发酵车间空气系统的灭菌（除菌）及无菌检查

发酵车间空气系统的灭菌（除菌）及无菌检查
实验一发酵车间空气系统的灭菌（除菌）及无菌检查
一、实验目的
1. 熟悉空气系统组成及设备和空气净化工艺流程。

2. 掌握空气系统的灭菌（除菌）技术。

3. 了解用于空气除菌的JLS-高效金属镍过滤器（精过滤）、JLS-YuJ（预过滤）
的构造、材质、特点及作用原理。

4. 掌握空气系统无菌检查的方法。

二、实验器材
高压灭菌锅
恒温培养箱
2.5L和500ml小口试剂瓶，移液管，培养皿。

营养琼脂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂。

三、实验步骤
1. 空气系统的灭菌：切断压缩空气，用0.15MPa～0.20MPa的饱和蒸汽对精过滤
装臵和后续空气管道灭菌，维持50min，关闭蒸汽，迅速打开空气阀门，用压缩空气吹干精过滤和后续空气管道。

2. 空气系统无菌检查：用2.5L和500ml小口试剂瓶分别盛装500ml和150ml
无菌水，在无菌室超净工作台连接好已灭菌处理的L形管（附硅胶软管）。

将精过滤装臵后面的小阀门出气口先檫酒精，再火焰灭菌3～5s，小心逐渐调节阀门旋塞，使通气量为2m3／h（500L罐），0.4m3／h(50L罐）。

迅速打开包扎软管口的牛皮纸、纱布，连接小阀门出气口，接收压缩空气，接收时间5s。

接收结束，迅速将软管脱离出气口，重新用牛皮纸、纱布包扎好。

在无菌室超净工作台，将L形管取出，试剂瓶口重新用牛皮纸、
纱布包扎好，以备后面实验。

每个小组各备已灭菌的一张Φ50mm、孔径Φ0.22μm的滤膜、3个培养皿，先将试剂瓶振摇几下，然后将吸收了无菌空气微生物的水抽滤过0.22μm的滤膜，使其中的微生物富集于滤膜上。

将滤膜无菌操作转移至无菌培养皿中,
使有菌的一面朝上，各培养皿中倾注15～20ml ，冷至40～50℃的营养琼脂培养基，左右各摇三下，待凝固，做好记号！放臵37℃培养箱，倒臵培养24小时，计细菌菌落数。

四、计算
500L 无菌空气细菌菌落数（cfu/m 3）＝323600
m t ?平板菌落数 50L 无菌空气细菌菌落数（cfu/m 3）＝
3
0.43600m t ?平板菌落数由于我们组采用的是500L 的，且菌落数为4，t 为5s ，代入公式： 500L 无菌空气细菌菌落数（cfu/m 3）＝4/（2*5/3600）
＝1440 cfu/m 3
3600 —时间，单位s ；
t —接收时间，单位s 。

五、思考题
1. 发酵工厂获得无菌空气主要采用过滤，本发酵中试车间精过滤采用的是JLS 型金属镍烧结管空气过滤器，请谈谈该过滤器的工作原理、特点及使用时应注意的问题？
答：工作原理是金属镍材料微粒粉末加压成型后，处于熔点温度下黏结固定，但只是粉末表面熔融黏结而保持粒子的空间和间隙，从而形成了微孔通道，具有微孔过滤的作用。

特点：强度较高，不需要经常更换，使用寿命长，能耐受高温反复杀菌，且受潮后影响不大，不易损坏。

应注意的问题：一般孔隙都在10—30um 之间。

定期反冲杀菌即可使用较长时间
2. 啤酒发酵要求细菌菌落数（cfu/m 3）≤300，此种情况下为什
么不会招致染菌？请谈谈原因。

答：因为在酵母培养过程中，培养基主要是以糖原为主，利用无机氮源，有机氮较少，适宜的PH 较低，在这种情况下，一般细菌较难繁殖，而酵母的繁殖速度较快，成为优势菌种，能抵抗少量的杂菌影响，所以啤酒发酵在细菌菌落数（cfu/m3）≤300的情况下不会招致染菌。