考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究_王孝平
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第 23 卷第 3 期 2009 年 5 月
天津化工 Tianjin Chemical Industry
Vol．23 No．3 May.2009
考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究
王孝平，邢树礼 （青岛科技大学药学系，山东 青岛 266042）
摘要：采用考马斯亮蓝 G-250 染色法对蛋白质含量进行了测定，建立了快速、灵敏的检测蛋白质的方法。 结果表明，考马斯亮蓝 G-250 染色法简单、迅速，且相对较为准确，是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。 关键词：蛋白质；考马斯亮蓝；含量测定 中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1008－1267（2009）03-0040-03
tile assay for protein using Coomassie Brilliant Blue G250 [J].Analyt.Biochem.2005,79:544-552. ［3］ Chial,H.J.,Thompson,H.B.,and Splittgerber,A.G.A spectral study of the charge forms of Coomassie Blue G250 [J]. Analyt.Biochem.2003,209:258-266. ［4］ Kirazov,L.P.,Venkov,L.G.and Kirazov,parison of the Lowry and the Bradford protein assays as applied for protein estimation of membrane -containing fractions [J]. Analyt.Biochem.2005,208:44-48. ［5］ Friendenauer,S.and Berlet, H. H.Sensitivity and variability of the Bradford pro-tein assay in the presence of detergent [J].s.Analyt.Biochem.2006,178:263-268.
这种形式的检测针对较为灵敏的蛋白质。 因
收 稿 日 期 ：2008－12－08 作 者 简 介 ：王 孝 平 （1982-），男 ，青 岛 科 技 大 学 硕 士 研 究 生 。 邢 树 礼 （1983-），男 ，青 岛 科 技 大 学 药 剂 学 硕 士 研 究 生 。
第 23 卷第 3 期
王孝平等：考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究
0.1M 柠檬酸盐，pH5.0
0.015
10mM EDTA
0.007
1M（NH4）2SO4
0.002
吸收波长为 600 nm、 5 mg 免疫球蛋白 0.250 0.059 0.273 0.261 0.261 0.207 0.238 0.268 0.261 0.249 0.235 0.269
3.2 蛋 白 质 与 考 马 斯 亮 蓝 G250 的 特 异 性 结 合 可 能会使这些蓝色染料的离子形式的最大吸收波长 从 590 nm 向 620 nm 转 移[4]，因 此 在 测 量 前 我 们 应 该 先 确 定 在 590 nm 至 620 nm 之 间 有 没 有 更 大 的
氯度滴定管；15 mL 移液管；150 mL 烧杯；50 mL 容量瓶；200 mL 海水样品瓶；500 mL 棕色试剂瓶；玻 璃棒。 1.1.3 试剂
试剂中除可溶性淀粉为化学纯外，其它均为分
析纯。 1.1.3.1 硝酸银标准溶液
硝酸银标准溶液的配制：称取 16 g AgNO3 置于 500 mL 的烧杯中并用 400 mL 蒸馏水溶解， 溶解后 转移于棕色试剂瓶中备用。 1.1.3.2 荧光黄钠盐指示剂
参考文献： ［1］ Zuo,S.-S.and Lundahl,P.A micro-Bradford membrane pro-
