蕙兰×台兰种间杂交种子无菌播种育苗技术研究
大花蕙兰与兰属植物种间杂交研究
植物学通报 2005, 22 (4): 445￣448Chinese Bulletin of Botany①广东省科技攻关重大专项（２００３Ａ２０１０４０１）资助。
②通讯作者。
Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ． Ｅ－ｍａｉｌ： ｚｈｕｇｆ＠ｔｏｍ．ｃｏｍ收稿日期： ２００５－０３－２８ 接受日期： ２００５－０５－１６ 责任编辑： 白羽红组织培养快讯大花蕙兰与兰属植物种间杂交研究①朱根发② 王碧青 陈明莉 蒋明殿 吕复兵（广东省农业科学院花卉研究所 广州 ５１０６４０）摘要 进行了大花蕙兰、墨兰、建兰、纹瓣兰、兔耳兰等兰属植物的种间远缘杂交实验。
在５２个杂交组合中， ８６．５％的杂交组合具明显的子房膨大和果荚发育， 但授粉４个月后未变黄落果的杂交果仅占组合数３２．７％， 经胚胎培养获得植株的杂交组合只占组合数的１９．２％。
大花蕙兰×墨兰与墨兰×大花蕙兰的杂交成功率有较大的差异。
关键词 兰属， 大花蕙兰， 墨兰， 建兰， 纹瓣兰， 兔耳兰， 杂交Study on Hybridization Among Cymbidium Species andHybrid CymbidiumＺＨＵ Ｇｅｎ－Ｆａ② ＷＡＮＧ Ｂｉ－Ｑｉｎｇ ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇ－Ｌｉ ＪＩＡＮＧ Ｍｉｎｇ－Ｄｉａｎ ＬÜ Ｆｕ－Ｂｉｎｇ（Ｆｌｏｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４０）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｓｉｎｅｎｓｅ， Ｃ． ｅｎｓｉｆｏｌｉｕｍ， Ｃ． ａｌｏｉｆｏｌｉｕｍ， Ｃ． ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍａｎｄ ｈｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ． Ｉｎ ５２ ｃｒｏｓｓｅｓ， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｏｖａｒｙ ｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔ ｔｏｓｅｅｄ ｃａｐｓｕｌｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｗａｓ ８６．５％， ｂｕｔ ｏｎｌｙ ３２．７％ ｏｆ ｃｒｏｓｓｅｓ， ｗｈｏｓｅ ｓｅｅｄ ｃａｐｓｕｌｅｓ ｄｅｖｅｌ－ｏｐｅｄ ａｆｔｅｒ ４ ｍｏｎｔｈｓ． Ｈｙｂｒｉｄ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ １９．２％ ｃｒｏｓｓｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｅｍｂｒｙｏ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｔｈｅｒｅ ａｒｅｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｓｉｎｅｎｓｅ×h ｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ａｎｄ ｈｙ－ｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ×C ． ｓｉｎｅｎｓｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓＣｙｍｂｉｄｉｕｍ， Ｈｙｂｒｉｄ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ， Ｃ． ｓｉｎｅｎｓｅ， Ｃ． ｅｎｓｉｆｏｌｉｕｍ， Ｃ． ａｌｏｉｆｏｌｉｕｍ，Ｃ． ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ， Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ大花蕙兰杂交育种， 是世界兰花育种工作的重点之一。
蕙兰的无菌播种及根状茎培养技术研究
蕙兰的无菌播种及根状茎培养技术研究[摘要]蕙兰是一种具有很高商业价值的兰科植物，传统上采用分株繁殖。
研究其果实的发育时间和预处理方式对种子无菌萌发的影响，发现授粉后120d，种子的萌发率最高(为2.7%)，而0.1mol·L-1NaOH溶液对提高种子的萌发率没有明显作用。
进而讨论了不同因素对蕙兰根状茎增殖的影响，结果表明：MS+NAA0.5mg/L+BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L或B5+NAA0.5mg/L+BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L的培养基最适于根状茎的增殖。
