较高温度下骨髓间充质干细胞的复苏率及复苏后分化
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，它的特点是灵敏度高、经济。
学术术语来源---Bio-gide胶原膜体外复合培养犬骨髓间充质干细胞的软骨分化文章亮点：1 实验先采用全骨髓血培养法培养犬骨髓间充质干细胞，继而采用贴壁筛选纯化，方法简便，所获细胞数量及纯度满意，并在体外成功诱导分化出软骨细胞。
2 实验所采用的细胞支架材料为瑞士Geistlich公司生产Bio-gide胶原膜，这是一种由Ⅰ型和Ⅲ型胶原组成复合材料，分为致密层和疏松层，种子细胞接种在胶原膜的较为粗糙的疏松层，而光滑的致密层在体内实验中朝向关节腔，有利于骨髓间充质干细胞的黏附、生长及向软骨细胞的分化，三维立体培养有助于诱导生成的软骨细胞维持表型。
3 实验显示Bio-gide胶原膜与骨髓间充质干细胞复合培养有良好的生物相容性，但能否体内构建组织工程软骨组织，促进软骨细胞的生长，缺损的软骨组织得到完整的修复，尚待进一步研究。
关键词：生物材料；组织工程软骨材料；膜生物材料；骨髓间充质干细胞；Bio-gide胶原膜；组织工程；股骨头坏死；软骨缺损；种子细胞；国家科学自然基金摘要背景：应用组织工程方法修复股骨头坏死后的软骨损伤应解决的2个关键因素是种子细胞和支架材料。
目的：探讨Bio-gide胶原膜体外与犬骨髓间充质干细胞复合成软骨的可行性。
方法：采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法体外分离培养比格犬骨髓间充质干细胞，观察细胞形态学变化，以细胞表面抗原进行鉴定。
中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展
中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展作者：方健康周轶平李玛琳来源：《中国中药杂志》2014年第15期[摘要] 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）是一类来源于骨髓的多能干细胞，不仅能够提供造血支持，且具有自我更新、高度增殖以及多向分化的潜能，是目前干细胞研究的热点。
近年来，科研人员就中药对BMSCs的影响开展了一系列的研究，发现有的中药能够促进BMSCs的增殖，有的则能够抑制其凋亡，还有的能够诱导其向成骨细胞、软骨细胞等多个方向分化。
其中，部分研究还就作用机制进行了探讨，作者对其研究进展进行了概述。
[关键词] 中药；骨髓间充质干细胞；增殖；凋亡；分化；研究进展[收稿日期] 2013-12-22[基金项目] 国家自然科学基金项目（30860357）[通信作者] 李玛琳，教授，E-mail：limalinb@[作者简介] 方健康，硕士研究生，E-mail：jackfang1987@骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMCSs）已有半个世纪的研究历史[1]，并日益受到研究人员的广泛关注。
BMSCs在一定条件下可向成骨细胞、软骨细胞、心肌样细胞、血管内皮细胞、神经元样细胞、肝细胞、脂肪细胞等多个方向分化。
BMSCs所具备的这种多向分化潜能和自我更新能力，以及较容易获取、体外扩增快、低免疫排斥等优点，使其成为干细胞研究的热点。
近年来，研究人员利用中药对体外培养的BMSCs进行干预，以探索这些中药对BMSCs增殖、凋亡及分化等生命活动的影响。
这些探索将有助于阐明中医药的作用机制，将对我国中医药事业、重大疾病研究、细胞工程、组织工程等生命科学技术领域的发展产生积极的影响。
1 中药促进BMSCs的增殖细胞增殖是生物体最重要的生命活动之一，是生物生长、发育、繁殖、遗传的基础。
近几年研究发现，多种中药对BMSCs的增殖具有一定的促进作用。
Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养取自Wistar大鼠骨髓，用Wistar大鼠间质干细胞完全培养基贴壁培养，传代扩增至第二代冻存，每支含细胞1×106个。
Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养1. 准备好37℃水浴。
2. 准备好Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基，温育到37℃。
3. 在15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。
4. 从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞，立即放入-80℃冰箱（目的是让进入冻存管的液氮稍加挥发）。
5. 在-80℃放置2-3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37℃温水中，快速晃动使管中内含物尽快融化。
仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。
