尿路恶性肿瘤尿液中的标记物专家讲座

尿路恶性肿瘤尿液中的标记物
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• 检测: 试剂盒（标准品、参考品、检验样 品）------与NMP22结合-----洗涤后与标 有地高辛单抗反应------与抗地高辛酶联 抗体反应------邻苯二胺显色-----与标准品
吸收光度曲线比较。（抗原在尿液中浓 度直接反应于呈色强度）
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• NMP22 100%
85%
• （临界值10u/ml) <0.001
• 尿脱落细胞 33%
100%
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• Albert 按分期分级进行了比较:
•
敏感性（%)
•
NMP22测定 尿脱落细胞检验
• Ta
83.3
20.0
• T1
97.7
64.4
• G1
86.2
37.9
• G2
NMPs生物学特征
• 1974年Berezney和Caffy首次提出NMPs概 念。研究证实: NMPs主要由核纤层蛋白、 核孔复合体、核糖蛋白网架结构组成， 是细胞核内部框架结构关键部分。决定 胞核形态，调控有丝分裂过程。在DNA 复制，RNA合成，激素连接，基因表示 调控中起主要作用。
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• 血清NMP22与尿NMP22关系:
Miyanaga, Akaza等对血清,尿NMP22分别测 定,结果二者之间无显著差异.
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尿NMP22检测优点
1. 敏感性强:比脱细胞检验更敏感,尤其在 Ta期和高分化肿瘤时,准确性强.
2. 不受血尿影响:BTA等方法因含有血样 造成检验结果有误.
3. 无痛苦，无创伤检测. 4. 方法简单，快速，费用相对低，结果受
主观影响小.
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尿NMP22检验适应范围
1. 临床血尿病人早期筛查 2. 膀胱癌病人临床诊疗 3. 膀胱癌病人术后定时复查 4. 膀胱癌术后转移, 复发判断 5. 高危人群中膀胱癌普查
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• Miyanaga 等对面280位住院和门诊病人、 20位健康者进行比较:
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NMP22 u/ml 阳性比 阳性率 中位数 范围
TCC
38/47 80.9%
有TCC史 11/32 34.4%
其它尿路癌 11/26 42.3%
尿结石 13/26 50.0%
尿路感染 19/19 100%
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• 透明质酸和透明质酸酶: 二者适用敏感性、 特异性达92%、85%。
• FCM: 敏感性、特异性分别为58%、 83%（非整倍体细胞）。
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• BLCA-4：为核基蛋白一个，对膀胱癌诊 疗敏感性、特异性达96%、100%。
• 其它标识物：细胞角蛋白、Lewis X抗原、 微卫星及表面分子，如M344抗原、 19A211、DD23.CD44等。
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NMP22与膀胱癌分级关系
• David 等对分级不一样病人尿NMP22进行比较:
例数 平均值u/ml 中位数u/ml P值
G1 13
12.4
3.02
<0.001
(G1 vs G2)
G2 27
24.2
9.14 无显著差异
G3 26
34.5
39.5
<0.001
(G1 vs G3)
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影响NMP22原因
• 年纪、性别、种族、吸烟等 • Gennaro 等报道: 健康组样本中〈50岁
比〉50岁值要低，女性高于男性。与种 族、吸烟无显著相关性。 • 不受非泌尿系良性疾病影响: 如糖尿病、 心脏病、本身免疫病等。
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• 泌尿系疾病对NMP22影响:
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膀胱癌新肿瘤标识物---NMP22
膀胱镜检+组织活检: 膀胱癌诊疗金标准
缺点: 侵入性，不适合大量 人口普查，主观影响原因大。
尿细胞学检验: 诊疗膀胱癌及术后监测复发 惯用非侵入性检验。缺点: 假阴性高、敏 感性差。
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当前, 迫切需要侵入性小, 更敏感、更客观 诊疗技术。
•
例数 平均值u/ml 中位数u/ml P
值
• Ta
44
31.1
8.42
• T1
61
<0.02
69.3
59.3