[关键词]蕙兰无菌播种根状茎组织培养一、前言近年来，墨兰、建兰的组织培养报道渐多,而关于蕙兰的报道则少见。
本文探讨了其果实成熟度和NaOH溶液预处理方式对蕙兰种子萌发的影响，并由种子诱导出了发育良好的根状茎。
进而研究了不同的培养基类型和NAA与BA的浓度配比对根状茎增殖的影响，提出了适合根状茎增殖的培养基配方，还繁殖出少量完整植株，为实现中国兰的大规模工厂化育苗提供科学依据和技术支持。
二、实验材料和方法（一）实验材料供试材料为经人工授粉后采收的盆栽蕙兰的蒴果。
（二）实验方法1．人工授粉和蒴果采收。
选取生长健壮、无病虫害的蕙兰植株作为母本。
要求苗数在10苗左右，花葶3枚以上。
按照程式君（1984）的方法，在母株开花之前事先收集另一蕙兰植株的花粉块放在滤纸上，卷成筒状，放在小瓶中，塞紧，置于干燥器内，放在4℃冰箱中保存。
在母本花葶上每朵小花开放的第二天，除去其自身的花粉块，授以预先收集的花粉，每一花葶上保留2～3个发育良好的蒴果。
将蒴果分为四组，分别于授粉后的第60、120、180、240d采收，供后续实验之需。
2．种子的无菌播种和原球茎的诱导。
将采收的未开裂蒴果置于流水下冲洗干净，在超净工作台上先用70%的酒精浸泡1min，再用0.1%升汞溶液浸泡15min，无菌水冲洗5次。
然后将消毒后的蒴果纵切为二，用镊子夹取着生于侧膜胎座上的种子，置于盛有无菌水的小烧杯中，使种子悬浮于无菌水上部，再用滴管将其移入培养基中，轻摇培养瓶，使种子均匀分布在培养基上。
大花蕙兰无菌播种与组培快繁技术研究
湖南林业科技 ２１ 年第３ 卷第３ ０２ ９ 期
酮究 报告
大 花蕙 兰无 菌播种 与组 培快 繁技术 研究
李茂娟 ， 谭柏 韬 ， 邓少 华 ，王华龙
（ 郴州市林业科学研究所 ， 湖南 郴 州 ４ ３０ ） ２ ００
摘
要： 对大花 蕙兰的无茵播种及组培 快繁技术进行 了相 关研 究 。结果表 明：大花 蕙兰无 茵播种 采用 ０ １ 升汞 溶 ．％
杂交兰无菌播种及根状茎培养技术研究
杂交兰无菌播种及根状茎培养技术研究作者：林榕燕陈艺荃林兵来源：《福建农业科技》2019年第05期摘要：以杂交兰品种台北小姐与小叶虎头兰杂交果荚、台北小姐自交果荚作为材料，比较了不同活性炭浓度对其种子萌发的影响，以及二者种子萌发形成的根状茎在同一种培养基中的增殖与分化情况。
结果表明：添加活性炭1.0 g·L-1的培养基较适宜台北小姐自交组合种子无菌萌发，而台北小姐与小叶虎头兰杂交组合种子无菌萌发较适宜的培养基则为不添加活性炭;在1/2 MS+6BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1培养基中，台北小姐自交组合根状茎的增殖效果较好，而台北小姐与小叶虎头兰杂交组合根状茎分化较好。
关键词：杂交兰; 无菌播种; 根状茎; 增殖; 分化Abstract： By taking the hybrid fruit pod of Taibeixiaojie and Cymbidium hookerianum a kind of cymbidium hybrid， and the self-pollinated fruit pod of Taipeixiaojie as the materials， the effects of different concentrations of activated carbon on the seed germination were compared. And the proliferation and differentiation of rhizomes formed by their seed germination in the same culture medium were also compared. The results showed that the culture medium with 1.0 g·L-1 activated carbon was suitable for the sterile germination of the seeds of self-pollinated combination of Taibeixiaojie， while the culture medium with no activated carbon was suitable for the sterile germination of the seeds of hybrid combination of Taibeixiaojie and Cymbidium hookerianum. Moreover， the culture medium with 1/2 MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+no activater carbon 1.0 g·L-1 had better effect on the rhizome proliferation of self-pollinated combination of Taibeixiaojie， while it had better effect on the rhizome differentiation of hybrid combination of Taibeixiaojie and Cymbidium hookerianum.Key words： Cymbidium hybrid; Sterile sowing; Rhizome; Proliferation; Differentiation雜交兰Cymbidium hybrid是由国兰与大花蕙兰杂交培育而成的兰花新品种，兼有国兰的清新花香和大花蕙兰的花大色艳、花期长等优点，具有较高的观赏和经济价值[1]。