注意：•1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
•2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
6. 用70%-75%的酒精消毒冻存管口的外壁。
7. 在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL 完全培养基的15mL离心管中。
注意避免产生气泡。
8. 为了减少细胞损失，往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，用吸管将这1mL的细胞悬液吸入离心管中，再用吸管将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。
9. 将细胞悬液经250 g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。
10. 尽量去除上清液，向细胞沉淀物加入1-2 mL的完全培养基（已预热到37℃），轻轻吹打均匀。
11. 将细胞全部接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养器皿中，加入足量的完全培养基。
轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12. 放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13. 复苏后的第二天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基（已预热到37℃）。
14. 之后，每两天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%-90%的汇合度。
15. 当细胞达80%-90%的汇合度，进行消化传代。
成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性
成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性毕薇薇;郭巍;赵春明;郭立斌;李志刚【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)028【摘要】目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础.方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行.实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90.实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况.②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7 d,绘制生长曲线.③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照).④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率.将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存.30 d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况.结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长.②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象.③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%.④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性.结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定.【总页数】4页(P5519-5522)【作者】毕薇薇;郭巍;赵春明;郭立斌;李志刚【作者单位】四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.成人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性鉴定 [J], 闫磊;慕晓玲2.兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性 [J], 李松;郭延伟;房殿吉3.兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性 [J], 李松;郭延伟;房殿吉4.体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性 [J], 黄栋;李巍;刘羽;朱希山5.成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及其生物学特性研究 [J], 罗依;梁彬;余勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程干细胞是一种具有自我更新能力和多潜能分化的细胞，可以分化成为各种类型的细胞，包括脂肪细胞和骨细胞。
