临床标本的微生物学检验课件

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血液标本中特殊细菌的检验
• 沙门菌属
– 胆汁葡萄糖肉汤 35℃ 泥砂样沉淀
• 布鲁菌
– Castenada双相培养基 3周后无菌生长 阴性
• 厌氧菌
– 厌氧培养瓶 80ml培养基 刃天青指示剂 – 14天后无菌生长 阴性 – 有菌生长 厌氧鉴定
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脑脊液标本的检验
. 正常人的脑脊液是无菌的 . 一旦感染，病情危急
培养检查
. 及时接种 . 巧克力平板、血平板 . 35℃ 5~10%CO2 18~24小时
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脑脊液中的抗酸杆菌检查
• 离心4000r/min 30min 取沉淀涂片抗酸染 色
• 静置室温18~24小时 结网试验 抗酸染色 或金胺O染色
• 培养 罗-琴培养基或7H-10培养基
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脑脊液中的常见细菌
. 已用抗生素治疗 . 使用利尿药物 . 尿频，尿液在膀胱中停留时间短 . 细菌种类 . 平板上有三种或三种以上细菌生长，判
为标本污染，不必计数 . 变形杆菌生长不能计数，应改用CLED或
MacConkey平板
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菌落计数的方法
. 平板涂布 . 倾注培养 . 定量接种法
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尿液标本的快速细菌检验
– 霍乱弧菌、结核杆菌 – 葡萄球菌、艰难梭菌、真菌
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培养检查
. 沙门菌属和志贺菌属
– SS平板
. 无色、透明或半透明、小的或黑色菌落
– 麦康凯
. 无色、透明或半透明、小的
. 选择两个可疑菌落分别接种两支KIA、 MIU
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培养检查
. 霍乱弧菌 TCBS 、碱性平板 . 致病性大肠埃希菌 中国蓝 . 空肠弯曲菌 弯曲菌选择琼脂 . 菌群失调的检验
. 革兰阳性细菌
– 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、 B群链球 菌、肺炎链球菌、消化链球菌
– 结核分支杆菌、产单核李斯特菌 – 新型隐球菌、白色念珠菌
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脑脊液中的常见细菌
. 革兰阴性细菌
– 脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌 – 流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、
肺炎克雷白菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、 脑膜炎败血黄杆菌、类杆菌 – 钩端螺旋体
. 一旦发现有细菌生长现象
– 立即涂片观察，初步报告 – 立即接种固体平板分离(血平板、巧克力平
板)
. 连续观察七天无菌生长，盲目接种固体 平板分离(血平板、巧克力平板)证实 无菌生长后报告阴性
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血液培养瓶中细菌的生长现象
肉汤均匀混浊，发酵葡萄糖产气————— G-杆菌 微混浊有绿色变化————————— 肺炎链球菌 血球层上面出现颗粒状生长，有自下而上的溶血
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脑脊液标本的采取和运送
. 由临床医师在无菌条件下采取 . 无菌容器盛放，立即送检 . 需要保温35℃
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涂片检查
. 非常重要
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涂片检查
. 对于新型隐球菌特别是小荚膜者易与白 细胞相混淆
. 0.1%甲苯胺蓝染色
– 新型隐球菌红色圆球体，荚膜不着色， – 白细胞成深蓝色， – 红细胞不着色
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. 硝酸盐还原试验
– 阳性率约为80%，大肠埃希菌等肠杆菌科 – 假阴性20%，细菌不还原硝酸盐，如葡萄球菌、
肠球菌、不动杆菌等
. 氯化三苯四氮唑(TTC) 还原试验
– 与菌落计数符合率为93.7%
. 简易培养基
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L型细菌
. 应用高渗培养基，软琼脂，小牛血清 . 5~10%CO2， . “油煎蛋”样菌落 . 普通培养上无菌生长
• 儿童： – 清洗尿道口，留取中段尿5~10m ，l必要时膀胱穿刺
• 肾盂尿采集、膀胱穿刺
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菌落计数的意义
. 正常尿道口有细菌存在 . 尿液容易受少量细菌污染<104/ml . 尿路感染时细菌数量巨大>105/ml . 菌落计数 > 104/ml 、< 105/ml
– 建议：重复检查
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Hale Waihona Puke 影响计数的原因9血液中常见的革兰阳性细菌
• 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、 A群、 B群链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、 肠球菌、厌氧链球菌
• 产单核李斯特菌、炭疽芽胞杆菌、产气 荚膜梭菌
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血液中常见的革兰阴性细菌
• 脑膜炎奈瑟菌、卡他布拉汉菌 • 伤寒及副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、肺
炎克雷白菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、 流感嗜血杆菌、气单胞菌、去硝化产碱 杆菌、胎儿弯曲菌、沙雷菌、类杆菌、 梭杆菌、布鲁菌、鼠疫耶尔森菌
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上呼吸道标本的常见细菌
• 正常菌群
– α和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、四联 球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳杆菌
– 其他奈瑟菌、其他嗜血杆菌
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上呼吸道标本的常见细菌
• 上呼吸道常见致病菌