tein assay[J].Analyt.Biochem,2005,284:162-164. ［2］ Sedmak,J.J.and Grossberg,S.E.A rapid,sensitive and versa-
41
此， 当未知蛋白含量很少的时候是非常适用的。 2.2.1 在总量为 100 μL 到 1.5 mL 聚乙烯微管中重 复含有 1 到 10 μg 的样本。 如果近似样本浓度是未 知 ， 可 以 测 定 一 系 列 稀 释 品 （如 1，1∶10，1∶100，1∶ 1000 等）。 2.2.2 为校正曲线， 取体积为 10，20，40，60，80 和 100 μL 的 100 μg/mL 的 标 准 牛 γ- 球 蛋 白 到 微 管 中，并补蒸馏水至 100 μL。 取 100 μL 的蒸馏水作为 空白。 2.2.3 每管添加 1 mL 蛋白质试剂，轻轻混合均匀。
吸收波长。 不过，在通常的 pH 值下，为了简单起见， 作 为 染 料-蛋 白 复 合 物 的 折 中 我 们 经 常 以 595 nm 作为测量波长。 3.3 该染料不与单体精氨酸、赖氨酸以及相对分子 质量小于 3000 的多肽结合。 许多肽类激素和其他 一些重要的活性肽也在这一范围内，所以该考马斯 亮蓝法不适用于对这些化合物的定量测定[5]。 3.4 这里 描 述 的 这 种 方 法 在 检 测 不 同 种 类 的 个 别蛋白质时在灵敏度上会有差异。 通常我们可以 通 过 增 加 染 料 的 浓 度 或 增 加 溶 液 的 pH 值 的 方 法 来 减 小 这 一 差 异 。 例 如 ，向 反 应 物 中 加 入 NaOH 以 调 整 pH 值 来 提 高 该 方 法 的 敏 感 度 ， 结 果 大 大 降 低了测量不同的蛋白质之间的差异。 此外， 这些 改良后的方法对消除样品中去污剂的影响也是十 分有效的。 3.5 不同来源或不同供应商提供的染料的纯度不 同， 所以它们在考马斯亮蓝 G250 中的溶解度可能 会有差异，但对于用该方法对常规蛋白质进行检测 来说染料的质量不是特别的重要，因此对于染料质 量所引起的差异这里不做讨论。 3.6 用来待测定的蛋白质和用来建构校准曲线的 蛋白质应该用同一种。 通常牛血清白蛋白（BSA）是 常用的蛋白质标准品，因为它价格便宜而且质量也 比较纯净，更重要的是可以将带测样品的测量结构 直接与它的标准曲线进行比较。
第 23 卷第 3 期 2009 年 5 月
天津化工 Tianjin Chemical Industry
Vol．23 No．3 May.2009
荧光黄法海水氯度测定的研究
高红 1，齐景霞 1，李建云 2 （1 天津渤海职业技术学院，天津 300402；2 石药集团恩必普药业有限公司，河北 石家庄 050000）
这种染料最容易与蛋白质中的精氨酰和赖氨 酰 键 结 合[2]，这 种 特 异 性 可 导 致 对 不 同 的 蛋 白 质 检 测时结果差异较大，这是此方法的主要缺陷。 原考 马斯亮蓝检测表明反应之间的不同的蛋白质会有 较大变化。 为了克服这个问题，发展并建立了几种 改进的方法。
1 材料
1.1 试剂 检测试剂是：100 mg考马斯亮蓝G250 溶于 50 mL
表 1 一般反应物在考马斯亮蓝法中的影响
化合物
空白
0.02%SDS
0.003
0.1%SDS
0.042
1M 2-巯基乙醇
0.006
1M 蔗糖
0.008
Байду номын сангаас4M 尿素
0.008
4M NaCl
-0.015
甘油
0.014
0.1M HEPES，pH7.0
0.003
0.1M 三羟甲基氨基甲烷，pH7.5 -0.008
（3）荧光黄钠盐指示剂：取0.1% 荧 光 黄 钠 盐 溶 液 12.5 mL 与 1%淀 粉 溶 液 250 mL 混 合 ； 并 加 入 0.25 g 苯 甲 酸 钠 ，防 止 受 霉 菌 的 作 用 而 腐 败 。
但是有少数的化学药品尤其是一些去污剂和两性电解质其空白试剂或与蛋白染料反应后它们的吸光度可能会有显著改变见表1这些物质可以用凝胶过滤透析或磷酸钙沉淀蛋白质的方法从样品溶液中除去这也是目前测量蛋白质含量时集中存在的一个问题蛋白质与考马斯亮蓝g250的特异性结合可能会使这些蓝色染料的离子形式的最大吸收波长590nm620nm转移因此在测量前我们应该先确定在590nm620nm之间有没有更大的吸收波长不过在通常的ph值下为了简单起见作为染料蛋白复合物的折中我们经常以595nm作为测量波长该染料不与单体精氨酸赖氨酸以及相对分子质量小于3000的多肽结合
