放线菌的形态观察

放线菌的形态观察
实验3 放线菌的形态观察
一、实验目的
1、掌握插片法、压印法的操作技术，学会如何观察放线菌个体的特征
2、了解放线菌的菌落特征
二、实验原理
放线菌属原核微生物，其菌落一般为圆形，大小介于细菌和霉菌之间，形状随菌种而异。

可分为两型：一型产生大量分枝的基内菌丝和气生菌丝，基内菌丝伸入培养基内，菌落紧贴培养基表面，并由于它们的菌丝体比较紧密，交织成网，因而使菌落极其坚硬，用针能将整个菌落自培养基挑起而不破裂，菌落起初是光滑或如发状缠结，当在其上产生孢子后，表面呈粉状、颗粒状或絮状，其典型的代表属是链霉菌属(Streptomyces)。

另一种类型是不产生大量菌丝的菌种，其菌落粘着力不如前一型结实，结构呈粉质，用针挑时易粉碎，典型代表为诺卡氏菌属(Nocardia)，其接种方式和菌体观察同细菌。

放线菌的菌丝和孢子会产生各种色素，所以使菌落呈各种颜色，而且平皿培养的表面和背面的颜色往往不同，色素产生和菌种的种类、培养基的成分有关。

放线菌的气生菌丝（孢子丝）及形成孢子的方式，孢子的形态及颜色是分类的重要依据之一。

链霉菌由于呈菌丝生长，而且菌丝很细，若用接种针直接挑取，易将菌丝挑断，所以，观察放线菌形态时，多用插片法和压印法。

但有时也可以采取水浸片法直接观察放线菌的个体形态。

三、实验器材
灰色链霉菌（Streptomyces griseus），天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）
高氏1号培养基、培养皿、载玻片、盖玻片、无菌滴管、显微镜、镊子、接种针、小刀
四、方法与步骤
1、插片法
(1) 倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12ml左右于灭菌培养皿中，待凝固。

(2) 插片将灭菌盖玻片以45度角度插入培养皿内的培养基中，然后用接种针将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养6~15天。

(3) 观察培养后的菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心地用镊子将盖玻片取出，擦去较差一面的菌丝体，放在载玻片上（菌丝体覆盖在载玻片上），直接置于显微镜下观察，也可在玻片间滴一滴水，制成假的水封片。

2、平板划线法
按照细菌平板划线方式将菌种划线接种于高氏1号培养基的平板上，倒置于28℃培养6~15天。

观察分离培养得到单一的放线菌落的大小、表面形状（崎岖、皱褶或平滑）、气生菌丝的形状（粉状、绒状或茸毛状等）、有无同心环、菌落的颜色等特征。

3、压印法
(1) 挑取菌落从上述划线分离的平板中，用小刀切取培养基及其上面的单个菌落一块，放于洁净的载片上。

(3) 盖片压印用镊子取一盖玻片在火焰上稍微加热，然后把玻片盖在有菌落的培养基小块上，用镊子轻轻压几下，使小块培养基上的部分菌丝体印压在盖片上。

(4) 观察将上述经压印有菌丝体的盖玻片放于洁净的载片上（盖玻片印有菌体的一面向载玻片），然后放于显微镜下用高倍镜观察。