兰属杂交种子无菌播种及再生体系的建立
兰属杂交种子无菌播种及再生体系的建立杂交兰无菌播种和再生体系是杂交育种得以实现的重要环节，对其研究十分必要。
本实验以兰属内杂交蒴果为材料，系统研究蒴果采收时期，种子预处理，基本培养基，植物生长调节剂，有机添加物等对杂交种子萌发的影响；以春兰与大花蕙兰两个品种‘梦境’和‘皇后’杂交所得后代的原球茎为材料，对其增殖分化及壮苗生根的影响因素进行系统研究，结果如下：1.杂交蒴果采收期以授粉6-8个月为宜，2%的NaOH溶液和0.5-5%的NaClO溶液预处理有利于杂交种子的萌发；杂交种子萌发KC为基本培养基，培养方式为静置培养的效果最好；KT对于种子的萌发总体效果不如6-BA，6-BA1.0-2.0mg/L对于种子萌发较好；活性炭对种子萌发的影响最大，其次是NAA和6-BA，椰汁对杂交种子萌发的影响最小，添加椰汁的效果反而不如不添加的效果，最佳组合为：NAA0.5mg/L+6-BA1.5mg/L+活性炭1.0g/L。
2.1/2MS培养基对两个杂交组合后代的原球茎增殖与分化效果最好。
2,4-D 和KT对原球茎分化作用不显著，6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L对增殖分化效果最佳；使用有机添加物对原球茎增殖以椰汁增殖效果最好，其次为香蕉泥、土豆汁；添加香蕉泥100g/L+椰汁50ml/L最利于原球茎的增殖与分化。
切割大小和方式以1.0cm不切割较适合原球茎增殖。
TDZ0.1mg/L较适合原球茎的分化。
原球茎分化最佳组合为：1/2MS+NAA0.5-2.0mg/L+TDZ0.15mg/L+土豆汁90g/L。
3. MS培养基最适合壮苗生根培养，其次是KC和1/2MS培养基。
壮苗生根加入0.2-0.5mg/LGA3，NAA1.0-2.0mg/L效果较好。
有机添加物以土豆汁60g/L+香蕉泥60g/L效果最好。
正交组合以KC+NAA1.5mg/L+GA30.1-0.5mg/L+香蕉泥90g/L对杂交兰生根效果较好。
中国兰育种技术研究进展
中国兰育种技术研究进展兰花泛指单子叶植物中的兰科（Orchidaceae）植物，全世界有700多个属2万多种[l]。
中国兰是指兰科兰属（Cymbidium）中的部分小花型地生兰，在日本、中国均有分布，但主产我国南方地区。
其花具有独特的香气，孔子称之为“王者香”，后来有“国香”、“香祖”之说，沿用至今。
现代意义上的中国兰已扩充为春兰（C.goeringii）、蕙兰（C.faberi）、建兰（C.ensifolium）、墨兰（C.sinense）、寒兰（C.kanran）、莲瓣兰（C.lianpan）和春剑（C.longibracteatum）7个种[2]。
主要分布于我国秦岭以南多省，夏季常气温较高，冬季分布区北缘有霜冻或短时的积雪。
其中，春兰和蕙兰主产于江浙及四川等地；建兰和墨兰多产于福建、广东地区；春剑主产于四川和云南；莲瓣兰几乎为云南主产。
1引种驯化目前，我国栽培的国兰品种绝大多数都是由野生种类引种驯化而来。
海南等地已开展了野生兰花的种质资源搜集和驯化栽培，东风兰（C.dayanum）、墨兰、建兰等多种兰花的驯化栽培已获成功。
湖南省在野生兰花资源调查、标本采集、引种驯化、品种选育等方面也做了大量工作[3]。
兰花引种驯化应重点选择观赏价值高的野生种及其变种，以及国外的优良栽培品种。
首先应了解原产地的环境条件，若其与引入地的条件相近，则可以引种；否则需要先进行驯化，然后才能引种。
2杂交育种中国兰的杂交育种工作起步较晚，在2000年以前开展的较少，近几年国内学者分别开展了春兰、蕙兰、墨兰以及建兰等和大花蕙兰的杂交育种工作，并取得了成效。
何嵩等[4]进行了春兰×墨兰的杂交；李芳等[5]进行了台兰（C.floribu-ndum）×蕙兰的杂交；张志胜等[6]开展了墨兰×大花蕙兰（C.hybridium）、建兰×蝴蝶兰（Phalaenopsiss pp.）的杂交；朱根发等[7]利用墨兰与大花蕙兰进行种间杂交，成功获得了5个组合的杂种原球茎和植株；同时，朱根发等[8]还进行了大花蕙兰、墨兰、建兰、纹瓣兰（C.aloifolium）、兔耳兰（nci-folium）等兰属植物的种间远缘杂交试验；郑立明等[9]以野生春兰为母本，大花蕙兰为父本进行杂交，获得800多个春兰×大花蕙兰杂种原球茎无性系；陈瑶瑶等[10]以大花蕙兰和墨兰杂交育成的品种韩国桃花为母本，与蕙兰进行种间远缘杂交；王丰妍等[11]进行了大花蕙兰品种绿宝石与春剑的杂交。