本文根据海水常量成份的恒定性和氯度易于 准 确 测 定 的 特 点 ， 采 用 荧 光 黄 法 测 定 海 水 氯 度 [1]， 再 由氯度与盐度的经验关系式来计算盐度。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂 1.1.1 水样的采集与贮存
海水是一个复杂的多组分的多相体系，水样的 采取和贮存是极其关键的一步，本实验水样采自景 唐港不同深度的海水，贮存容器选用密封良好的渗 透性低的高密度聚乙烯容器，并把不同深度水样贴 上标签以视区别。 实验中的标准海水氯度值为 17‰ ～19‰ 1.1.2 仪器
摘要：实验采用荧光黄法测定海水中的氯度。 实验中选用不同季节、不同深度的海水进行分析，得到景唐 港海域盐度的分布及变化因素。 其盐度变化总趋势为表层低，下层高。 冬季表层盐度比其它季节高。 关键词：荧光黄法；海水盐度；海水氯度 中图分类号：TQ124.4+1 文献标志码：A 文章编号：1008-1267（2009）03-0042-02
在利用分光光度计测量吸光度时， 所用的比色 皿应该是塑料的或玻璃的，并且用之前应绝对保证清 洗干洁，禁止使用石英（成分为二氧化硅）比色皿，因 为染料会跟二氧化硅发生共价结合[3]，而染料粘到玻 璃或塑料比色皿上时，可以用甲醇或洗涤剂清洗掉。
2 方法
2.1 标准测定方法 2.1.1 在小试管中依次按梯度加入 100 μL 中含 10 到 100 μg 蛋白质。 如果近似样本浓度是未知，可以 测定一系列稀释品（如 1，1:10，1:100，1:1000）。 准备 重复每个样品。 2.1.2 为校正曲线， 取体积为 10，20，40，60，80 和 100 μL 的 1 mg/mL 标准牛 γ-球蛋白到小管中，蒸馏 水补至 100 μL。 取 100 μL 的蒸馏水作为空白试剂。 2.1.3 每管添加 5 mL 蛋白质的试剂， 倒转或者摇 动使其混合均匀，动作要轻以免产生泡沫，否则重 现性会降低。 2.1.4 混 合 后 2 min 到 1 h 内 以 标 准 液 为 空 白 在 595 nm 下测定样本的 A 值 （见注意事项 3.2）。 100 μg 标准在 595 nm 下的 A 值应在 0.4 左右。 标准曲 线不是直线，和精确的吸收不同，要看检测试剂的 放置时间。 因此，每套检测都要新建一个标准曲线。 2.2 微量测定方法
3 注意事项
3.1 该考马斯亮蓝法是最常用的生化试剂测蛋白 含量的方法里比较不受干扰的一种。 但是，有少数 的化学药品（尤其是一些去污剂和两性电解质），其 空白试剂或与蛋白染料反应后它们的吸光度可能 会有显著改变（见表 1），这些物质可以用凝胶过滤， 透析，或磷酸钙沉淀蛋白质的方法从样品溶液中除 去，这也是目前测量蛋白质含量时集中存在的一个 问题。
95% 乙 醇 中 ， 然 后 与 100 mL 85%磷酸混合，用蒸馏 水稀释定容至 1L。 1.2 标准蛋白质液
以浓度为 1 mg/mL 的牛 γ-血清球蛋白（在微量 测定时浓度用 100 μg/mL）液作标准。 为保证固体蛋 白中的水分含量在贮藏过程中不会发生大的变化，
平时应将该标准液放在-20℃的环境中储存。 1.3 塑胶制品及玻璃制品
在许多蛋白质研究的领域中，用一种快速准确 的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。 一种新建立 的考马斯亮蓝法在许多实验中已成为首选方法用 来定量的检测蛋白浓度。与传统的 Lowry 法相比，该 法更易操作，更快，更灵敏，此外，它受其他一些试 剂和非蛋白成分干扰也较小。
该考马斯亮蓝法其检测原理是基于染料考马 斯蓝 G250 和蛋白质之间形成的特异性结合。 详细 的 研 究 表 明[1]，该 染 料 可 以 自 由 存 在 于 四 种 不 同 的 离子形式中。 相比之下，染料更多的阴离子形式与 蛋白质结合且结合后显蓝色， 在 590 nm 左右具有 最大吸收。 因此通过定量测定染料的蓝色离子的量 就可以算出蛋白质的量， 这通常可以在 595 nm 处 测定吸光度获得。
（1）0.1%荧光黄钠盐溶液：配制 0.1 mol/LNaOH 溶液 150 mL，量取 10 mL 将 0.1 g 荧光黄溶于其中， 并加 0.1 mol/L 稀硝酸溶液中和到中性，然后用蒸馏 水稀释到 100 mL，贮于棕色试剂瓶中。
