枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究

食品研究与开发
F ood Research And Development
圆园20年3月
第41卷第6期
DOI ：10.12161/j.issn.1005-6521.2020.06.009
作者简介：魏芬芬（1994—），女（土家），在读硕士研究生，研究方向：功能食品的毒理学和功能性评价。

*通信作者：张波（1962—），女（汉），教授，博士，研究方向：功能食品
的毒理学和功能性评价。

枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究
魏芬芬，王文娟，张波*
（北京联合大学健康与环境学院，北京100191）
摘
要：研究枸杞多糖缓解长期过量运动小鼠体力疲劳的作用及其机制。

将60只雄性昆明小鼠随机分成5组：空白
对照组、模型组及枸杞多糖低、中、高剂量组（75、150、300mg/kg ），每组12只。

通过小鼠游泳实验建立小鼠疲劳模型，测定小鼠血清中尿素氮（blood urea nitrogen ，BUN ）、肌酐（creatinine ，CREA ）、乳酸（lactic acid ，LA ）含量以及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase ，LDH ）活性、肝糖原（hepatic glycogen ，HG ）和肌糖原（muscle glycogen ，MG ）含量，测定肝组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ，SOD ）活性和丙二醛（malondialdehyde ，MDA ）含量。

在枸杞多糖干预下，与模型组相比，各剂量组血清BUN 和CREA 浓度降低，LD 含量下降，LDH 活性升高，肝组织中MDA 浓度降低，SOD 活性升高。

结果表明枸杞多糖具有一定的缓解体力疲劳、增强小鼠运动能力的作用。

关键词：枸杞多糖；体力疲劳；血清；肝脏；糖原；氧化损伤
Study of Lycium barbarum Polysaccharide Relieving Physical Fatigue in Mice WEI Fen-fen ，WANG Wen-juan ，ZHANG Bo *
（College of Health and Environment ，Beijing Union University ，Beijing 100191，China ）
Abstract ：To investigate the relieving physical fatigue of Lycium barbarum polysaccharide （LBP ）in mice.60male mice were randomly divided into five groups ，normal control group ，model group and LBP different concentrations （75，150，300mg/kg ）groups.The fatigue model was induced by swimming experiment.The blood urea nitrogen （BUN ），creatinine （CREA ），lactic acid （LA ）and lactic dehydrogenase （LDH ）were
measured.Hepatic glycogen （HG ），muscle glycogen （MG ），superoxide dismutase （SOD ）and malondialdehyde （MDA ）were pared with the model group ，the concentrations of BUN and CREA in serum decreased in dose groups ，LD content decreased and LDH activity increased ，MDA concentration decreased and SOD activity increased in liver tissue.Lycium barbarum polysaccharide had effect on relieving physical fatigue.
Key words ：Lycium barbarum polysaccharide ；physical fatigue ；serum ；liver
引文格式：
魏芬芬，王文娟，张波.枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究[J].食品研究与开发，2020，41（6）：48-52
WEI Fenfen ，WANG Wenjuan ，ZHANG Bo.Study of Lycium barbarum Polysaccharide Relieving Physical Fatigue in Mice[J].Food Research and Development ，2020，41（6）：48-52
体力疲劳又称为躯体性疲劳，当机体在长时间从事超负荷的体力劳动时，会造成大量的代谢废物在体内的积聚，使机体的一些生理生化功能发生改变，导
致运动能力暂时性下降，从而使人产生一定的疲劳感[1-3]。

缓解体力疲劳就要采取一定的方法来缓解疲劳的产生或者加速疲劳的消失，从而使人感到轻松。

枸杞是茄科、枸杞属植物，是我国一种珍贵的药食同源植物[4-5]。

枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides ，LBP ）是从枸杞子中提取出的一种可溶性多糖，是枸杞
主要活性物质[6-7]。

近年来，大量研究表明，枸杞多糖具有抗氧化[8]、降低血糖[9-10]、调节血脂[11]、护肝[12-13]、免疫基础研究
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调节[14]等生物活性作用，现在对于LBP各种生物活性作用研究较多，但是对于缓解小鼠体力疲劳方面研究不是很多。

本次研究以枸杞多糖为原料来进行缓解小鼠体力疲劳方面的研究，以期为枸杞多糖在功能食品中的应用及产品开发提供依据。

1材料与方法
1.1材料
1.1.1主要试剂与仪器
枸杞多糖：中国科学院兰州物理化学研究所提供，提取方法是采用多次水提醇沉工艺，最后得到纯度为60%的枸杞多糖，作为本次实验的样品；尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，CREA）、血乳酸（lactic acid，LD）、乳酸脱氢酶（lactate dehydro-genase，LDH）试剂盒：中生北控股份有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肝糖原（hepaticr glycogen，HG）、肌糖原（muscle glycogen，MG）测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；无水乙醇（分析纯）：北京化工厂。