间充质干细胞（MSCs）是一种重要的干细胞类型，它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪组织和胎盘组织等。
间充质干细胞成脂成骨分化的实验方法学开发，是生物医学研究中一个重要的课题。
本文将从方法学开发的思路和流程入手，对间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学进行探讨。
一、研究背景间充质干细胞成脂成骨分化是指间充质干细胞在一定的诱导条件下分化为脂肪细胞或骨细胞的过程，这一过程在细胞生物学和再生医学领域具有重要意义。
成脂成骨分化的研究有助于深入了解骨质疏松症、骨折愈合和脂肪代谢等疾病的发病机制，同时也为干细胞治疗提供了理论基础。
因此，开发一套可靠的实验方法学对于间充质干细胞成脂成骨分化研究至关重要。
1.确定分化诱导条件间充质干细胞在体外培养时，可通过添加不同的生长因子、细胞因子或药物来诱导其分化为脂肪细胞或骨细胞。
因此，确定最佳的分化诱导条件是方法学开发的第一步。
此过程需要考虑到诱导因子的种类、浓度、培养时间等因素，以及不同来源的间充质干细胞在分化过程中的差异性。
2.确定评价指标分化过程中，需要通过一系列的生物化学和分子生物学方法来评价间充质干细胞的脂肪细胞或骨细胞特征。
这些评价指标包括脂肪细胞的油红O染色、脂肪球形成实验，以及骨细胞的矿化实验、ALP染色等。
确定合适的评价指标对于评估分化效果至关重要。
3.确定实验方案在确定了分化诱导条件和评价指标后，需要制定详细的实验方案。
包括细胞的处理方法、诱导条件的优化、实验的时间节点等，以便后续实验的顺利进行。
1.间充质干细胞的提取和培养首先需要从适当的组织中分离和提取间充质干细胞，并进行细胞培养。
这一步需要注意细胞的纯度和活性，以保证后续实验的准确性。
2.分化诱导实验将培养好的间充质干细胞分别进行脂肪和骨分化诱导实验，根据预先确定的诱导条件进行处理。
骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤研究
细胞等因不贴壁 ， 以后的换 液 中被逐渐弃去 ， 在 以达到分 离纯化的 目的。贴壁 的 Ｂ Ｃ生长形成 的细胞集 落 ， ＭＳ 称 为成纤维细胞集 落形成单位（ Ｆ 卜 ） 目前应用较广泛 Ｃ ＬＦ 。 的是 Ｐ ｒ ｌ密 度梯 度 离 心 法 ， ｅｃ ｌ ｏ 即根 据 Ｂ Ｃ与 其 他 细 胞 ＭＳ 密度 不 同， 用 Ｐ ｒ ｌ分 层 液 进 行 分 离 。然 而 ， 采 ｅ ｏ１ ｃ 由于
・
１ ０ ９ ・
国际 骨科 学 杂 志 ２ ｌ ｏ ０年 ５月 第 ３ 卷 第 ３期 Ｉｔ ｔｏ ， ｙ２ ，２ １ １ ｎ Ｏｒｈ ｐ Ｍａ ５ ０ ’ｖｏ．３ Ｊ Ｉ １
．
骨髓 问充质干细胞移植治疗脊髓损伤研究
陈永 刚 王栓 科
摘要
王 旭 刘 文 忠 马 延 超
性、 自体移植等， 可 在脊髓损伤修复和 细胞治疗 等方 面具
有广 阔 的 临床 应用 前 景 。
１ Ｂቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＳ ｌ Ｃ分 离培 养 ｌ
目前常用的 Ｂ Ｃ分离培养方法 有贴壁筛选法 、 ＭＳ 密
度 梯度 离 心 法 、 式 细 胞 仪 或 免 疫 磁 珠 分 选 法 。贴 壁 筛 流 选法 即根据 Ｂ Ｃ在 塑料 组 织 培 养皿 贴 壁 生 长 的特 性 进 ＭＳ 行分 离 ， 般 以贴 壁 １￣ ２ 为 宜 。造 血 系细 胞 、 一 ２ ４ｈ者 内皮
赵 琳
２ ０世 纪 ９ ０年 代 成 功 分 离 出骨 髓 间 充质 干 细 胞 （ ＢＭＳ 并 移植 用 于治 疗 急性 脊 髓 损 伤 动物 模 Ｃ）
型， 引起 了广泛 关 注 。Ｂ Ｃ移 植 治疗 脊 髓损 伤 的 实验研 究主要 有 单独 移 植 、 合 支 架移 植 、 合 细胞 移 ＭＳ 联 联 植 、 合 药物 移 植 及转 基 因千 细胞 移 植 等 。该 文 就 Ｂ Ｃ生 物 学 特 性 、 ＭＳ 联 ＭＳ Ｂ ， Ｘ ２移植 治 疗 脊 髓 损 伤 研 究现
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。
在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。
本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。
BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。
因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。