（2）1%淀粉溶液：称取可溶性 淀 粉 （A.R）2.5 g， 先用少量蒸馏水调成糊状， 倒入 250 mL 煮沸的蒸 馏水中，冷却至室温。
天津化工 Tianjin Chemical Industry
Vol．23 No．3 May.2009
考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究
王孝平，邢树礼 （青岛科技大学药学系，山东 青岛 266042）
摘要：采用考马斯亮蓝 G-250 染色法对蛋白质含量进行了测定，建立了快速、灵敏的检测蛋白质的方法。 结果表明，考马斯亮蓝 G-250 染色法简单、迅速，且相对较为准确，是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。 关键词：蛋白质；考马斯亮蓝；含量测定 中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1008－1267（2009）03-0040-03
tile assay for protein using Coomassie Brilliant Blue G250 [J].Analyt.Biochem.2005,79:544-552. ［3］ Chial,H.J.,Thompson,H.B.,and Splittgerber,A.G.A spectral study of the charge forms of Coomassie Blue G250 [J]. Analyt.Biochem.2003,209:258-266. ［4］ Kirazov,L.P.,Venkov,L.G.and Kirazov,parison of the Lowry and the Bradford protein assays as applied for protein estimation of membrane -containing fractions [J]. Analyt.Biochem.2005,208:44-48. ［5］ Friendenauer,S.and Berlet, H. H.Sensitivity and variability of the Bradford pro-tein assay in the presence of detergent [J].s.Analyt.Biochem.2006,178:263-268.
这种形式的检测针对较为灵敏的蛋白质。 因
收 稿 日 期 ：2008－12－08 作 者 简 介 ：王 孝 平 （1982-），男 ，青 岛 科 技 大 学 硕 士 研 究 生 。 邢 树 礼 （1983-），男 ，青 岛 科 技 大 学 药 剂 学 硕 士 研 究 生 。
第 23 卷第 3 期
王孝平等：考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究
0.1M 柠檬酸盐，pH5.0
0.015
10mM EDTA
0.007
1M（NH4）2SO4
0.002
吸收波长为 600 nm、 5 mg 免疫球蛋白 0.250 0.059 0.273 0.261 0.261 0.207 0.238 0.268 0.261 0.249 0.235 0.269
3.2 蛋 白 质 与 考 马 斯 亮 蓝 G250 的 特 异 性 结 合 可 能会使这些蓝色染料的离子形式的最大吸收波长 从 590 nm 向 620 nm 转 移[4]，因 此 在 测 量 前 我 们 应 该 先 确 定 在 590 nm 至 620 nm 之 间 有 没 有 更 大 的
氯度滴定管；15 mL 移液管；150 mL 烧杯；50 mL 容量瓶；200 mL 海水样品瓶；500 mL 棕色试剂瓶；玻 璃棒。 1.1.3 试剂
试剂中除可溶性淀粉为化学纯外，其它均为分
析纯。 1.1.3.1 硝酸银标准溶液
硝酸银标准溶液的配制：称取 16 g AgNO3 置于 500 mL 的烧杯中并用 400 mL 蒸馏水溶解， 溶解后 转移于棕色试剂瓶中备用。 1.1.3.2 荧光黄钠盐指示剂
参考文献： ［1］ Zuo,S.-S.and Lundahl,P.A micro-Bradford membrane pro-
tein assay[J].Analyt.Biochem,2005,284:162-164. ［2］ Sedmak,J.J.and Grossberg,S.E.A rapid,sensitive and versa-