兰花无菌播种育苗是兰花保育工作的重要手段之一
国嚯角扣囡甬么，匕六忽龟ｉ．１；圣雒弓
他可供药用的兰科植物种类处境也基本如此。 为了搞好对我国濒危、特有和重要兰花的物种的保育工作，除加强其他各方面的保育工作外，要大
力提倡相关物种的无菌播种育苗和批量生产。鼓励有关的保育中心、科研机构和兰花企业积极的开展这 方面的工作，并与农民相结合，把从野外采挖变为有计划的繁殖、生产和销售，满足国内外市场对这些 兰花的需求。这样便可以逐步减少，最后杜绝对这些需保育物种资源的依靠和破坏，也增加兰花企业和 农民的收益。我国和世界其他国家在这方面是有非常成功的先例可以借鉴的。天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａ）是 中药材中用量大而重要的兰科植物，曾药源十分紧缺，价格甚高。然而在解决了通过种子繁殖和和生产 栽培技术后，大量的天麻药材供应市场，在满足药源的同时，在很大程度上也保护了野生天麻种群的生 存和恢复。另据了解，在云南和浙江等地已开始了铁皮石斛的无菌播种育苗和规模化生产性栽培，并已 有部分产品提供市场，虽尚未满足市场用量的需求，但已经在一定程度上抵制了对野生铁皮石斛的采挖， 对保护这一濒危物种起到了有益的作用。
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嚯角十园两么，匕六忽龟ｉＩｌ；圣邵弓国
种发育不完全胚的植物，在绝大多数情况下是附生、腐生、寄生或短命植物。在兰花的种子中常观察到 多胚现象，兰花种子几乎没有贮藏物质，且种子也未发现有贮藏营养物质的组织，兰花种子在萌发过程 中缺少营养物质，所以在自然条件下很难发芽，并且幼苗生长缓慢。
（二）人工授粉 兰科植物多数是异花授粉。在原产地大多有特定动物与昆虫为之传粉，但兰花离开产地因无特定的 昆虫，无法完成传粉授精作用，不能结实。即使有此类昆虫，但因所传花粉未必与人们的要求相同，故 仍需进行人工授粉。为了获得优良的杂交种兰花，人们进行了大量的杂交工作，培育出许多新品种，在 花的大小、形态、色泽、花期及生长势等方面都远远超过了野生物种。兰科植物在种尖和属尖杂交都较 易成功。 人工授粉时首先选好亲本。一般情况下开花初期花粉发芽力最强，开花后７日花粉块仍可应用。雌 花最好的授粉时间是在开花后３—４天。授粉时先将雌花（母本）的花粉块除去（去雄），再将采集的父 本花粉块用小镊子夹起轻轻地放在母本的柱头上，因为柱头有黏液，不必担心花粉块脱落，为防止已授 粉的花再被昆虫传粉，可以将母本花上的唇瓣除去，一般不必套纸袋。用铅笔写好标牌，挂在授粉后的 花枝上，做好记录、写清父母亲本、授粉日期等。经常关心授粉花朵的变化并防止损坏，注意在将近果 实成熟时及时将果实和标牌一起采收，立即播种，或干燥后密封放在冰箱中保存，在授粉父母亲本花期 不一致时，可以采集花粉块风干后密封放在干燥器中，温度一２１一．８０Ｃ花粉块可以保存１年以上。 （三）果实采收和无菌播种 早期进行兰花胚培养的工作者普遍认为，成熟的兰花种子其种皮较硬化，胚内部产生抑制发芽的物 质，对种胚的萌发有妨碍。１９５４年（Ｔｓｕｃｈｉｙａ Ｉｔａｒｕ）发表了用兰花未成熟（绿色）蒴果中的胚培养成功， 并萌发成苗，所以许多兰花工作者在兰花播种中常采用未成熟的绿色果实。 现在看来，当时有些兰花播种有困难并不一定是上述原因，可能是培养基配方不合理。现在由于培 养基的改进，有许多过去播种困难的种类已经得到解决。 这种方法值得提倡，其优点是可以简化种子的消毒手续。由于对胚提前进行培养，可以缩短杂交种 （新品种）的培育时间，由于缩短了果实在兰花植株上的生长时间，减少了兰花植株营养的消耗，还可避 免由于采种而导致生长瘦弱植株的死亡。 兰花种子应随采收，随播种。兰花种子在高温和高湿的环境中寿命极短。通常将种子在室内干燥１ ｎ３日后，装在试管中用棉塞塞紧，再将试管放入装有无水氯化钙的干燥器内置于１００Ｃ或更低温的环境 中，这样可在１年内保持种子良好的发芽率（第二年发芽率有所下降，第三年完全丧失发芽能力）。 兰花种子接种到培养基之前必须灭菌，可以用１０％次氯酸纳水溶液浸泡５—１０分钟，再用无菌水冲 洗，种子在消毒液中若不沉淀，可将种子及消毒液装入密封的小瓶中，强烈振动数分钟，使种子和灭菌 液密切接触，并排除种子表面的空气，以达到灭菌的目的。尚未开裂的兰花蒴果，可用１０％一１５％的次 氯酸钠液浸泡１０一１５分钟，或酒精中浸泡数分钟后再在火焰上烧烤灭菌。 种子接种在培养基上的过程，通常在超净工作台上进行，工作人员的手需经过消毒，各种器具也需 经过高压蒸汽灭菌，整个接种过程需遵从无菌操作的要求，以避免菌类的污染，使工作失败。 （四）接种瓶的管理和小苗出瓶盆栽 接种后的培养瓶可以放在培养室中或有散射光的地方，温度２０—２５０Ｃ。在胚明显长大以后，需给
兰花育种研究现状及进展
收稿日期:2007-02-01基金项目:海南省自然科学基金项目(30401)作者简介:郭丽霞(1980-),女,广西平果人,在读硕士,主要研究方向为细胞工程与种质创新。
*为通讯作者。
兰花育种研究现状及进展郭丽霞, 莫 饶*(华南热带农业大学农学院, 海南儋州 571737)摘要:兰花是珍贵的观赏花卉,开展兰花育种研究具有重要的意义。