近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。
BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。
细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。
其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。
本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。
具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。
细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。
细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。
细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。
通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。
通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。
经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。
在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。
这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。
干细胞冻存及复苏步骤
干细胞冻存及复苏步骤
一、干细胞冻存及复苏步骤
1.提取干细胞
(1)首先，从捐赠者身体组织中提取干细胞，比如从头发根部提取毛发内的细胞，或从脐带血中提取干细胞。
(2)使用双曲线增殖诱导方法，通过对提取的干细胞进行双曲线增殖诱导，使其变成能够细胞分裂的干细胞。
2.干细胞细胞系建立
细胞分裂时，可以分离出更多干细胞，将这些干细胞细胞分离出来，再放入相应的培养基中，建立起细胞系。
3.干细胞冻存
(1)在细胞分离时，应当尽快进行冻存，以防止细胞活性下降。
(2)将细胞放入冰淇淋箱，将其温度降至-80℃，然后将其冻存，一般可以保存2-3年。
(3)将细胞放入低温液氮坩埚中冻存，可以保存更久，约10年。
4.干细胞复苏
(1)将细胞从低温冰箱中取出，将其温度升至4℃，然后将其放入相应的培养基中，缓慢地升温，使其复苏。
(2)缓慢地加入相应的培养液，适当的调节成分，使其复苏，并且保持活性。
(3)观察复苏的细胞，观察其繁殖情况，确保细胞复苏的质量。
5.细胞发展
(1)可以使用双曲线增殖诱导方法，结合培养基中的生长因子，诱导细胞进行分化，用于后续的发展。
骨髓间充质干细胞（BMSC）是什么？骨髓间充质干细胞详细介绍
骨髓间充质干细胞（BMSC）是什么？骨髓间充质干细胞详细介绍骨髓间质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSC)是骨髓中除造血干细胞以外的另一种重要的成体干细胞，参与构成造血微环境，同时还具有多向分化潜能、低免疫原性、取材方便、扩增迅速、遗传背景稳定等特点，在组织工程和细胞及基因治疗等方面具有广阔的应用前景。
骨髓间充质干细胞(BMSC),既往称为骨髓基质成纤维细胞,是一类起源于中胚层的成体干细胞,具有自我更新及多向分化潜能,可分化为多种间质组织,如骨骼、软骨、脂肪、骨髓造血组织等。
骨髓BMSC的迁移、定植、增殖与分化,需要从外界获取信息。
其分化方向取决于所在的微环境。
这里的”微环境”不仅包括骨髓微环境,还包括局部间质组织微环境。
骨髓间充质干细胞具有向中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化的能力，这些细胞包括成肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞、神经胶质细胞、神经细胞、造血干细胞、基质细胞等，在两性霉素B和5-氮胞苷作用下，还可形成肌小点，骨髓间充质干细胞用于中胚层和神经外胚层来源的组织损伤及退行性病变的治疗前景巨大。
动物实验已经证实，骨髓间充质干细胞单独应用可以较好地促进骨折愈合和软骨损伤的修复，通过体外培养使其覆盖于陶瓷支架或碳纤维网络等再植入患处效果更明显。
骨髓间充质干细胞体外培养，因具有黏附于塑料培养皿壁的能力而易于分享，体外经过长期连续培养和冷冻保存后不会改变其分化潜能，植入以后可以分化成造血以外的组织，如肺、软骨、骨、神经等，并表现出相应组织细胞的表型。
将骨髓间充质干细胞植入小鼠体内，发现其可向肌肉组织处迁移并参与新肌的再生；而将人的骨髓间充质干细胞植入大鼠的脑内，发现其分化为星形胶质细胞并较好地与受体组织结合。
将流产胎儿体内的骨髓干细胞植入人为诱发病变的实验鼠肝脏内，发现干细胞在实验鼠体内渐渐长为肝细胞，病鼠肝脏恢复正常功能。
骨髓间充质干细胞易于外源基因的导入和表达，可作为基因载体，从而将组织工程治疗和基因治疗有机地结合在一起。