41
此， 当未知蛋白含量很少的时候是非常适用的。 2.2.1 在总量为 100 μL 到 1.5 mL 聚乙烯微管中重 复含有 1 到 10 μg 的样本。 如果近似样本浓度是未 知 ， 可 以 测 定 一 系 列 稀 释 品 （如 1，1∶10，1∶100，1∶ 1000 等）。 2.2.2 为校正曲线， 取体积为 10，20，40，60，80 和 100 μL 的 100 μg/mL 的 标 准 牛 γ- 球 蛋 白 到 微 管 中，并补蒸馏水至 100 μL。 取 100 μL 的蒸馏水作为 空白。 2.2.3 每管添加 1 mL 蛋白质试剂，轻轻混合均匀。
吸收波长。 不过，在通常的 pH 值下，为了简单起见， 作 为 染 料-蛋 白 复 合 物 的 折 中 我 们 经 常 以 595 nm 作为测量波长。 3.3 该染料不与单体精氨酸、赖氨酸以及相对分子 质量小于 3000 的多肽结合。 许多肽类激素和其他 一些重要的活性肽也在这一范围内，所以该考马斯 亮蓝法不适用于对这些化合物的定量测定[5]。 3.4 这里 描 述 的 这 种 方 法 在 检 测 不 同 种 类 的 个 别蛋白质时在灵敏度上会有差异。 通常我们可以 通 过 增 加 染 料 的 浓 度 或 增 加 溶 液 的 pH 值 的 方 法 来 减 小 这 一 差 异 。 例 如 ，向 反 应 物 中 加 入 NaOH 以 调 整 pH 值 来 提 高 该 方 法 的 敏 感 度 ， 结 果 大 大 降 低了测量不同的蛋白质之间的差异。 此外， 这些 改良后的方法对消除样品中去污剂的影响也是十 分有效的。 3.5 不同来源或不同供应商提供的染料的纯度不 同， 所以它们在考马斯亮蓝 G250 中的溶解度可能 会有差异，但对于用该方法对常规蛋白质进行检测 来说染料的质量不是特别的重要，因此对于染料质 量所引起的差异这里不做讨论。 3.6 用来待测定的蛋白质和用来建构校准曲线的 蛋白质应该用同一种。 通常牛血清白蛋白（BSA）是 常用的蛋白质标准品，因为它价格便宜而且质量也 比较纯净，更重要的是可以将带测样品的测量结构 直接与它的标准曲线进行比较。
第 23 卷第 3 期 2009 年 5 月
天津化工 Tianjin Chemical Industry
Vol．23 No．3 May.2009
荧光黄法海水氯度测定的研究
高红 1，齐景霞 1，李建云 2 （1 天津渤海职业技术学院，天津 300402；2 石药集团恩必普药业有限公司，河北 石家庄 050000）
这种染料最容易与蛋白质中的精氨酰和赖氨 酰 键 结 合[2]，这 种 特 异 性 可 导 致 对 不 同 的 蛋 白 质 检 测时结果差异较大，这是此方法的主要缺陷。 原考 马斯亮蓝检测表明反应之间的不同的蛋白质会有 较大变化。 为了克服这个问题，发展并建立了几种 改进的方法。
1 材料
1.1 试剂 检测试剂是：100 mg考马斯亮蓝G250 溶于 50 mL
表 1 一般反应物在考马斯亮蓝法中的影响
化合物
空白
0.02%SDS
0.003
0.1%SDS
0.042
1M 2-巯基乙醇
0.006
1M 蔗糖
0.008
Байду номын сангаас4M 尿素
0.008
4M NaCl
-0.015
甘油
0.014
0.1M HEPES，pH7.0
0.003
0.1M 三羟甲基氨基甲烷，pH7.5 -0.008
（3）荧光黄钠盐指示剂：取0.1% 荧 光 黄 钠 盐 溶 液 12.5 mL 与 1%淀 粉 溶 液 250 mL 混 合 ； 并 加 入 0.25 g 苯 甲 酸 钠 ，防 止 受 霉 菌 的 作 用 而 腐 败 。
但是有少数的化学药品尤其是一些去污剂和两性电解质其空白试剂或与蛋白染料反应后它们的吸光度可能会有显著改变见表1这些物质可以用凝胶过滤透析或磷酸钙沉淀蛋白质的方法从样品溶液中除去这也是目前测量蛋白质含量时集中存在的一个问题蛋白质与考马斯亮蓝g250的特异性结合可能会使这些蓝色染料的离子形式的最大吸收波长590nm620nm转移因此在测量前我们应该先确定在590nm620nm之间有没有更大的吸收波长不过在通常的ph值下为了简单起见作为染料蛋白复合物的折中我们经常以595nm作为测量波长该染料不与单体精氨酸赖氨酸以及相对分子质量小于3000的多肽结合
