紫外分光光度法测定苯甲酸含量
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14
实验四
紫外分光光度法测定苯甲酸含量
仪器分析实验
1
实验目的
1. 了解756CRT型紫外可见分光光度计的结构。 2. 了解紫外分光光度法定性的原理和方法。 3. 掌握利用756CRT型紫外可见分光光度计测
定苯甲酸含量的原理方和法。
2
实验原理
紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)， 主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是 研究物质电子光谱的分析方法。
中，用蒸馏水将其稀释定容，摇匀。将此溶液放 在光路上，在仪器上直接进行 样品测定，记下其 浓度值。
12
结果记录和数据处理
1、工作曲线的绘制
项目
标样编号 1
V（mL）
C(µg/mL)
吸关系数R
13
问题讨论
1、紫外可见分光光度法的定性、定量分析的依据是什么？ 2、紫外可见分光光度计的主要组成部件有哪些？ 3、设计一个采用分光光度法测定三组分含量的实验方案。
4
紫外分光光度计的使用
1．开机： 2 ．吸收池配套性检查 3．吸收曲线绘制 4．工作曲线的绘制 5．样品测定
5
实验步骤
1．开机：打开计算机，进入window 98操作系统后， 打开仪器开关，点击桌面上的“756CRT”操作软 件，“联机”后，系统直接进入初始化窗口。如 已初始化过， 系统提示“是否初始化？” 可选择 “否”， 则系统进行系统设置后进入工作窗口； 也可选择“是”，则系统进入初始化窗口，待仪 器初始化结束，进入操作主页面。然后仪器预热 20分钟后开始进行测定工作。
通过吸收曲线对求知样品进行定性分析。 根据朗伯－比耳定律：A=εbc，只要绘出标准曲
线，测出试液的吸光度，就可以得到未知样的含 量。
3
仪器与试剂
1．756CRT型紫外可见分光光度计（上海精仪公司） 2．容量瓶（25mL） 3．吸量管（5mL） 4．苯甲酸（AR）储备液：0.05000g •L-1
从0---1 存储文件：选择路径和文件名（如E:\学生实验）
8
(2) 基线校正 用蒸馏水作参比进行基线校正，点击“基线校准” 开始进行基线校准
(3)波长扫描 将盛有苯甲酸标准溶液的比色皿分别放入样品光 路，点击“开始扫描” ，得到苯甲酸溶液的吸收 曲线，找到最大吸收波长。
9
4．工作曲线的绘制
(1) 标准系列的配制 于5支25mL容量瓶中，用5mL吸量管分别加入 2.0 ；3.0；4.0；5.0；6.0mL的0.05000g L-1苯甲 酸储备液用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
项目
标样编号
1
2
3
4
5
V（mL）
10
(2) 工作曲线的绘制
进入定量分析界面，按顺序进行标样设定， 以所确定的苯甲酸最大吸收波长为测定波长，以 蒸馏水为参比，分别测定这五个标准溶液吸光度 值，绘制标准曲线，记下工作曲线方程和相关系 数。
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5．样品测定 用2mL 吸量管吸取未知液2mL于25mL容量瓶
6
2. 吸收池配套性检查 石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为 参比，调节T为100%，测定另一吸收池的透射比， 其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二 比色皿的吸光度值作为校正值。
7
3．吸收曲线绘制
(1)确定波长扫描参数： 狭缝宽度：2 nm ；扫描速度：较快；采样间隔：
1nm ；测量方式：吸光度 ；绘图方式：重叠； 重复次数：1 波长范围：200～350 nm ； 纵坐标：
实验四
紫外分光光度法测定苯甲酸含量
仪器分析实验
1
实验目的
1. 了解756CRT型紫外可见分光光度计的结构。 2. 了解紫外分光光度法定性的原理和方法。 3. 掌握利用756CRT型紫外可见分光光度计测
定苯甲酸含量的原理方和法。
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实验原理
紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)， 主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是 研究物质电子光谱的分析方法。
中，用蒸馏水将其稀释定容，摇匀。将此溶液放 在光路上，在仪器上直接进行 样品测定，记下其 浓度值。
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结果记录和数据处理
1、工作曲线的绘制
项目
标样编号 1
V（mL）
C(µg/mL)
吸关系数R
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问题讨论
1、紫外可见分光光度法的定性、定量分析的依据是什么？ 2、紫外可见分光光度计的主要组成部件有哪些？ 3、设计一个采用分光光度法测定三组分含量的实验方案。
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紫外分光光度计的使用
1．开机： 2 ．吸收池配套性检查 3．吸收曲线绘制 4．工作曲线的绘制 5．样品测定
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实验步骤
1．开机：打开计算机，进入window 98操作系统后， 打开仪器开关，点击桌面上的“756CRT”操作软 件，“联机”后，系统直接进入初始化窗口。如 已初始化过， 系统提示“是否初始化？” 可选择 “否”， 则系统进行系统设置后进入工作窗口； 也可选择“是”，则系统进入初始化窗口，待仪 器初始化结束，进入操作主页面。然后仪器预热 20分钟后开始进行测定工作。
通过吸收曲线对求知样品进行定性分析。 根据朗伯－比耳定律：A=εbc，只要绘出标准曲
线，测出试液的吸光度，就可以得到未知样的含 量。
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仪器与试剂
1．756CRT型紫外可见分光光度计（上海精仪公司） 2．容量瓶（25mL） 3．吸量管（5mL） 4．苯甲酸（AR）储备液：0.05000g •L-1
从0---1 存储文件：选择路径和文件名（如E:\学生实验）
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(2) 基线校正 用蒸馏水作参比进行基线校正，点击“基线校准” 开始进行基线校准
(3)波长扫描 将盛有苯甲酸标准溶液的比色皿分别放入样品光 路，点击“开始扫描” ，得到苯甲酸溶液的吸收 曲线，找到最大吸收波长。
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4．工作曲线的绘制
(1) 标准系列的配制 于5支25mL容量瓶中，用5mL吸量管分别加入 2.0 ；3.0；4.0；5.0；6.0mL的0.05000g L-1苯甲 酸储备液用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
项目
标样编号
1
2
3
4
5
V（mL）
10
(2) 工作曲线的绘制
进入定量分析界面，按顺序进行标样设定， 以所确定的苯甲酸最大吸收波长为测定波长，以 蒸馏水为参比，分别测定这五个标准溶液吸光度 值，绘制标准曲线，记下工作曲线方程和相关系 数。
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5．样品测定 用2mL 吸量管吸取未知液2mL于25mL容量瓶
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2. 吸收池配套性检查 石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为 参比，调节T为100%，测定另一吸收池的透射比， 其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二 比色皿的吸光度值作为校正值。
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3．吸收曲线绘制
(1)确定波长扫描参数： 狭缝宽度：2 nm ；扫描速度：较快；采样间隔：
1nm ；测量方式：吸光度 ；绘图方式：重叠； 重复次数：1 波长范围：200～350 nm ； 纵坐标：