骨髓间充质干细胞详解
制作人：黄俊波 专业：中西医结合基础
主讲内容：
2020/9/26
• BMSCs概念
• BMSCs微观结构
• BMSCs分离、培养、鉴别
四 BMSCs分化 五一 BMSCs运用
干细胞的分类：
2020/9/26
2020/9/26
骨髓的分类：
2020/9/26
黄骨髓
骨
血窦
髓
红骨髓
造血干细胞
二、BMSCS微观结构：
相邻细胞间还可见到一些细胞膜局部 电子密度增高、细胞膜内颗粒相互融 合的缝隙连接。缝隙连接可加强相邻 细胞的连接,但更重要的是细胞的一种 通讯结构,有利于细胞间信息传递，与 细胞分泌、增殖、分化相关。
2020/9/26
三、BMSCS的分离、培养、鉴定：
目前用于分离BMSCs的方法主要有密 度梯度离心法、贴壁筛选法、流式细 胞仪分离法和磁珠分选法。 流式细胞仪和磁珠分选法虽然可获得 较纯的细胞，但是费用昂贵、操作复 杂、不适合临床应用。
2020/9/26
三、BMSCS的分离、培养、鉴定：
BMSCs的培养方法有二维培养（极低 密度传代培养，低氧张力下培养) 、 三维培养、静止性0/9/26
三、BMSCS的分离、培养、鉴定：
BMSCs没有特异性的抗原表型，对 其鉴定还没有直接的方法。
2020/9/26
2020/9/26
一、BMSCS概念：
骨髓间充质干细胞的基本概念是上世 纪70年代，Friedenstein等在做全骨髓 培养时报道了骨髓中有骨髓多能基质 干细胞。 由于呈成纤维细胞样外观也被称为集 落形成单位成纤维细胞(clony forming units fibroblasts，CFU--F)或骨髓基质细 胞(bone mesenchymal stem cells BMSCs)。
人骨髓间充质干细胞与羊膜间充质干细胞的研究进展
人骨髓间充质干细胞与羊膜间充质干细胞的研究进展陈锐憬【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(046)027【总页数】4页(P3863-3866)【关键词】间质干细胞;人骨髓间充质干细胞;羊膜间充质干细胞【作者】陈锐憬【作者单位】昆明医科大学第一附属医院血液科/云南省血液病研究中心 650032【正文语种】中文【中图分类】R321间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)广泛存在于机体的各种组织器官中，例如骨髓、脂肪、羊膜、脐带等。
最初MSC是在骨髓中被发现的，因此骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)被认为是干细胞的最好来源，并且用BMSC作为衡量其他组织干细胞来源的标准[1]。
在其他组织来源的MSC中，羊膜间充质干细胞(amniotic mesenchymal stem cells,AMSC)因具有增殖能力强、免疫原性低和来源无伦理学争议等特点备受专家学者们的关注，被视为BMSC的理想替代物。
本文就BMSC和AMSC的生物学特性、免疫调节机制及临床运用的潜在价值进行综述。
hBMSC主要来源于骨髓，需经有创操作进行采集，具有一定伦理学争议。
hBMSC常用的体内分离方法有4种：密度梯度离心法、全骨髓贴壁分离法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法。
其中密度梯度离心法应用最广泛也最为经典，此方法获得的hBMSC纯度高，增殖活性强，但操作复杂，故研究者常用简单易行的贴壁法与此结合。
最近，有学者探索使用一种BMSC过滤装置分离纯化MSC，这种滤过装置可快速、高效、可靠地分离BMSC，避免BMSC被外界污染物污染[2]。
BMSC最常用的培养液是含10%～20%胎牛血清的DMEM培养基。
MSC在骨髓中的含量稀少，大约1×105～1×106个单核细胞中含有1个MSC，体外分离培养、扩增纯化在科学研究及临床应用当中就显得尤为重要。
骨髓间充质干细胞的分化调控机制
骨髓间充质干细胞的分化调控机制骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是成年人体内广泛存在的一类干细胞，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等，因此被广泛应用于组织工程和再生医学领域。
然而，MSCs体外培养过程中易发生细胞龄衰老、不同源性、分化失衡等问题，限制了其应用。
因此，探究MSCs分化调控机制，有助于解决上述问题，提高MSCs应用效率和安全性。
一、基因转录调控MSCs分化过程中涉及到大量基因的转录调控。
研究发现，BMP、Wnt、Notch、Hedgehog等信号通路在MSCs分化调控中发挥重要作用。
以BMP为例，它可以促进MSCs向成骨细胞分化，并通过Smads通路促进Runx2基因表达，从而进一步促进成骨细胞分化。
另外，BMP还可以通过调控Noggin、Chordin等抑制剂的表达，来抑制MSCs向脂肪细胞分化。
Wnt、Notch、Hedgehog等信号通路同样也在MSCs分化调控中发挥类似的作用。
二、表观遗传学调控表观遗传学调控是指非编码RNA、DNA甲基化、组蛋白修饰等方式对基因表达进行调控的过程。
