牡丹籽提取物的抑菌特性

1.0%和1.0%。牡丹籽提取物对温度和紫外线具有一定的稳定性。此外，牡丹籽提取物抑菌浓度与时间有关。
关 键 词：牡丹籽提取物；抑菌作用；最低抑菌浓度
中图分类号：TS201.3 文献标识码：A
文章编号：0254-5071（2009）03-0059-03
Antibacterial properties of peony seeds extract
研究报告
中国酿造
2009 年 第 3 期
总第 204 期 ·59·
牡丹籽提取物的抑菌特性研究
白喜婷，朱文学，罗 磊，樊金玲，向进乐，肖海芳
（河南科技大学 食品与生物工程学院，河南 洛阳 471003）
摘 要：以牡丹籽为原料，利用牡丹籽提取物对多个菌种进行了抑菌活性实验，结果表明：牡丹籽提取物Ⅰ（牡丹籽油）对所有的供试
将 提 取 物 溶 液 分 别 在 紫 外 灯 下 处 理 10min、20min、 30min、40min、50min、60min后，用滤纸片法测定其抑菌活 性，用未处理同浓度的提取物溶液做对照。 1.2.8 牡丹籽提取物抑菌浓度与抑菌时间的关系
以枯草杆菌为代表，选择牡丹籽提取物Ⅲ（即水溶性 成分），配制成最小抑菌浓度以上的5个浓度梯度，在每个 试管中分别加入8mL已灭菌的细菌液体培养基、2mL提取 物溶液和0.1mL菌悬液，以培养基中只接入细菌而不加提 取物的试管做对照，培养不同时间后分别测定其OD值，计 算抑菌率，确定牡丹籽提取物抑菌浓度与抑菌时间的关系。
源自文库
牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）属毛莨科芍药属，落 叶灌木，广泛分布于河南洛阳、山东荷泽、安徽铜陵、陕西 汉中、河北柏山、四川、甘肃、浙江等地，据统计，我国牡丹 的种植面积已达30万亩，牡丹籽年产量3万t左右[1]。目前， 对于牡丹药用成分的研究主要集中在根皮上，根皮为常 用中药，其主要有效成分为丹皮酚 (paeonol)，具有镇痛、 止血、消炎、抗菌等多种药理作用[2]。经过研究发现，牡丹 籽提取物中也含有酚类物质，其抗氧化剂的抑菌活性早已 被证实，MACNEIL等报道鸡肉用0.003%的BHA处理后在 3℃下保藏3周可以减少菌数[3-4]。BRANEN[5]提出酚类物质 对很多细菌有效。CHANG和BRANEN[6]报道在真菌培养 基中250mg/kg的BHA就可以抑制霉菌生长以及黄曲霉毒 素的生成。RACCAH在酚类抗氧化剂抑菌活性文献综述 中提出：酚类物质抑菌能力比较强[7]。
仪器设备：SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩义市英峪予华仪 器厂；RE-52A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；BCM-1000 型生物净化工作台：苏州净化设备有限公司；HPX-9272MBE 数显电热培养箱：上海博讯事业有限公司医疗设备厂；722N 分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；LDZX-50KBS立 式压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂；电热恒温鼓风干 燥箱：上海跃进医疗器械厂；BCD-215YDE电冰箱：青岛海尔 股份有限公司。 1.2 实验方法[8-12] 1.2.1 牡丹籽提取物的制备
细菌为绿脓杆菌 （Pseudomnas）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、沙门氏菌（Salmonella sp）、巴氏杆菌（Pastcurella）、 大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus aureus）、链球菌（Streptococcus）；霉菌为根霉（Rhizopus）、黑曲霉（Aspergillus niger）。 1.1.2 仪器设备