本文根据海水常量成份的恒定性和氯度易于 准 确 测 定 的 特 点 ， 采 用 荧 光 黄 法 测 定 海 水 氯 度 [1]， 再 由氯度与盐度的经验关系式来计算盐度。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂 1.1.1 水样的采集与贮存
海水是一个复杂的多组分的多相体系，水样的 采取和贮存是极其关键的一步，本实验水样采自景 唐港不同深度的海水，贮存容器选用密封良好的渗 透性低的高密度聚乙烯容器，并把不同深度水样贴 上标签以视区别。 实验中的标准海水氯度值为 17‰ ～19‰ 1.1.2 仪器
摘要：实验采用荧光黄法测定海水中的氯度。 实验中选用不同季节、不同深度的海水进行分析，得到景唐 港海域盐度的分布及变化因素。 其盐度变化总趋势为表层低，下层高。 冬季表层盐度比其它季节高。 关键词：荧光黄法；海水盐度；海水氯度 中图分类号：TQ124.4+1 文献标志码：A 文章编号：1008-1267（2009）03-0042-02
在利用分光光度计测量吸光度时， 所用的比色 皿应该是塑料的或玻璃的，并且用之前应绝对保证清 洗干洁，禁止使用石英（成分为二氧化硅）比色皿，因 为染料会跟二氧化硅发生共价结合[3]，而染料粘到玻 璃或塑料比色皿上时，可以用甲醇或洗涤剂清洗掉。
2 方法
2.1 标准测定方法 2.1.1 在小试管中依次按梯度加入 100 μL 中含 10 到 100 μg 蛋白质。 如果近似样本浓度是未知，可以 测定一系列稀释品（如 1，1:10，1:100，1:1000）。 准备 重复每个样品。 2.1.2 为校正曲线， 取体积为 10，20，40，60，80 和 100 μL 的 1 mg/mL 标准牛 γ-球蛋白到小管中，蒸馏 水补至 100 μL。 取 100 μL 的蒸馏水作为空白试剂。 2.1.3 每管添加 5 mL 蛋白质的试剂， 倒转或者摇 动使其混合均匀，动作要轻以免产生泡沫，否则重 现性会降低。 2.1.4 混 合 后 2 min 到 1 h 内 以 标 准 液 为 空 白 在 595 nm 下测定样本的 A 值 （见注意事项 3.2）。 100 μg 标准在 595 nm 下的 A 值应在 0.4 左右。 标准曲 线不是直线，和精确的吸收不同，要看检测试剂的 放置时间。 因此，每套检测都要新建一个标准曲线。 2.2 微量测定方法
3 注意事项
3.1 该考马斯亮蓝法是最常用的生化试剂测蛋白 含量的方法里比较不受干扰的一种。 但是，有少数 的化学药品（尤其是一些去污剂和两性电解质），其 空白试剂或与蛋白染料反应后它们的吸光度可能 会有显著改变（见表 1），这些物质可以用凝胶过滤， 透析，或磷酸钙沉淀蛋白质的方法从样品溶液中除 去，这也是目前测量蛋白质含量时集中存在的一个 问题。
95% 乙 醇 中 ， 然 后 与 100 mL 85%磷酸混合，用蒸馏 水稀释定容至 1L。 1.2 标准蛋白质液
以浓度为 1 mg/mL 的牛 γ-血清球蛋白（在微量 测定时浓度用 100 μg/mL）液作标准。 为保证固体蛋 白中的水分含量在贮藏过程中不会发生大的变化，
平时应将该标准液放在-20℃的环境中储存。 1.3 塑胶制品及玻璃制品
在许多蛋白质研究的领域中，用一种快速准确 的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。 一种新建立 的考马斯亮蓝法在许多实验中已成为首选方法用 来定量的检测蛋白浓度。与传统的 Lowry 法相比，该 法更易操作，更快，更灵敏，此外，它受其他一些试 剂和非蛋白成分干扰也较小。
该考马斯亮蓝法其检测原理是基于染料考马 斯蓝 G250 和蛋白质之间形成的特异性结合。 详细 的 研 究 表 明[1]，该 染 料 可 以 自 由 存 在 于 四 种 不 同 的 离子形式中。 相比之下，染料更多的阴离子形式与 蛋白质结合且结合后显蓝色， 在 590 nm 左右具有 最大吸收。 因此通过定量测定染料的蓝色离子的量 就可以算出蛋白质的量， 这通常可以在 595 nm 处 测定吸光度获得。
（1）0.1%荧光黄钠盐溶液：配制 0.1 mol/LNaOH 溶液 150 mL，量取 10 mL 将 0.1 g 荧光黄溶于其中， 并加 0.1 mol/L 稀硝酸溶液中和到中性，然后用蒸馏 水稀释到 100 mL，贮于棕色试剂瓶中。
（2）1%淀粉溶液：称取可溶性 淀 粉 （A.R）2.5 g， 先用少量蒸馏水调成糊状， 倒入 250 mL 煮沸的蒸 馏水中，冷却至室温。