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• Miyanga 等将病人分为表浅组（Tis,Ta,T1), 浸润组（T2、T3.T4）进行比较，阳性率前 者为70%，后者为100%，两组差异有统计 学意义（P〈0.05)。
分级
Ta T1或更高 Cis G1 G2 G3
NMP22 81 82
67 69 86 93
端粒酶 80 91
100 65 72 93
BTA 40
64
33 13 36 79
尿细胞学 40 26
67 6 63 79
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NMP22与膀胱癌分期分级关系
• David 等对临床分期不一样病人尿NMP22 值比较:
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临界值确实定
• David等用尿NMP22值诊疗膀胱癌研 究中用6.4u/ml和10.0u/ml作临界值，结果 与膀胱镜检和活检对比:
•
敏感性
特异性
• 6.4u/ml
68.2%
79.8%
• 10.0u/ml
48.5%
91.8%
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• Sinan等报道: • • 6.4u/ml • 10.0u/ml
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NMPs与肿瘤关系
• NMPs在许多主要生理活动中起关键 作用，许多细胞癌变都伴伴随NMP改变。
• 许多肿瘤特异性NMPs被发觉: Robert(1996)对癌变和正常膀胱组织进行 比较后发觉了6种存在于癌变组织中蛋白， 而正常组织中无表示，它们是NMPs, BLCA-1~ BLCA6。
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• FDP: 膀胱癌细胞产生血管内皮生长因子， 增加外周血管通透性，外渗纤维蛋白原 转变为纤维蛋白，在纤维蛋白酶作用下 分解为FDP（纤维蛋白降解产物）。敏 感性和特异性分别为68%、78%。
• 端粒酶: 在生殖细胞和肿瘤细胞中出现， 体细胞中不表示，敏感性和特异性分别 为74%、79%。
97.2
44.4
• G3
90.0
80.0
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• Landman 等对47例证实为膀胱癌病人， 分别用NMP22、端粒酶、BTA.尿细胞学 检验进行比较（敏感性%）。
• NMP22和端粒酶比BTA.尿细胞学检验含 有更高灵敏度。
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•
分期
40.1 0.0-6731.3 6.1 0.5-555.7 6.0 0.0-544.9 11.1 1.4-3207.7 150.6 27.2-58228.4
BPH
5/32 15.6% 4.2 0.0-258.9
其它疾病 15/43 34.9% 5.0 0.0-206.6
肾脏疾病 11/43 25.6%
敏感性 88% 73%
特异性 69% 81%
• 美国FDA进行大量数据统计后，在兼
顾敏感性和特异性基础上确定临界值为 10.0u/ml。
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NMP22与其它方法比较
• Craig 对330名可疑病人进行尿NMP22测 定、尿脱落细胞检验与组织活检对比:
•
敏感性 特异性 P值
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• Mark(1996）对膀胱癌病人尿液进行检测 后发觉一个核基质蛋白NMP22含量尤其 高, 用NMP22值预测膀胱癌病人术后复发 危险性, 有较高敏感性和特异性。
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NMP22检测
单抗制备: 膀胱癌细胞核------提纯 NMP22-----免疫小鼠-----获取单抗 （mAB302-22, Mab302-18)----制备 酶联免疫反应试剂盒（ELLIS）。
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NMPs(nuclear matrix protein, 核基蛋白）是 细胞核动态骨架, 决定细胞核形态, 维持DNA三 维结构, 是细胞核结构单位。
NMP22（NMPs一个）是尿路上皮特异性 肿瘤相关标识物。在BTCC中NMP22因肿瘤细 胞凋亡由细胞核释放进入尿中。
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5.9 0.3-197.1 第23页
• 不一样时段尿液影响:
Miyanaga 等分别取6,12,18时,三个不一样 时段尿液标本检测, 结果显示不一样时段 尿液标本值,无统计学差异.
• 血尿影响:
Schacfer研究报道,尿标本中含有3.0X106 /ml 红细胞时,相当于10个/HP, NMP22值 极少超出10u/ml.
尿路恶性肿瘤尿液中标识物
• BTA：肿瘤细胞分泌蛋白酶分解基底膜而释放 到尿液中。分为BTAstat(定性);BTAtrak(定量)。 敏感性和特异性可达65-71%和65%。
• NMP22：细胞核成份之一，参加姊妹染色体正 确分离，肿瘤细胞在凋亡中释放出来。膀胱癌 患者尿中NMP22水平是正常人25倍。敏感性和 特异性分别为70%、75%。