文章主要就兰花资源概况、资源保护繁育以及杂交育种、组织培养、分子标记和基因工程在育种上的应用作了扼要综述,表明,种质资源是兰花育种的基础,需加以保护;种间及属间的远缘杂交仍是兰花育种的主要手段;组织培养、分子标记及基因工程技术可加快育种进程。
目前仍需加强野生兰花资源的收集、保存和创新利用工作,为兰花育种奠定良好的基础。
关键词:兰花;种质资源;育种;保护中图分类号:S 682.31 文献标识码:A 文章编号:1002—8161(2007)03-0303-07Current status and advances in orchids breeding researchGUO Li-x ia,M O Rao*(A g ricultur al Colleg e ,South China U niver sity of T r op ical A griculture ,D anz hou ,H ainan 571737,China )Abstract :T he or chid is a rar e or nam ent al flow er and it is o f impo rt ant significance to study the br eeding o f or -chid .In the paper ,the g ener al situatio n ,pro tectio n and breeding of o rchid r eso urces wer e summar ized as w ell as the application of cr ossbr eeding,t issue cult ur e,mo lecular mar ker and genetic engineer ing o n the or chid breeding.It po inted o ut that t he g ermplasm r esources of or chid ar e t he basis of breeding ,and need to be pr otected.T he dis-tant hybr idiza tio n o f inter -g ener a and int er -gener a is st ill the main way of breeding .Breeding pro cess could be ac-celer ated by using tissue cultur e ,molecule -m aker and g enetic eng ineering .A t present ,collect ion ,co nv ersation and inno vating utilization o f or chid resour ces sho uld be streng thened to pro vide the favo rable basis fo r o rchid breeding.Key words :or chid ;ger mplasm r esources ;br eeding ;co nser vat ion 广义的兰花是兰科植物(Orchidaceae )的总称。
蕙兰种子无菌萌发及植株再生
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关 键 词 ： 兰 ； 子 ； 菌 萌 发 ： 状 茎 蕙 种 无 根 中 图分 类 号 ： ８ ．１ Ｓ６２ ３ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０４ ５４ ２０ ）４ ２ １ ５ １０ —１２ （０８ ０ —０３ —０
一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法[发明专利]
![一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/08e5643e6d85ec3a87c24028915f804d2a168759.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610545758.2(22)申请日 2016.07.12(71)申请人 成都东山兰韵农业有限公司地址 610103 四川省成都市龙泉驿区同安镇上平村二组(72)发明人 陈泽彬 姚胜琼 (74)专利代理机构 成都元信知识产权代理有限公司 51234代理人 孙法胜(51)Int.Cl.A01H 4/00(2006.01)(54)发明名称一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法(57)摘要本发明涉及植物培养繁殖技术领域，具体涉及一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法，包括以下步骤：植株热处理、材料选取、材料消毒、原球茎诱导培养、增殖继代培养、壮苗培养和移栽，采用本方法能使培养后的蕙兰苗株发病率低，成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，苗株长势良好，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养蕙兰无毒苗提供了技术支持。
