实验三、血清中总胆固醇的测定
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验三
血清中总胆固醇 的测定
（胆固醇氧化酶法）
一、实验目的
学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。
掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。
二、实验原理
血清总胆固醇 （1） 胆固醇酯 游离胆固醇
胆固醇酯酶
游离胆固醇＋FAA
胆甾烯酮+H2O2
（2）游离胆固醇
胆固醇氧化酶
（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： Al/L
A样 C样= × C 标 A标
样品管光密度值 ×5.17 样品管胆固醇浓度 ＝ 标准管光密度值 (mmol/L)
参考值
胆固醇
血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度
光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清
试剂：总胆固醇测定试剂盒 用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min； 冷却至室温后，510nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘 油三酯污染。
微量移液枪的正确使用
思考题
1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 的基本原理？ 2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何 克服？
血清中总胆固醇 的测定
（胆固醇氧化酶法）
一、实验目的
学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。
掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。
二、实验原理
血清总胆固醇 （1） 胆固醇酯 游离胆固醇
胆固醇酯酶
游离胆固醇＋FAA
胆甾烯酮+H2O2
（2）游离胆固醇
胆固醇氧化酶
（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： Al/L
A样 C样= × C 标 A标
样品管光密度值 ×5.17 样品管胆固醇浓度 ＝ 标准管光密度值 (mmol/L)
参考值
胆固醇
血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度
光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清
试剂：总胆固醇测定试剂盒 用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min； 冷却至室温后，510nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘 油三酯污染。
微量移液枪的正确使用
思考题
1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 的基本原理？ 2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何 克服？