755分光光度计、迈瑞BS-420全自动生化分析仪：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；S-1000E电子天平、试管、振荡器、灌胃针、温度计、计时器、游泳箱：北京金亚亿丰塑料厂；5804R型低温高速离心机、移液枪：德国Eppendorf公司；吹风机：日本松下；加浪器：中山松宝。

1.1.2实验动物
SPF级雄性昆明种小鼠60，体重（18±2）g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0006。

饲料生产于北京科澳协力饲料有限公司[许可证号：SCXK（京）2014-0010]。

1.2方法
1.2.1小鼠疲劳模型建立
60只昆明小鼠适应性饲喂3d后，将其随机分为5个组：空白对照组、模型组、LBP低剂量组（75mg/kg）、LBP中剂量组（150mg/kg）、LBP高剂量组（300mg/kg），每组12只小鼠。

实验性小鼠在SPF屏障系统中饲养，温度控制在（20±2）℃之间，空气相对湿度50%~70%，光照周期为12h光照（8：00~20：00）/12h黑暗，自由取食和饮水，每日更换垫料。

将LBP溶于双蒸水中，各剂量组每日经口灌胃受试物（20mL/kg），空白对照组、模型组则灌胃等量蒸馏水。

每日灌胃结束下午，对模型组以及3个剂量组小鼠进行疲劳游泳实验：先进行静水适应性游泳实验共9d，第1天小鼠游泳20min，第2天至第5天小鼠游泳30min，第6天至第9天游泳1h。

然后再进行加浪游泳实验共18d：第10天至第13天d小鼠加浪游泳20min，第14天至第17天加浪游泳25min，第18天至第19天小鼠加浪游泳30min，第20天至第22天小鼠游泳40min，第23天至第28天加浪游泳45min。

其中游泳箱水深30cm，游泳箱内水的温度为（26.0±1）℃。

1.2.2血清和脏器的采集和制备
实验第28天，模型组小鼠以及3个剂量组小鼠进行最后一次加浪游泳45min后，吹干小鼠的皮毛后，马上对小鼠进行拔眼球取血，将采得的血放在4℃冰箱中静置1h后，离心，转速为3000r/min，离心15min，得血清。

小鼠经脱臼处死后，立即解剖，并取出小鼠的肝、肾、心、肺、脾等组织，立即将脏器表面的浮血用0.9%生理盐水冲洗干净，滤纸拭干并称重，然后将其冻存在-80℃冰箱中，用于后续实验。

1.2.3小鼠疲劳相关指标的测定
缓解小鼠疲劳的指标主要包括血清中的生化指标以及其他脏器组织中的相关指标。

用生化分析测血清中BUN、CRE、LD、LDH；取肝脏和肌肉组织测定HG 和MG，用0.9%生理盐水将肝脏匀浆，制成10%组织匀浆液，3000r/min离心15min后取上清分装于1.5mL 离心管用于测定MDA和SOD，在操作过程中严格按照试剂盒说明书上要求来完成。

1.3数据处理
用SPSS19.0软件进行数据处理。

多组间比较采用单因素方差分析，数据表示方法均为x±s表示，p< 0.05表示有显著性差异，p<0.01表示有极显著性差异。

2结果与分析
2.1运动训练和LBP对各组小鼠体重、每日食物和食物利用率的影响
体重变化和摄食多少是小鼠生长发育受到影响最直接的体现，也可以间接反映小鼠在饲养期间，运动训练和LBP对小鼠生长发育的影响。

LBP对各组小鼠体重、食物利用率的影响见表1。

由表1可知，与空白对照组相比，模型组小鼠体重和食物利用率均出现下降，但无显著性差异，表明运表1LBP对各组小鼠体重、食物利用率的影响
Table1Effects of LBP on weight and food utilization rate in mice 组别初始体质量/g最终体质量/g食物利用率/%空白对照组27.08±1.5444.08±2.39 3.19±0.24
模型组27.36±1.0143.16±2.06 3.13±0.30
低剂量组27.66±1.4145.72±3.64 3.27±0.14
中剂量组27.23±0.9144.90±3.11 3.18±0.23
高剂量组27.19±1.7145.54±2.09 3.14±0.21
魏芬芬，等：枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究
基础研究49
注：与空白对照组相比，**
p <0.01表示差异极显著；与模型组相比，##
p <0.01表示差异极显著。

