紫草素脂质体凝胶剂制备及性能研究

2.7 样品测试
取市面上的5个样品和自制的4个样品，用萃取非水滴定法、乙醇可溶物法和本实验方法进行活性物测试，每个方法测试五次，取平均值，并计算RSD。

表5 样品检验结果
从表4可见，萃取非水滴定法测定结果偏低，误差大，盐酸与月桂酰胺丙基甜菜碱结合不牢固，蒸发过程容易挥发，导致结果偏低；乙醇可溶物法虽然测试结果比较高，误差也小，但是还包含有游离月桂酸、游离胺、羟基乙酸等乙醇可溶解的物质，所以最终结果会偏高；HPLC-ELSD法经过色谱柱分离，与标准品对比，只检测月桂酰胺丙基甜菜碱，所以结果准确性更高。

3 结论
本文建立了HPLC-ELSD法分析月桂酰胺丙基甜菜碱活性物含量的方法，检测条件为：C18色谱柱， 40%乙腈水溶液作为流动相，流速为1ml/min，ELSD作为检测器，该方法简便、快速、准确、灵敏度高，可用于分析月桂酰胺丙基甜菜碱的质量控制。

参考文献：
[1]张锦阳，齐丽云，丁保妹，曹玉华，方云.HPLC-ELSD法定量分析α-癸基基甜菜碱产品组成.中国洗涤用品工业，2009，(4):68-70.
[2]王玉红，申克宇，李鹏，周君裔，阎超.高效液相色谱_蒸发光散射检测法直接检测20种未衍生基本氨基酸.色谱，2011，(9):908-911.
[3]QB/T 4082-2010，脂肪酰胺丙基二甲基甜菜碱.
[4]GB/T 13173-2008，表面活性剂洗涤剂试验方法.
[5]丹妮，谭丰萍，高山林.HPLC-ELSD分析测定贝母类药材中生物碱成分.朱药物分析杂志，2000，(2)87-90
[6]吴弢，余伯阳，程志红，徐珞珊.HPLC-ELSD法测定湖北麦冬中主要皂苷的含量.中草药，2000,31(3):175-177.
[7]王举涛，徐文方，刘金旗，马凤余，陈明.HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量.安徽医药，2006,10(1):28-29.
[8]李建，刘燕.HPLC-ELSD法分析脂肪醇聚氧乙烯醚的组分分布.广州化工，2013,41(13):145-146.
紫草素脂质体凝胶剂
制备及性能研究
苏梦园 陈娇娇* 郑文站
(天津工业大学 环境与化学工程学院， 天津 300387)
摘要：目的：研究紫草素脂质体凝胶剂的制备工艺并考察其性质。

方法：采用乙醇注入法制备紫草素脂质体，并制备了以卡波姆-940为凝胶基质的紫草素脂质体凝胶剂。

利用高效液相建立左旋紫草素含量测定方法，并考察了脂质体凝胶剂的外观性质、稳定性及体外释放研究。

结果：左旋紫草素在5～50μg/ L与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9996；紫草素脂质体凝胶剂外观均匀细腻，低温下稳定性良好，48 h内药物累积释放量为44.83%。

结论：成功制备了紫草素脂质体凝胶剂，具有较好的稳定性和一定的缓释作用。

关键词：脂质体凝胶剂；紫草；左旋紫草素；体外释放；稳定性Preparation and Properties
of Shikonin Liposomegel
SU Meng-yuan, CHEN Jiao-jiao*, ZHENG Wen-zhan (School of Environmental and Chemical Engineering，Tianjin Polytechnic University, Tianjin 300387, China) Abstract:Objective:To study the preparation and properties of Shikonin liposomegel.Methods:The Shikonin liposome was prepared by ethanol injection,and then the Shikonin liposomegel was prepared with the matrix of Carbomer-940.The content of L-Shikonin was measured by High Performance Liquid Chromatography,and the appearance,stability and release property of the liposomegel were investigated.Result:L-Shikonin was linear in the range of 5～50 mg/L with the correlation cosfficient 0.9996. Shikonin liposomegel obtained has homogeneous appearance,and present good stability at low temperature.The release rate in 48 h was up to 44.83 %.Conclusion:Shikonin liposomegel is prepared successfully with good stability and in vitro sustained release property. Keywords:liposomegel; radix lithospermi; L-Shikonin; in vitro release property; stability
紫草味苦性寒，有凉血和清热解毒等功效，在传统中医和民间常用于治疗褥疮、尿布疹、皮肤烧伤、湿疹等各种皮肤炎症，临床应用前景广阔[1,2]。

紫草中的主要活性物质左旋紫草素(L-Shikonin)，是一类脂溶性萘醌类色素，具有消炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等多种药理作用，药性温和，刺激性小而且能够促进皮肤生长和伤口愈合[3-5]。

目前常见的紫草制剂均为植物油为基质的膏剂，然而紫草素易氧化变质，且油膏剂吸收性和舒适度较差[6]。

针对这些不足，本研究研制紫草素脂质体凝胶剂，并对脂质体凝胶剂的稳定性及体外释放等性质进行了考察，为新型紫草临床制剂的开发提供参考。

1 实验仪器及材料
1.1 仪器
沃特世E-2695液相色谱仪，沃特世科技有限公司；
PHS-
3C 型pH 计，上海雷磁科学仪器股份有限公司；JY92-IIN 超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 材料
左旋紫草素对照品(110769-200506)，成都普思生物科技有限公司；紫草，购自药店；甲醇(色谱纯)，天津市富宇精细化工有限公司；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 紫草素脂质体凝胶剂的制备
紫草素脂质体制备：将10mg 左旋紫草素，卵磷脂50mg 和胆固醇10mg 加入到10mL 无水乙醇中，并将其通过注射器匀速加入到磷酸盐缓冲溶液中，保温30 min 后，将溶液置于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂。