权利要求书1页 说明书5页CN 106106164 A 2016.11.16C N 106106164A1.一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)植株热处理：将无病虫害长势良好的蕙兰放入培养箱中进行培养，培养期间，培养箱内湿度为80～90％，培养箱内温度开始时为30℃，每隔一天上升1℃，直至38℃，培养时间为22～25d，光照时间为16h/d，光照强度为3000～5000lx；(2)材料选取：将上述热处理后的蕙兰从培养箱中取出，切取蕙兰的茎尖；(3)材料消毒：将上述切取的茎尖用清水冲洗干净，冲洗后剥去外层叶片，在超净工作台上用体积分数为70％的酒精浸泡20～30s，然后用质量分数为0.2％的氯化汞溶液分2～3次共消毒5～6min，每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分；(4)原球茎诱导培养：将上述消毒后的茎尖在解剖镜下剥离成长度为0.3～0.5mm的茎段，然后接种到诱导培养基中进行培养，所述诱导培养基为：B5培养基+0.3～0.7mg/L 6-BA +0.1～0.3mg/L IBA+0.2～0.3mg/L VC+0.05～0.15mg/L GA3，培养时间为22～25d，培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；培养时间结束后，再将培养材料整体移入新的诱导培养基中继续培养，培养时间为15～20d，培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；(5)增殖继代培养：将培养后的原球茎在无菌工作台上进行分割，然后在接入到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：B5培养基+0.8～1.5mg/L6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；(6)壮苗培养：增殖继代培养后，选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：B5培养基+2～4mg/L NAA，培养时间为15～20d，培养温度24～26℃，光照时间为13h/d，光照强度为1800～21000lx；培养时间结束后，再向壮苗培养基中加入0.3％活性炭，培养温度27～29℃，光照时间为15h/d，光照强度为2500～3000lx；(7)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。
大花蕙兰杂交育种研究
试点论坛shi dian lun tan186大花蕙兰杂交育种研究◎陈尚取摘要：分析大花蕙兰的花粉生活力，研究大花蕙兰杂交亲和性，同时对杂种幼胚进行离体培养，结果显示，适宜花粉萌发培养基为30%蔗糖、0.15%氯化钙、0.03%硼酸、50mg/LGA3，0.03%甘氨酸、0.3%琼脂。
大花蕙兰品种间杂交成功率低，座果组合占据全组合的20%。
关键词：大花蕙兰；杂交育种；花粉活力大花蕙兰原产于缅甸、印度和泰国，适宜蕙兰花原种杂交的品种，花色艳丽，花期长，属于栽培普及的兰花之一。
当代大花蕙兰品种属于多代杂交选育的优良品种。
相比于原种，大花蕙兰花瓣宽、花朵优美、花茎挺拔竖直，市场潜力非常大。
然而大花蕙兰在自然状态下的繁殖能力低，种子萌发率约为5%，且分株繁殖周期长，效率低下，无法满足规模化生产需求。
一、大花蕙兰花粉活性研究试验材料。
选择大花蕙兰品种包括粉梦露、皇后、华尔兹、南希、碧玉等5个品种，采切时，花枝上有少量花朵，多为大蕾、中蕾和小蕾期花朵。
将花朵插入到装有蔗糖溶液（10%）的三角瓶内，待至自然开花。
方法。
第一，花粉萌发培养基成分。
花粉培养与培养基渗透压具备关联性，蔗糖浓度会决定培养基渗透压。
培养基成分包含30%蔗糖、0.15%氯化钙、0.03%硼酸、50mg/LGA3，0.03%甘氨酸、0.3%琼脂。
硼酸和蔗糖均为化学纯。
第二，花粉处理与培养。
由于大花蕙兰花粉多为块状，培养前需要压碎花粉。
在人工气候箱内培养花粉，温度为25℃，湿度大于95%。
第三，培养方法。
配制溶液，放置在电炉上进行加热沸腾，倒入载玻片上，待至冷却之后制作平板培养基。
使用滴管采取花粉，散布在培养基上。
之后将载玻片放在培养皿内。
使培养皿内滤纸湿润，确保培养皿内部湿度，封盖之后放置在人工培养箱，设定湿度和温度。
结果与分析。
第一，在100倍体视镜下，观察不同品种花粉的载玻片，在载玻片上选取三个花粉分布视野。
花粉粒萌发标准为花粉管长度为花粉粒直径的50%。
大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术研究
大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术研究随着社会的发展，人们对植物的需求也越来越多。
