人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析

人MUC5AC启动子荧光报告基因的构建与分析
王孝芸;蓝楠;张沄;王星;李国平
【期刊名称】《海南医学》
【年(卷),期】2016(0)15
【摘要】目的：构建人MUC5AC启动子荧光报告基因并进行分析。

方法 PCR技术克隆人MUC5AC启动子[(-1300)~(+48) bp]长度片段的基因，将纯化的PCR
产物与T载体连接，然后将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，并利用酶
切和测序进行重组质粒鉴定；将该重组质粒克隆至pGL3-ehancer荧光报告基因
载体上，用脂质体转染法将荧光报告基因转染至人支气管上皮细胞(16HBE细胞)，分别用1 ng/mL的重组细胞因子IL-4和IL-13刺激细胞24 h，并设不做任何处
理的对照组；用Promega双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测相对荧光素酶活性(Rlus1/Rlus2)。

结果人MUC5AC启动子荧光报告基因构建成功，IL-4和IL-13
刺激组的相对荧光素酶活性均高于对照组[IL-4(21.6667±2.08167)，IL-
13(26.5678±1.52753)，对照组(8.33±1.52753)；F=89.815，P=0.000]。

结论MUC5AC启动子核心区域为(-1300)~(+48) bp范围，IL-4和IL-13可作用于该
区域并促进MUC5AC高表达。

%Objective To construct and analyze the luciferase reporter gene of human MUC5AC promoter. Methods Fragment of human MUC5AC promoter [(-1 300)~(+48) bp] was cloned by PCR technology. Purified prod-uct of PCR was connected with T vector. The connection product was transformed into Escherichia coli DH5αcompetent cells and identified by enzyme digestion and sequencing. The recombinant plasmid was cloned into luciferase reporter vector of pGL3-ehancer and
transfected into 16HBE cells. Then recombinant cytokines of IL-4 and IL-13 were re-spectively used to stimulate cells at concentration of 1 ng/mL for 24 hours. Meanwhile, cells without any stimulation were used as control. After 24 hours, cells were tested for relative luciferase activity (Rlus1/Rlus2) by dual luciferase reporter gene detection kit of Promega. Results Human MUC5AC promoter was constructed successfully. Relative lu-ciferase activity (Rlus1/Rlus2) of cells with stimulation of IL-4 and IL-13 was higher than that of control cells [IL-4 (21.666 7±2.081 67), IL-13 (26.567 8±1.527 53), (8.33±1.527 53);F=89.815,P=0.000]. Conclusion The core region of MUC5AC promoter is in (-1 300)~(+48) bp section. IL-4 and IL-13 have function in such region and promote expres-sion of MUC5AC.
【总页数】4页(P2409-2412)
【作者】王孝芸;蓝楠;张沄;王星;李国平
【作者单位】西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川泸州 646000;西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川泸州 646000;西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川泸州 646000;西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川泸州 646000;西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川泸州 646000
【正文语种】中文
【中图分类】R394
【相关文献】
1.人MTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建 [J], 张晓娟;孙美涛;梅雯;自加吉;杨勇琴;熊伟;
2.稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究[J], 唐颖;胡小童;朱炳林;韩宇
3.人MUC5AC基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析 [J], 李升锦;周向东
4.人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测 [J], 黄滔;曹玉祥;张志坚;周兴路;魏慧君;吴志浩
5.人MTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建 [J], 张晓娟;孙美涛;梅雯;自加吉;杨勇琴;熊伟
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。