组别LD/（mmol/L ）LDH/（U/L ）空白对照组0.358±0.131521.42±111.03模型组0.762±0.091
**
521.12±94.54低剂量组0.654±0.162519.37±64.20中剂量组0.605±0.127##613.12±74.21##高剂量组
0.619±0.163##
694.55±81.59##
动过量会对动物的身体健康产生一定影响。

与运动训练组相比，LBP 低、中、高剂量组小鼠体重和食物利用率均升高，但无显著性差异，表明在饲养期间，灌胃LBP 对过量运动的小鼠的生长及发育有一定保护作用，但显著的作用效果可能还需要更长的时间才能体现。

2.2LBP 对小鼠血清中BUN 、CRE 的影响
机体在长期大量运动过程中，由于供能关系发生
变化，血液中尿素的含量会增加[15]，而肾脏的负担也会加重，因此肌酐也可能会升高[16]。

表2为LBP 对小鼠血清中BUN 、CRE 的影响。

由表2可知，与空白对照组相比，模型组CRE 、
BUN 均显著升高（p <0.01），与模型组相比，LBP 高、中、低剂量组CRE 浓度显著降低（p <0.01），BUN 浓度降低但无显著性差异，说明LBP 对由运动引起的CRE 浓度升高具有抑制作用，也能在一定程度上减少尿素的产生。

2.3LBP 对小鼠血清中LD 、LDH 的影响
运动引起能源物质的不断消耗、
有害代谢物质的逐渐堆积是产生体力疲劳的重要原因[17]。

血清中乳酸作为肌肉活动的主要代谢产物，是评价机体疲劳的重要标志物，乳酸脱氢酶则加快乳酸的分解，缓解机体的疲劳症状[18-19]。

LBP 对小鼠血清中LD 、LDH 的影响见表3。

由表3可知，与空白对照组相比，模型组LD 浓度显著升高（p <0.01），LDH 酶活性无显著变化，与模型组相比，LBP3个剂量组LD 均降低，但未表现出显著性差异，中、高剂量组LDH 活性显著升高（p <0.01），说明LBP 可以提高LDH 的活性，也能在一定程度加快LD
的清除。

2.4LBP 对小鼠HG 、MG 的影响
当机体长时间大量运动时，HG 和MG 也会分解
参与供能，HG 、MG 的耗竭也会影响机体的运动能力，产生疲劳[20]。

LBP 对小鼠HG 、MG 的影响见表4。

由表4可知，与空白对照组相比，模型组小鼠
HG 、MG 浓度均显著降低（p <0.01）显著性差异，表明过量运动会加快肌肉和肝脏中糖原的耗竭。

与模型组相比，各剂量组HG 浓度显著增加（p <0.05或p <0.01），中、高剂量组的MG 浓度显著升高（p <0.01），表明LBP 可以增加肝脏和肌肉中糖原的储备，延缓疲劳的产生。

2.5LBP 对小鼠肝组织MDA 、SOD 的影响
有研究表明，疲劳的产生也和机体的抗氧化能力
以及脂质过氧化产物积累有关[21]。

MDA 、SOD 可以反映脂质过氧化水平和机体抗氧化能力[22]。

LBP 对小鼠MDA 、SOD 的影响见表5。

由表5可知，与空白对照组相比，模型组MDA 浓度显著增加（p <0.01），SOD 活性显著降低（p <0.01），表
表2LBP 对小鼠血清CRE 、BUN 的影响Table 2Effects of LBP on CRE and BUN in mice 组别CRE/（μmol/L ）BUN/（mmol/L ）空白对照组18.39±0.95 4.83±0.65模型组24.50±1.50** 6.86±0.56**低剂量组19.53±1.62## 6.40±0.80
中剂量组20.40±2.28## 6.16±0.41高剂量组
20.50±2.41##
6.17±0.31
注：与空白对照组相比，**
p <0.01表示差异极显著；与模型组相比，
##
p <0.01表示差异极显著。

表3LBP 对小鼠血清中LD 、LDH 的影响Table 3Effects of LBP on LD and LDH in mice 组别HG/（mg/g ）MG/（mg/g ）空白对照组19.00±2.26 2.33±0.64模型组13.92±0.98** 1.51±0.59**低剂量组15.86±1.47# 2.11±0.53
中剂量组18.07±1.46## 2.61±0.82##高剂量组
19.02±1.68##
2.77±0.52##
表4LBP 对小鼠HG 、MG 的影响Table 4Effects of LBP on HG and MG in mice 注：与空白对照组相比，**
p <0.01表示差异极显著；与模型组相比，#
p <0.05表示差异显著，##p <0.01表示差异极显著。