而对于植物种间的杂交繁殖技术的研究，一直以来都是植物学领域的热点之一、本文将对大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术进行研究和探究。
大花蕙兰（Dendrobium bigibbum）和墨兰（Dendrobium formosum）是兰科植物中非常常见的两个种类，它们之间的杂交繁殖能够产生具备二者优点的新品种。
但是，在进行种间杂交时，常常会出现一些问题，比如种子不育、无菌播种困难等。
在进行大花蕙兰与墨兰种间杂交时，首先要解决的问题是种子的发育和无菌播种。
种子的发育需要良好的花粉柱和花粉的结合，需要进行人工授粉。
在授粉之后，要及时将结的子房果实进行采摘，进行种子的发育。
种子发育过程中需要对其进行无菌处理，以确保其生长和发育的顺利进行。
种子的无菌处理可以采用消毒法，具体步骤如下：首先，将采摘下来的果实进行清洗，将外部的杂质去除干净。
然后，将果实进行消毒处理，常用的消毒液可以是过氧化氢、希夫酮等。
消毒液的浓度和处理时间需要根据实际情况进行调整。
处理完毕后，将种子取出，进行无菌播种。
无菌播种的前提是提供无菌的播种培养基。
播种培养基的配方需要根据实际需求进行调整。
一般来说，基本的配方包括无菌水、蔗糖、植物生长素等。
将种子放置在无菌播种培养基上，进行培养。
在培养过程中，需要注意保持培养基湿润和温度适宜，以提高种子的发芽率和生长率。
种子的生长和发育是一个漫长的过程，需要保证其充分的光照和营养供应。
在种子成熟之后，可以进行试管苗的移栽，将其移植到适宜的培养基中，进行进一步的生长和发育。
在移栽过程中，需要注意保护种子和苗的完整性，减少伤害和感染的机会。
通过以上的研究和分析可以看出，大花蕙兰与墨兰种间杂交种子无菌播种繁殖技术是一项非常复杂和精细的工作。
种子的发育和无菌播种是其中的关键环节。
通过合理的措施和方法，可以提高种子的发芽率和生长率，从而实现杂交品种的繁殖和推广。
大花蕙兰无菌播种技术试验
第２ 卷 ６
第２ 期
浙
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林 业
科
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Ｖ０ ＿ ６ Ｎｏ ２ ｌ２ ． Ｍ ａ．２ ００ ６ ｒ ，
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文章缡号 ：１０ ，７６（０６） ２０３． ０１３７ ２０ ０．００ ４ ０
大花蕙兰无菌播种技术试验
姚丽娟 ，陈义增，徐晓薇 ，林绍生，陈中林 ，曾爱平
（ 浙江省亚热带作物研究所，浙江 温州 ３５０ ２０５）
摘要 ： 对大花蕙兰进行无菌播种技术试验，结果表明 ， 其种子萌发的适宜培养基为 Ｉ ＭＳ ６ Ａ ． ｍ ・ ＋ ／ ＋ － ０ ｇ Ｌ ２ Ｂ １ Ｎ Ａ ．ｍ Ｌ Ａ ０ ｇ・ ＋１％ ２ Ｏ 椰乳＋Ａ Ｌ ｃ ｇ・ ～；椰乳可明显提高种子发芽率并促进原球茎生长 ， ｌ 激素浓度的高低对原 球茎和小苗的生长有一定影响； 果龄 ６ ９ — 个月的蒴果播种萌发率较为理想，萌发后原球茎移植到 １ ＭＳ ６Ｂ １ ／ ＋ －Ａ ２ ｍ Ｌ ｇ・ ＋ｌ％ Ｏ 椰乳 ＋ ｃ ． Ｌ １ Ａ ５ －培养基中月增殖率可达 ３ ９ Ｏ ｇ・ ． 倍， ８ 原球茎在 ＭＳ 培养基中更易分化成苗 ， 且小苗 生长势更佳。６ Ａ Ａ － 、Ｎ Ａ有利于原球茎增殖倍数的提高，继代周期以４ 周为宜。 Ｂ —６ 关键词：大花蕙兰；无菌播种；原球茎；增殖分化
我们对影响无菌培养的主要因素如培养基类别、激素浓度、蒴果果龄 、继代周期等进行了较为系统的研究 ，旨 在为其大规模的工厂化生产和新品种选育提供依据。
１ 材料 与方法
１１ 材 料 ．
选用浙江省亚热带作物研究所温室大棚栽培的大花慧兰杂交种 （ 引自 韩国 ），采用株间异花授粉形成的蒴
国兰育种研究进展
国兰育种研究进展牛田;张林;王厚新;李承秀;于永畅;孙芳;王长宪【摘要】中国兰花是观赏植物,同时还有很高的文化价值和经济价值.为此,从杂交育种、组织培养、诱变育种、太空育种、基因工程技术等方面综合阐述了国兰育种的研究进展.%Chinese orchid as an ornamental plant was endowed with highly cultural and economic value.In this article,the research progress of Chinese orchid breeding was comprehensively reviewed in cross-breeding,tissue culture,mutation breeding,space breeding and genetic engineer technique,etc.【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2013(045)007【总页数】4页(P129-132)【关键词】国兰;育种技术;研究进展【作者】牛田;张林;王厚新;李承秀;于永畅;孙芳;王长宪【作者单位】山东农业大学林学院,山东泰安271018;泰山林业科学研究院,山东泰安271000;泰山林业科学研究院,山东泰安271000;泰山林业科学研究院,山东泰安271000;山东农业大学林学院,山东泰安271018;山东农业大学林学院,山东泰安271018;泰山林业科学研究院,山东泰安271000【正文语种】中文【中图分类】S682.31国兰，属于兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium)植物，是狭义的兰花，多年生草本花卉。