将供试的各种菌种进行液体和斜面2次复壮活化，细 菌置37℃的培养箱中培养24h，霉菌置28℃的培养箱中培 养3d～5d，取一定量已活化的供试菌于装有无菌水的试 管中，配制成含菌数为107个/ mL～108个/ mL的菌（或孢子） 悬液（平板菌落计数法测定），备用。 1.2.4 滤纸片法测定提取物的抑菌作用
取制备好的菌悬液0.1mL，滴入已倒有相应固体培养 基的平皿表面，用涂布器使其均匀分布在培养基的表面， 用无菌镊子夹取浸有液体的滤纸片，放入含菌平皿中，每 皿3片，按上述相应条件培养，每个菌种做2个重复，量取抑 菌圈直径，取其平均值。 1.2.5 最低抑菌浓度（MIC）的测定
将提取物Ⅱ和提取物Ⅲ分别配成质量分数为 3%、 2%、1%、0.5%、0.25%、0.1%、0.05%的溶液，选择有敏感作用 的菌种作供试菌。在各平皿中分别加入2mL不同浓度的牡 丹籽提取物溶液，然后每皿倒入8mL已溶化的40℃左右的 固 体 培 养 基 ，混 均 ，冷 却 凝 固 后 ，每 平 皿 加 入 0.1mL 菌 悬 液，涂匀，按相应条件培养，观察生长情况，每个浓度做2个 重复。观察结果，以不长菌的最低提取物溶液浓度为该提
BAI Xiting, ZHU Wenxue, LUO Lei, FAN Jinling, XIANG Jinle, XIAO Haifang
(College of Food and Bioengineering, Henan University of Science & Technology, Luoyang 471003, China）
将滤纸用打孔器打成直径6mm的圆形小纸片，分装于 洁净干燥的培养皿内，灭菌备用。将提取物Ⅱ（脂溶性成 分）用甲醇溶解，提取物Ⅲ（水溶性成分）用无菌水溶解，分 别制成质量分数为5%的溶液，用无菌镊子将滤纸片放入上 述溶液和提取物Ⅰ中浸泡4h，同时另取滤纸片分别放入甲 醇和无菌水中作空白对照，浸泡后取出，吸去多余的液体 在无菌操作台里晾干备用。
取物的最低抑菌浓度。 1.2.6 温度对牡丹籽提取物抑菌活性的影响
将稀释至一定浓度的提取物置于密闭容器中，分别置 于 30℃ 、50℃ 、80℃ 、100℃ 水 浴 和 121℃ 湿 热 条 件 下 处 理 10min后，用滤纸片法测定其抑菌活性，用未处理同浓度 的提取物溶液做对照进行比较，以确定温度对牡丹籽提取 物抑菌效果的影响。 1.2.7 紫外线对牡丹籽提取物抑菌活性的影响
细菌类采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方为牛肉膏 5g，蛋白胨10g，NaCI 5g，蒸镏水1000mL，琼脂15g～20g，pH 7.2～7.4，121℃高压蒸气灭菌30min，备用。液体培养基不 加琼脂。
霉菌类采用察氏培养基，配方为NaNO3 3g，K2HPO4 1g， MgSO4 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4 0.01g，蔗糖20g，蒸镏水1000mL， 琼脂20g，pH值自然。将上述药品按顺序溶解后，加入琼脂 加热溶化，分装，121℃高压蒸气灭菌30min，备用。 1.2.3 菌悬液的制备
为了提高牡丹的利用价值，寻找一种新的抗氧化剂， 本实验对牡丹籽提取物的抑菌特性进行了研究，旨在为提 高牡丹的经济效益和产业附加值，对牡丹的综合利用及牡 丹产业的深加工开辟一条新途径。 1 材料与方法 1.1 材料
牡丹籽：牡丹籽由洛阳市土桥镇牡丹种苗研究所提供，牡 丹籽人工剥壳后得牡丹籽仁，经粉碎、烘干后使用。 1.1.1 供试菌种
菌种
抑菌圈直径/mm
菌种
抑菌圈直径/mm
枯草杆菌 沙门氏菌
根霉 黑曲霉 巴氏杆菌
13.2
大肠杆菌
无
9.1
金黄色葡萄球菌
无
12.8
绿脓杆菌
无
10.5
链球菌
无
无
甲醇
无
从表1可以看出，牡丹籽提取物Ⅱ（脂溶性成分）对枯 草杆菌、沙门氏菌、根霉和黑曲霉均有一定的抑菌作用，对 枯草杆菌和根霉抑菌效果较好，对沙门氏菌和黑曲霉抑菌 作用较弱。对巴氏杆菌、链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球 菌、绿脓杆菌都没有抑菌作用。同时还可以看出，甲醇在 做溶剂时，对提取物的抑菌作用没有影响。
取100g去皮粉碎烘干的牡丹籽粉，装入500mL的三角