组别MDA/（nmol/mgprot ）
SOD/（U/mgprot ）空白对照组 1.74±0.24165.72±6.25模型组 3.14±0.61**118.72±21.01**低剂量组 2.39±0.87119.84±12.65中剂量组 2.13±0.37##131.92±11.58##高剂量组
2.12±0.38##
134.78±8.02##
表5LBP 对小鼠MDA 、SOD 的影响Table 5Effects of LBP on HG and MG in mice 注：与空白对照组相比，**p <0.01表示差异极显著；与模型组相比，
##
p <0.01表示差异极显著。

魏芬芬，等：枸杞多糖缓解小鼠体力疲劳研究
基础研究
50
明过量运动会使机体发生氧化应激导致脂质过氧化产物增加。

与运动训练组相比，高、中剂量组MDA浓度显著降低（p<0.01），高、中剂量组SOD活性显著升高（p<0.01），说明LBP能够提高机体抗氧化酶活性，减少脂质过氧化产物，从而缓解机体疲劳。

3结论
体力疲劳又称运动性疲劳，是机体在长时间或者是高强度运动后，由于运动时间过长，肌肉过度紧张，生物能源消耗过多，大量代谢产物如乳酸的堆积，使躯体产生的一种疲劳的状态[23]。

有关疲劳产生的机制有众多的学说，比较公认的有能源物质的耗竭，代谢产物的堆积，自由基氧化损伤，例子代谢紊乱等相互作用，会导致疲劳的产生[24]。

基于疲劳的产生机制及表现，可以通过反复游泳训练实验来造成小鼠疲劳的状态，进而检测一些与疲劳相关的生化指标，来评价枸杞多糖缓解体力疲劳的作用。

肌酐是评价临床上用于评价肾功能的一个重要指标，当机体长时间大量运动后，肾脏负担会加重，因此肌酐水平可能会升高[25]。

在本实验中，模型组小鼠肌酐水平显著升高，表明运动后小鼠肾脏功能受到一定损伤，导致肌酐水平升高。

与模型组相比，枸杞多糖各剂量组肌酐水平显著降低，表明枸杞多糖对肾脏功能的恢复具有很好的功效。

尿素氮是蛋白代谢的中产物，当机体运动超过30min后，蛋白质便会参与供能，其分解代谢作用也会增强，因此血清中尿素氮水平升高[26]。

在本次实验研究中，与模型组相比，枸杞多糖各剂量组血清尿素氮水平下降，但未表现出显著性差异，表明枸杞多糖对尿素氮的清除作用不是很明显，其抗疲劳作用可能与其他途径有关。

乳酸堆积被认为是疲劳产生得主要原因之一。

乳酸堆积会导致体内氢离子浓度升高，使动作电位下降，使肌酶的活性降低，从而直接抑制肌肉力量。

运动中产生的乳酸主要是通过氧化作用被清除，乳酸脱氢酶作为代谢乳酸的主要酶系，其活性大小可以直接反映乳酸的清除状况[27]。

在本实验中，枸杞多糖中剂量组和高剂量组的乳酸浓度显著降低，乳酸脱氢酶的活性显著升高，表明枸杞多糖能够增强乳酸脱氢酶的活性从而加快乳酸的清除，消除疲劳感。

在进行长时间高低强度的运动时，机体碳水化合物的消耗在疲劳的发生与发展中起着重要作用，而糖原作为血糖的储存形式，当机体血糖缺乏时可以迅速分解维持血糖稳定，因此，糖原含量可以作为评价机体疲劳的重要指标[17]。

在本实验中，枸杞多糖能够显著提高肝糖原和肌糖原的含量，延缓疲劳的发生。

自由基和脂质过氧化物的堆积也时疲劳产生的重要原因，MDA作为脂质过氧化产物，常用来评价机体氧化损伤的程度，SOD作为体内最重要的抗氧化酶之一，可以作为评价机体抗氧化能力的重要指标。

在本实验中，枸杞多糖中剂量组和高剂量组均能显著降低MDA含量，提高SOD活性，表明枸杞多糖可以增强机体抗氧化能力，减少脂质过氧化物的产生，对缓解体力疲劳具有一定的功效。

通过本次实验可知，LBP能够增加糖原的储备量、加快体内乳酸等代谢废物的清除及加快自由基的清除和防止脂质过氧化对体力疲劳具有一定的缓解作用，但其具体的作用机制需进行进一步的研究。

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收稿日期：2019-03-18
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