– 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 – 脑膜炎奈瑟菌 – 白喉棒状杆菌、结核分支杆菌 – 白色念珠菌 – 流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌 – 肺炎克雷白菌、大肠埃希菌 – 铜绿假单胞菌
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下呼吸道标本的检查
• 正常下呼吸道细菌情况 • 对下呼吸道的感染采用痰液标本进行细
菌学检查
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标本采集
. 晨痰
. 方法：
– 自然咳痰法 – 气管镜下采集 – 气管或环甲膜穿刺
. 需避免上呼吸道正常菌群的污染
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涂片检查
合格痰液标本
大量吞噬细胞 未见鳞状上皮细胞
不合格痰液标本
大量鳞状上皮细胞 未见吞噬细胞
假单胞菌、产气肠杆菌、嗜肺军团菌
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尿液标本的微生物学检验
• 正常的尿液是无菌的 • 任何怀疑尿路感染或全身感染的患者均
可进行尿液细菌培养 • 尿液是细菌的良好培养基，容易受污染
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尿液标本的采集
• 用药前采取中段尿
• 女性： – 清洗外阴部，留取中段尿5~10ml ，月经期不得采取
• 男性： – 清洗尿道口，留取中段尿5~10ml
临床标本的微生物学检验
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血液标本的细菌学检验
• 目的和意义 • 正常人的血液是无菌的 • 一旦怀疑有菌血症，均应及早进行血
液标本的细菌学检验
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血液标本的采集
• 采集时间及次数
– 发热早期或体温上升期 – 抗菌药物使用前或下次用药前 – 24h内3~4次，多部位采血
• 采血部位
– 肘静脉、股静脉、股动脉
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培养检查
. 标本前处理
– 均质化法 – 洗涤法
. 分离培养
– 血平板 – 巧克力平板 – 沙保弱琼脂
. 特殊培养
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下呼吸道标本的常见细菌
• 革兰阳性细菌
– 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 – 白喉棒状杆菌、结核分支杆菌 – 厌氧菌、放线菌、奴卡菌
• 革兰阴性细菌
– 脑膜炎奈瑟菌 – 流感嗜血杆菌、肺炎克雷白菌、大肠埃希菌、铜绿
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粪便标本的微生物学检验
• 肠道中有大量正常菌群 • 应使用选择性培养基 • 必要时(如携带者的检查)进行增菌 • 根据不同季节、人群和临床特征选择检
验方法
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标本采集
• 急性期、用药前 • 粘液、脓血便 • 直肠拭子 • 不能立即检验，需要卡-布运送培养基
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涂片检验
• 一般不作直接涂片检查
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上呼吸道标本的检查
. 上呼吸道是开放性器官 . 有许多细菌寄生
– 奈瑟菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、葡萄球 菌、流感嗜血杆菌、类白喉棒状杆菌、真菌
. 必须注意菌群与疾病的关系
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标本采集
. 鼻咽拭子 . 咽拭子
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涂片检查
. 白喉棒状杆菌
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培养检查
. 血平板、巧克力平板、 EMB . 百日咳鲍特菌：鲍金平板 . 白喉棒状杆菌：吕氏血清斜面 . 脑膜炎奈瑟菌：巧克力平板(CO2 ) . 流感嗜血杆菌：巧克力平板(CO2 )
• 采血量
=1/10血培养瓶中培养基量的
• 不可从静脉留置针中采取血液标本!!!
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血液标本的培养基
. 需氧菌
– 硫酸镁肉汤、葡萄糖酚红肉汤 – 胰化大豆胨肉汤
. 聚茴香磺酸钠SPS . 对氨基苯甲酸、青霉素酶
. 厌氧菌
– 硫乙醇酸盐培养基 – 牛心脑浸液肉汤
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血液标本的检验过程
. 35℃孵育 . 每天观察一次
———溶血性链球菌 混浊并有胶冻状凝固—————— 病原性葡萄球菌 表面有菌膜，培养液清晰—————— 枯草杆菌 表面有菌膜，膜下呈绿色混浊——— 铜绿假单胞菌
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血液标本检验结果的报告
• 阳性报告
– 培养×日有××菌生长
• 阴性报告
– 培养7日无细菌生长
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快速检验的方法
• 双相培养基法 • 溶解离心法 • 荧光指示法 • 16S rRNA鉴定法
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常见的致病菌
革兰阴性菌
– 志贺菌属、沙门菌属 – 致病性大肠埃希菌(EPEC 、EIEC 、ETEC
、 EHEC) – 霍乱弧菌、副溶血性弧菌、 – 嗜水气单胞菌 – 弯曲菌 – 小肠结肠炎耶尔森菌 – 变形杆菌属
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常见的致病菌
• 革兰阳性菌
– 金黄色葡萄球菌 – 艰难梭菌 – 白色念珠菌 – 结核分支杆菌
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尿液标本中常见的细菌
. 革兰阳性细菌
– 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、肠 球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌
. 革兰阴性细菌
– 淋病奈瑟菌 – 大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、肺
炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆 菌、沙雷菌、厌氧菌
.其 它
– 支原体、衣原体、念珠菌