＬ，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至１０ｌｌｌＬ量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得晦。

２．３检出限和定量限考察将浓度为０．２４４ｍｇ／ｍＬ对照品溶液不断稀释，注入液相色谱仪，考察ＣＡＤ的检出限和定量限（用信噪比Ｓ／Ｎ＝３时的进样质量作为检出限，信噪比Ｓ／Ｎ＝１０时的进样质量作为定量限）。

ＣＡＤ测定的检出限和定量限分别为０．０１２２ｕｇ和０．０３６６ｕｇ；ＥＬＳＤ的检出限和定量限分别为０．２９２８ｕｇ和０．４１４８ｕｇ。

２．４线性关系考察分别配制０．０３６６、０．２４４、Ｏ．３６６、０．６１和０．９７６ｍｇ／ｍＬ的黄芪甲苷
对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液２０ｕＬ注入液相色谱仪，用ＥＬＳＤ检测器进行测定；分别配制０．０２４４、０．１２２、０．２４４、０．６１和０．９７６ｍｇ／ｍＬ的黄芪甲苷对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液２０ｕＬ注入液相色谱仪，用ＣＡＤ检测器进行测定。

ＥＬＳＤ和ＣＡＤ均为非线性响应的检测器，但进行ｌｎ－ｌｎ对数关系转化后，峰面积和进样量是呈现线性关系的。

ＥＬＳＤ曲线方程为ｉｎｙ＝１．３３６ｉｎｘ＋１．９２５，Ｒ＝０．９９９：ＣＡＤ曲线方程为ｉｎｙ＝０．７６８ｉｎｘ＋２．４４９，Ｒ＝０．９９９。

２．５精密度试验２．５．１日内精密度测定：取黄芪甲苷对照品溶液连续进样５次，每次１０ｕＬ，计算保留时间和峰面积的ＲＳＤ值。

表ｉ日内精密度测定结果ＲＳＤ％（Ｒｅｔ．Ｔｉｍｅ）ＲＳＤ％（Ａｒｅａ）ＲｓＤ９６（Ｈｅｉｇｈｔ）２．６稳定性试验精密吸取黄芪甲苷对照品溶液１０ｕＬ，分别在０、２、４、６、８和ｌＯｈ进样，计算保留时间和峰面积的ＲＳＤ值。

表３稳定性测定结果２．７重复性试验取２０１０１２０５批样品，照２．２．２项下方法制各供试品溶液５份，注入液相色谱仪，ＥＬＳＤ测定进样量５ｕＬ，ＣＡＤ测定进样量１ｕＬ，计算保留时间和峰面积的ＲＳＤ值。

２．７．１ＥＬＳＤ测定结果图ｌＥＬＳＤ测定补心气口服液中黄芪甲苷图谱５份供试液黄芪甲苷保留时间的ＲＳＤ值为０．５６２％，峰面积ＲＳＤ值为０．９２４％，峰对称性平均值为０．９２。

２．７．２ＣＡＤ测定结果图２ＣＡＤ测定补心气口服液中黄芪甲苷图谱５份供试液黄芪甲苷保留时间的ＲＳＤ值为０．４４６％，峰面积ＲＳＤ值为０．９８８％，峰对称性平均值为０．９８。

２．８加样回收率试验精密量取补心气口服液９份，各ｌＯｍＬ，分别加入对照品溶液适量，照２．２．２项下方法制备供试液，测定峰面积并计算含量。

结果见表４、表５。

表４ＥＬＳＤ回收率试验测定结果——２９３——表５ＣＡＤ回收率试验测定结果编号原含量加入量测定值
回收率平均回收率ＲＳＤ（Ⅲｇ）（Ⅲｇ）（ｍｇ）（％）（％）（％）１１．２６３０．９７６２．２５８１０１．９５６２１．２６３０．９７６２．２４５１００．５８４３１．２６３０．９７６２．２３０９９．０７２４１．２６３１．２２０２．４８１９９．８６５５１．２６３１．２２０２．４５４９７．６６９９９．７７１．３６６１．２６３１．２２０２．４５８９７．９５３７１＿２６３１．４６４２．７３６１００．６３１８１．２６３１．４６４２．７２４９９．７７５９１．２６３１．４６４２．７３７１００．３９２２．９样品含量测定取３个不同批次的补心气口服液，制备供试品溶液进行测定。

表６样品含量测定结果ＥＬＳＤ测定结果（ｍｇ／ｍＬ）ＣＡＤ测定结果（ｍｇ／ｍＬ）２０１０１ｉ０１批０．１２７０．１２８２０１０１２０１批０．１３９０．１３７２０１０１２０５批０．１２９０．１３２３讨论黄芪作为中药复方中常用中药，已有很多学者对其成分进行了研究，在皂苷类成分含量测定方面尤以蒸发光检测器使用最多哺’７，引。

近年来多篇文献报道研究ＴＥＬＳＤ和ＣＡＤ在测定不同的化合物时的性能对比，ＣＡＤ无论在灵敏度、重现性和线性方面的表现均要好于ＥＬＳＤ阳１引。

且ＣＡＤ检测器操作简便，只需对雾化器温度进行设定即可；而ＥＬＳＤ要设定雾化器温度、漂移管温度和增益级别等参数，操作要繁琐很多。

补心气口服液是补益心气、理气止痛的良药，本实验研究了ＨＰＬＣ—ＣＡＤ与ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ对补心气口服液中活性成分黄芪甲苷
的测定，结果表明ＣＡＤ和ＥＬＳＤ的方法学精密度和对数线性关系均良好，基于ＣＡＤ的高灵敏度优势，ｃＡＤ的测定检出限和定量限比ＥＬＳＤ低１个数量级，而且ｃＡＤ的色谱峰对称性要好于ＥＬＳＤ。

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ｐｈｙ〔Ｊ〕．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００８，１１９３（卜２）：１５１．〔１２〕Ｊ．Ｓｈａｏｄｏｎｇ，ｗ．Ｊ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｗ．Ｅｅ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｒｕｇｓ〔Ｊ〕．ＪＰｈａｒｍ８ｉｏｍｅｄＡｎａｌ，２０１０，５１（４）：９７３．ｌｉｑｕｉｄ—ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉ—ｄｉａｂｅｔｉｃ——２９４——.。