mrs培养基配制流程

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MRS 培养基是一种常用的选择性培养基，用于培养和分离乳酸菌。

以下是MRS 培养基的配制流程：
一、实验材料
1. 蛋白胨：提供氮源和氨基酸。

2. 牛肉膏：提供碳源、氮源和生长因子。

3. 酵母提取物：提供氮源、维生素和生长因子。

4. 葡萄糖：提供碳源。

5. 磷酸氢二钾：维持培养基的 pH 值。

6. 柠檬酸氢二铵：提供氮源和缓冲作用。

7. 乙酸钠：提供碳源和维持培养基的 pH 值。

8. 硫酸镁：提供镁离子，是许多酶的辅助因子。

9. 硫酸锰：提供锰离子，是某些酶的激活剂。

10. 吐温 80：乳化剂，有助于营养物质的分散和吸收。

11. 琼脂：凝固剂，使培养基凝固成固体状态。

12. 蒸馏水：用于溶解培养基成分。

二、实验设备
1. 电子天平：用于准确称量培养基成分。

2. pH 计：用于测量培养基的 pH 值。

3. 高压灭菌锅：用于对培养基进行灭菌处理。

4. 无菌操作台：提供无菌操作环境。

5. 移液器：用于准确移取液体培养基成分。

6. 培养皿：用于培养乳酸菌。

7. 三角瓶：用于配制和储存培养基。

三、实验步骤
1. 称量
使用电子天平准确称量下列培养基成分：
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 10.0g
酵母提取物 5.0g
葡萄糖 20.0g
磷酸氢二钾 2.0g
柠檬酸氢二铵 2.0g
乙酸钠 5.0g
硫酸镁 0.58g
硫酸锰 0.25g
吐温 80 1.0g
将称量好的培养基成分放入三角瓶中。

2. 溶解
向三角瓶中加入适量的蒸馏水，搅拌均匀，使培养基成分完全溶解。

注意蒸馏水的加入量不要超过三角瓶的刻度线。

3. 调节 pH 值
使用 pH 计测量培养基的 pH 值，并用 1mol/L 的氢氧化钠溶液或
1mol/L 的盐酸溶液调节 pH 值至 6.2-6.4。

调节 pH 值时，应逐滴加入氢氧化钠溶液或盐酸溶液，并不断搅拌，以避免 pH 值过度调节。

4. 加入琼脂
将琼脂加入到培养基中，搅拌均匀，使琼脂完全溶解。

注意琼脂的加入量不要超过培养基总体积的 2%。

5. 分装
将配制好的培养基分装到培养皿中，每个培养皿中加入约 15-20ml 的培养基。

分装时，应避免培养基沾到培养皿的边缘和盖子上。

6. 灭菌
将分装好的培养皿放入高压灭菌锅中，进行灭菌处理。

灭菌条件为：121℃，15-20min。

灭菌后，将培养皿取出，放置在无菌操作台上，待冷却至室温后使用。

7. 保存
配制好的 MRS 培养基应保存在 4℃的冰箱中，可保存 1-2 周。

在使用前，应将培养基加热至室温，并摇匀后使用。

四、注意事项
1. 培养基的配制过程应在无菌操作环境下进行，以避免杂菌污染。

2. 培养基成分的称量应准确无误，以确保培养基的质量。

3. 调节 pH 值时，应逐滴加入氢氧化钠溶液或盐酸溶液，并不断搅拌，以避免 pH 值过度调节。

4. 加入琼脂时，应搅拌均匀，使琼脂完全溶解，避免琼脂结块。

5. 灭菌后的培养基应放置在无菌操作台上，待冷却至室温后使用，以避免烫伤。

6. 保存培养基时，应注意保持培养基的干燥和无菌状态，避免培养基受到污染。