已有研究发现，表观遗传学调控在MSCs分化调控中也扮演着重要角色。
例如，研究显示非编码RNA可以通过miRNA介导维持MSCs干细胞状态，抑制其向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化。
另外，DNA甲基化也在MSCs分化调控中发挥着重要作用。
研究发现，MSCs向成骨细胞和脂肪细胞分化过程中，具有不同的DNA甲基化模式。
因此，对MSCs分化过程中的表观遗传学调控机制进行深入研究，有助于揭示MSCs分化调控的分子机理。
三、细胞外基质调控细胞外基质是细胞外部分的生物大分子网状结构，包括胶原蛋白、Laminin、纤维素等多种成分。
细胞外基质不仅为MSCs提供支持力，而且还参与了MSCs的分化调控。
研究发现，不同类型的细胞外基质成分可调控MSCs向特定细胞系分化。
心肌梗死后骨髓间充质干细胞治疗改进心功能及心肺复苏结果的研究
第２ ８卷 第 ５期
２ ０ ０ ７年 ９月
中山大学学报（ 医 学 科 学 版）
Ｖ０ ｌ ＿ ２ ８ Ｎｏ ． ５ Ｓ ｅ ｐ． ２ ０ ０ ７
Ｊ ＯＵ Ｒ Ｎ ＡＬ ０ Ｆ Ｓ ＵＮ Ｙ Ａ Ｔ — Ｓ Ｅ Ｎ ＵＮ Ｉ ＶＥ Ｒ Ｓ Ｉ Ｔ Ｙ （ ＭＥ ＤＩ Ｃ Ａ Ｌ Ｓ Ｃ Ｉ Ｅ Ｎ Ｃ Ｅ Ｓ 、
心肌梗死后骨髓问充质干细胞治疗改进心功能及 心肺复苏结果的研究
王 彤， 黄子 通， 符 岳， 方 向韶
（中 山 大学 附 属 第 二 医 院 急 诊 科 ，广 东 广 州 ５ １ ０ １ ２ ０）
摘
要 ：【 目的 】探索大 鼠心肌梗 死并 经骨髓间充质 于细胞 （ Ｍ Ｓ Ｃ ） 治疗 肺复苏结果 的影响 。【 方法】 １ ８只雄性 Ｓ ｐ ｒ ａ ｇ ｕ ｅ — Ｄ ａ ｗ ｌ ｅ ｙ大 鼠，随机分 为两 组 ， Ｍ Ｓ Ｃ注 射组 和磷 酸缓冲液
（ Ｐ Ｂ Ｓ ） 注 射组 ， 每 组 ９只大 鼠 。先 开 胸结 扎 左 前 降 支 冠 状 动 脉 ， ４周 后 再 次 开 胸 接 受 Ｐ Ｋ Ｈ２ ６荧 光 标 记 的 悬 浮 在
ｗ ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ｎ １ ８ ｒ ａ ｔ ｓ ． Ｍ ｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｌ ａ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａ ｗ ａ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｌ ｉ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｔ ｆ ａ ｎ ｔ ｅ ｉ ｒ ｏ ｒ ｄ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｒ ｔ ｅ ｒ ｙ（ Ｌ Ａ Ｄ ） ．
在。【 结论 】心肌梗死后 Ｍ Ｓ Ｃ治疗 能明显改 善心功能 ， 同时也能 明显 改善心肺 复苏前后 的血流 动力学参数及
细胞复苏温度曲线-概述说明以及解释
细胞复苏温度曲线-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞复苏是指在生物体受到一定程度的损伤或压力后，通过一系列生物学过程恢复到正常状态的过程。
随着科学技术的不断发展，人们对细胞复苏过程中的温度曲线进行了深入研究，以探索最适合细胞复苏的温度条件。
本文将着重探讨在不同温度条件下，细胞复苏过程的变化及其对细胞恢复的影响，以期为生物医学领域的研究和实践提供重要参考。
文章结构如下：1. 引言1.1 概述1.2 文章结构1.3 目的2. 正文2.1 细胞复苏过程2.2 温度对细胞复苏的影响2.3 细胞复苏温度曲线分析3. 结论3.1 总结3.2 实践意义3.3 展望文章结构部分将会介绍本文的整体结构，展示了文章的组织和内容安排，帮助读者更好地理解文章的逻辑和脉络，引导读者阅读和理解全文的主要内容。
1.3 目的：细胞复苏温度曲线是研究细胞在不同温度条件下复苏能力的重要工具。
通过分析细胞复苏温度曲线，我们可以了解在不同温度下细胞复苏的速度和效果，进而探究细胞复苏过程中温度对细胞活力的影响。
本文旨在研究细胞复苏温度曲线的特点和规律，深入探讨温度在细胞复苏中的作用，为相关领域的研究提供理论依据和实验指导，促进细胞复苏技术的发展和应用。
2.正文2.1 细胞复苏过程:细胞复苏是指受到外界环境影响或内部损伤后，细胞通过一系列生物学过程进行修复和恢复功能的过程。
细胞复苏过程可以分为几个关键阶段：第一阶段是细胞感知到外界刺激或损伤信号，启动复苏机制。
在这个阶段，细胞会释放一些信号分子，如细胞因子和炎性介质，招募其他细胞参与复苏过程。
第二阶段是细胞内部开始修复损伤。
这个阶段包括细胞内部的蛋白质修复系统的激活和细胞凋亡的阻止等过程。
细胞会修复受损的膜结构和蛋白质，确保细胞功能的正常运作。
第三阶段是细胞恢复功能。
在细胞成功修复受损部位后，细胞会逐渐恢复原有功能，如细胞代谢活性和生长增殖能力等。
这个阶段是细胞复苏过程的最终目标，确保细胞能够正常参与生物学活动。