收稿日期：2008-12-03 基金项目：河南省洛阳市科技发展计划项目（0602042-5） 作者简介：白喜婷（1966-），女，副教授，主要从事食品及农产品加工的教学与研究工作。
2009 No．3
·60· Serial No．204
China Brewing
Research Report
瓶中，加入300mL的正已烷，在可控温摇床上48℃振荡浸 提12h，过滤，将滤液减压浓缩，挥去正己烷，得到提取物Ⅰ （牡丹籽油）。
将滤渣烘干，以1∶4的料液比加入95%vol的乙醇，70℃ 浸提2h，过滤，滤渣在同样条件下重复浸提1次，合并滤液， 将滤液减压浓缩成浸膏。将浸膏用无水乙醇经多次少量 溶解洗涤后，合并洗液（即乙醇溶液），将洗液减压浓缩蒸 干，得到提取物Ⅱ（脂溶性成分）。留在容器底部不溶于乙 醇的部分为提取物Ⅲ（水溶性成分）。 1.2.2 培养基的制备
抑菌率（%）= 对照组吸光值 - 试验组吸光度值 ×100 对照组吸光值
2 结果与分析 2.1 牡丹籽提取物的抑菌效果
牡丹籽提取物Ⅰ即牡丹籽油对所有的供试菌种都没 有明显地抑菌作用，提取物Ⅱ和提取物Ⅲ对不同的供试菌 抑菌效果不同，结果分别见表1和表2。
表1 牡丹籽提取物Ⅱ的抑菌作用 Table 1. Antibacterial effect of peony seeds extractⅡ
菌种都没有明显地抑菌作用；牡丹籽提取物Ⅱ（脂溶性成分）对枯草杆菌、沙门氏菌、根霉菌和黑曲霉菌均有一定地抑制作用；提取物
Ⅲ（水溶性成分）对枯草杆菌、沙门氏菌和巴氏杆菌均有一定抑菌作用。牡丹籽提取物Ⅱ对枯草杆菌、沙门氏菌、根霉菌和黑曲霉菌的
最低抑菌浓度分别为0.10%、0.50%、0.10%和0.50%；牡丹籽提取物Ⅲ对枯草杆菌、沙门氏菌和巴氏杆菌的最低抑菌浓度分别为0.5%、
Abstract: The antibacterial effects of peony seeds extract on different bacteria were investigated in this paper. The results showed that the peony seed extractⅠ（Peony oil）had no obviously inhibitory effects on all tested strains, and peony seed extractⅡ（fat-soluble components）had inhibitory effect on Bacillussubtilis,Salmonella,RhizopusandAspergillusnigert.ExtractⅢ（water-solublecomponents）,inhibitedthegrowthsofBacillussubtilis,Salmonella and Papanicolaou Bacilli to some extent. The minimum inhibitory concentration of peony seed extractⅡfor Bacillus subtilis, Salmonella, Rhizopus and Aspergillus niger were 0.10%, 0.50 %, 0.10% and 0.50 %, respectively, and forⅢextract , the minimum inhibitory concentration for Bacillus subtilis, Salmonella and Pasteurella were 0.5%, 1.0% and 1.0%, respectively. Peony seed extract showed some resistance to temperature and UV. In addition, the inhibitory concentration of peony seeds extract was associated with time. Key words: peony seed extract；antibacterial effect；minimum inhibitory concentration