剩余溶液50℃保温1h， 冷却后超声10 min，分别以0.45μm、0.22μm 的微孔滤膜过滤，得到紫草素脂质体，封装并于4℃保存。

脂质体凝胶剂的制备：称取1g 卡波姆-940于去离子水中，使其充分溶胀；称取对羟基苯甲酸甲酯0.1g，冰片0.1g，薄荷冰0.1g 于适量无水乙醇中溶解，并加入到已溶胀好的凝胶基质中，然后加入20g 丙三醇、0.2g 吐温-80，最后加入制备好的脂质体，搅拌均匀，用三乙醇胺调节pH 值为7.4，即得碱化紫草素脂质体凝胶剂。

2.2 左旋紫草素含量测定
色谱条件：色谱柱：Inertisl ®ODS-3柱(4.6 mm×250
mm，5μm)；流动相：甲醇-0.025mol/L 磷酸(85:15)；流速：1.0 ml/min 检测波长：516 nm ；柱温：25℃；进样量：20μL。

标准曲线绘制：精密量取浓度为100μg/mL 的储备液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL，分别于10mL 的容量瓶中用甲醇定容，配制成5 ～ 50μg/mL 的对照品溶液，高效液相色谱检测并记录峰面积A，绘制峰面积A-对照品质量浓度C 的标准曲线，得标准曲线方程：A=3429.4742C-319.3936(R=0.9996)。

结果表明紫草素在5 ～ 50μg/mL 范围内线性关系良好。

2.3 脂质体凝胶剂处方综合评价指标及其标准
本实验采用感观指标和实验指标综合评价所制备的脂质
体凝胶剂，其中感官指标主要包括外观性状、均匀性以及涂展性，实验指标主要包括变色时间、耐热稳定性以及耐寒稳定性，其评价标准具体要求和所制备的脂质体凝胶剂考察结果见表1，所制备的脂质体凝胶剂呈紫红色，质地均匀、细腻、无块状物，pH 约为6.78，接近人体皮肤表面的pH 值，常温下仍可以保持胶状，既不干涸也不液化，涂展性良好，耐寒实验稳定性，但在稳定性实验和耐热实验中颜色加深，可见其对热不稳定。

2.4 脂质体凝胶剂体外释药特性
取一定质量的脂质体凝胶剂于透析袋中，置于释放介质
中(含有0.5%吐温-80与50%无水乙醇的pH 为7.4的磷酸盐缓冲溶液)，控制温度为(37±0.5)℃，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h 和48h 取样1mL，同时补加相同温度相同体积的释放介质补充液，按照“2.2”项下色谱条件进样20μL，测定峰面积，根据标准曲线方程计算药物浓度，并按下列公式计算药物累计释放量Q ：
式中：Q 为药物累计释放量，(%)；
C n 为第n 次取样的紫草素浓度，(μg/mL)；V e 为取样体积，(mL)；
M d 为脂质体凝胶剂中包载的药物质量，(mg)。

结果如图1所示，紫草提取物脂质体凝胶剂在前12h 之内释放较快，达到39.78 %左右，之后释放减慢， 并在48h 内维持药物累积释放量为44.83%，表明该制剂有一定缓释作用。

Q (%)
time(h)
（a ）
图1 紫草素脂质体凝胶剂的药物累计释放曲线
3 结论
本研究制备了紫草素脂质体凝胶剂，并对其外观形态、pH 值、稳定性以及体外释放特性进行了考察，结果表明得到的紫草素脂质体凝胶剂质地均匀细腻，pH 约为6.78，涂展性良好，常温及低温下稳定性良好，但高温下在稳定性较差，其体外释放时间较长，累积释放度达到44.83%，具有一定缓释作用。

参考文献：
[1]艾庆波，刘玉璇，国大亮.中药紫草的研究进展[J].
齐鲁药事，2010，29(10):609-611.
[2]严松柏，谈献和，胡玉涛.紫草的研究进展[J].时珍国医国药，2003，14(2):103-105.
[3]D r a g i c e v i c N ,W i n t e r S ,K r a j i s n i k D ,e t al.Stability evaluation of temoporfin-loaded liposomalgels for topical application[J].Journal of
Liposome Research,2010,20(1):38-48.
[4]Shen CC,Shu W,Li SY,et al.Antimicrobial Activities of Naphthazarins from Arnebia euchroma[J].Journal of Natural Products，2002，65(12):1857-1862.
[5]帅冬华.紫草中化学成分及药理作用的研究进展[J].中外医疗，2009，28(22):103-104.
[6]中国药典委员会.中华人民共和国药典2015版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1587.
 作者简介：陈娇娇，博士，副教授，研究方向中药新型制剂开发。

表1 脂质体凝胶剂感观指标和实验指标综合评价
1
n e 1
=(+)/100%
n i d i Q C V C M −=×∑。