细胞培养之细胞复苏篇
细胞培养之细胞复苏篇细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻，再培养传代。
细胞复苏应采用快速融化的方法，这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化，从而避免慢悠悠的融化，使得水分渗入细胞内再结晶，从而对细胞再次造成伤害，从而影响细胞的存活率。
由于各种细胞的培养方式大概不太一样，所以就不再详细介绍，今天仅仅说一下细胞复苏的一个大概的注意事项，给各位稍微提个醒。
1. 快速融化的真实原因则是为了防止小冰晶形成大的冰晶，也就是冰晶的一个重结晶。
也就是意味着从液氮中取出来的冻存管，要立即浸入37℃温水中，尽量在1min内融化。
2. 解冻后的细胞直接接种于含有完全培养基的细胞培养瓶或者培养皿中直接培养，过夜后进行换液，目的是将冻存液中的DMSO去除掉，但是如果我们所培养的细胞对冷冻保护剂很敏感的话，解冻后的细胞应先通过离心去除保护剂，再接种到含完全培养基的培养瓶或者培养皿中。
这里所提到的离心，无非就俩目的，一个是去除DMSO，一个是去除死细胞。
3. 冻存管的炸裂问题。
这个是特别需要注意的，以前师姐提醒的时候还没怎么注意，直到它在我手里炸了两次之后，长记性了。
冻存管容易爆炸的原因主要为液氮会渗入到冻存管中，取出后，也但容易挥发，导致体积迅速膨胀，但是又不能及时的排出引起爆炸；或许是冻存管质量差，或者盖子没拧紧。
针对于这个问题可以从以下几个方面稍微避免一下：（1）取放置冻存管的冻存盒的时候要戴好防冻手套以及护目镜，准备好镊子；（2）推荐使用内旋的冻存管，毕竟内旋的冻存管，易于排出，不宜爆炸；（3）但是如果没有内旋的，只能用外旋的冻存管的话，取出后尽快倒置/水平放置数十秒，使得液氮流出；（4）可以先放到-80℃的冰箱中，等液氮挥发干净后，再去复苏，或者是把管子放置于冰上，等到液氮挥发后，再进行复苏；（5）平常我自己复苏细胞的时候，都会在地上先放一些吸水纸或者比较吸水的毛巾，取出后立即将存放冻存管的冻存盒侧放在上边，等液氮挥发干净后再复苏细胞；（6）关于冻存细胞时，是否贴上封口膜的问题吧，有经验的呢，都会发现加不加都一样的。
冻存复苏后骨髓间充质干细胞体外扩增和多向分化潜能研究
冻存复苏后骨髓间充质干细胞体外扩增和多向分化潜能研究项盈;贾冰冰;沈丹;黄国平;解纯刚;郑强;金洁;王金福【期刊名称】《浙江大学学报（工学版）》【年(卷),期】2006(040)011【摘要】冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞,以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明,复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞,对甲苯胺蓝异染并通过RT-PCR 检测出Ⅱ型前胶原mRNA的表达;在脂肪细胞诱导液的作用下,可检测到被诱导细胞中脂滴的产生,通过油红O染色显示出细胞核周围聚集的脂滴;在神经细胞诱导液的作用下,通过免疫组化和RT-PCR均检测出被诱导细胞具有巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,分化细胞延伸分支,末端为典型曲张体.推断复苏的hMSCs仍是具有向软骨、脂肪和神经元多系分化的潜能性干细胞群,可以作为细胞组织工程和治疗相关疾病的一种干细胞来源.【总页数】5页(P2016-2020)【作者】项盈;贾冰冰;沈丹;黄国平;解纯刚;郑强;金洁;王金福【作者单位】浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012;浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012;浙江大学,附属第一医院,浙江,杭州,310006;浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012;浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012;浙江大学,附属第二医院,浙江,杭州,310009;浙江大学,附属第一医院,浙江,杭州,310006;浙江大学,生命科学学院,浙江,杭州,310012【正文语种】中文【中图分类】R239.28【相关文献】1.低温冻存对人绒毛膜来源的间充质干细胞多向分化潜能的影响 [J], 陈霞;尹晓娟2.兔骨髓间充质干细胞培养与多向分化潜能鉴定的实验研究 [J], 刘永亮;叶钢;方针强3.骨髓间充质干细胞多向分化潜能和微环境关系的研究 [J], 范子扬;宋振顺4.大鼠骨髓间充质干细胞多向分化潜能的研究 [J], 汪浩文;何志旭;王志华;刘俊峰5.蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究 [J], 张焱如;刘宗正;韦林盖;苏小虎;赵一萍;芒来因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。