牛血清蛋白的提取与鉴定

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透析
用两支毛细管分别将标准液及测定液点在同一张醋酸纤维素 薄膜的无光泽面上(划好点样线并作好标记),标准液点一 次,测定液点三次。
点样
将点样后的膜条置于电泳槽架上,放置时无光泽面向下,点 样端置于阴极,平衡5分钟,开电源160伏60分钟,关闭电源 后用镊子将膜条取出。
电泳
将膜条直接浸于盛有氨基黑10B(萘酚蓝黑)的染料中,染2 分钟取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中 各漂洗5分钟,直至背景漂洗干净为止。
染色
附: PBS(磷酸盐缓冲液):是磷酸二氢钠和磷酸 氢二钠组成,其中磷酸二氢钠酸性较强。 如果血液中的ph值过高的话,多余的碱就 会与酸磷酸二氢钠结合生成磷酸氢二钠, 反之,过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生 磷酸二氢钠,这样ph值就会稳定在一定的 范围内。
实验试剂与器材: 牛血清、PBS缓冲液、饱和硫酸铵、离心机、 试管、小烧杯、离心管、天平、电泳所需 的物件等Fra bibliotek操作流程:
取小 牛血清0.5毫升、PBS液0.5毫升、饱和硫酸铵2.3毫升 充分混匀,静止20分钟,2500转/分离心10分钟。
盐析
取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用 线扎紧上口(注意要留有空隙),放入装有自来水的小烧杯 中透析,要不断振动,每隔2分钟换一次水,共换水15次。
3、透析:穿过膜的选择性扩散过程。可用于 分离分子量大小不同的溶质,低于膜所截留 阈值分子量的物质可扩散穿过膜,高于膜截 留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另 一侧。 4、电泳:带电物质或细胞在电场中的泳动。 根据大分子或颗粒的电荷、大小和形状不同, 使其在通过电场中的凝胶或介质时发生分离 的方法。
设计性试验
牛血清蛋白的提取与鉴定
实验目的: 1、掌握血清蛋白的提取与鉴定方法。 2、掌握电泳法,盐析法、透析法以及正确的 点样方法。 3、了解设计性试验的基本构架,方便今后创 新性实验的进行
实验原理 : (会用到的几种试验方法) 1、利用蛋白质的显色反应,对牛血清蛋白进 行定性染色,从而对分离的物质进行鉴定。 2、盐析:盐析一般是指溶液中加入无机盐类 (本次试验就采用“饱和的硫酸铵”)而 使溶解的物质(本次试验提取的是“牛血 清蛋白”)析出的过程 。
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