国兰是我国十大传统名花之一，主要指春兰(C.goeringii)、蕙兰(C.faberi)、建兰(C.ensifolium)、墨兰(C.sinense)和寒兰(C.kanran)五大类。
其味清幽，花色芬芳，具有很高的观赏价值。
137-4：兰花杂交籽播苗的角色（四）
137-4：兰花杂交籽播苗的角色（四）（四）六、短平快前面第五章节已经讲到了种内和种间杂交育种容易，并且所获得种子数量大。
相比较组培而言这是一项见效快，技术含量低且成本低的一项举措。
特别是在蕙兰上，只要把所获得的种子放在无菌工作室内培养基中播种，后面繁育复壮程序和其他兰花籽播苗不存在多大区别，而在无性组培上蕙兰每个铭品对培养基要求亦有变化，并且不易成功。
从事科技育种的单位和个人，由于各自定位不一样所行其事各异。
一般不做品种杂交选育的只会想着量做得越多越好，他们则不管这个产业的未来是什么样子？他们走的是短平快的道路，例如随着市场行情变化预测而实施的5年计划或十年计划等，因此他们是会把所杂交出来的子孙万代经过筛选后全部投放到市场去。
兰花杂交育种前景很广阔，这里面要做的太多太多，其实想要在这个方面做精做好也不容易，必须要有长远的发展规划，并且坚守行业准则者才能继续走下去，着重品牌影响和诚信守德者才会有辉煌的明天。
一个以此为业的企业想要在此行业上有所建树，那必定要走品牌和诚信发展之路，这不是一代人就能够做大做强的，往往要几代人才能完成一个产业的壮大。
走短平快之路是在钻国内目前没有执行育种法的空子，他们的行为严重干扰了兰花行业的健康发展，在扰乱之下损害了大众利益，这是目前杂交种与原生种市场形同水火的主要原因。
G先生说：“其实科技种和原生种是完全可以相容相生下去，这是两个大市场。
杂交育种严格执行行规选育优良园艺品种走消费花市场，规模化培育的产品价格便宜供应，以满足普通兰花爱好者的嗅香赏叶的需求。
如是亦可以循序渐进引导他们成为兰花发烧友，于是对兰文化产生浓厚的兴趣，在此之下才会有对‘瓣型学说’深入研究和产生对高端的原生种追求。
换句话说直白一点就是，科技杂交育种所出的园艺品种物美价廉是为入门级的兰友练习栽培的好选择。
种死了，也不可惜，种好了可以激发艺兰热情使之好之。
”贵州春兰“天彭牡丹”2015年原生种开品。
目前市场上很多以其为父母本杂交的籽播苗开品不稳定，多现行花或二舌三舌，严格地来说其籽播后代已经不能再称作父母名称了。
蕙兰的繁殖与养殖方法分享
蕙兰的繁殖与养殖方法分享看到朋友家的蕙兰长得很美，自己也想要养殖，可以教朋友给你一些花种子或者分株都行这样就可以自己繁殖新的花苗了。
下面小编分享给大家的蕙兰的繁殖与养殖方法，希望对大家有帮助。
蕙兰的繁殖方法蕙兰的播种繁殖播种繁殖的方法主要在蕙兰原生种大量进行繁殖以及杂交育种时应用。
蕙兰的种子十分的细小，在无菌的条件下，种子发芽率在90%以上。
蕙兰的分株繁殖进行分株繁殖的植株一般要选择种植2~3年的壮苗，进行分株的时间一般在每年的3 ~4月份或9 ~10月份适宜。
分株需要的基质应该疏松肥沃，透气沥水，没有虫病和污染、切忌发热、干燥和渍水。
土壤的PH值在5.5~6.5之间为宜。
使用前需要进行日晒或者用药物进行灭菌处理。
分株步骤脱盆：将用于分株繁殖的盆栽蕙兰连盆倒斜，拍打摇晃盆体，使植株和基质逐渐的一起脱出，同时需要注意对叶片和根进行保护。
起苗：将用于分株繁殖的地栽蕙兰，从地里用工具起出，不要让根系和芽点受到伤害。
分割：在假鳞茎的基部出找到兰株间的分割点，拿一把经过消毒的剪刀把它剪开。
分株后的蕙兰，应至少保证有两株。
修剪：把空根、断根、腐根、枯叶和假鳞茎上的干枯叶鞘通通剪掉，同时剪掉无叶、干瘪、腐烂的假鳞茎。
消毒：要在修剪后的伤口处涂上硫磺粉或木炭粉进行消毒，并适当干燥。
蕙兰的养殖方法料透气蕙兰要想养好根，它的植料是重点，现在养兰大多走得是颗粒植料的路子，透气疏水的问题基本上都能够得到很好的解决，但是对于蕙兰来说，则更要强调回蓝的植料要比其他的兰类更粗一些，请按下列步骤来配方：①仙土60%，植金石20%，火烧土(亦可用麦饭石，对艺草有保，升艺的作用)10%，蛇木(柳树皮)10%;②兰之友植料80%，仙土20%。
含肥分蕙兰假鳞茎不明显，生长基本上靠根部的吸收植料中的养分及其根粗长，草高大等特性论，种植蕙兰宜比它种兰更加需要肥分。
蕙兰的叶子坚挺厚硬，施肥的过程中应当侧重磷钾肥的施用。
少翻盆蕙兰中下后最好不要翻盆。
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收稿日期:1997203207蕙兰×台兰种间杂交种子无菌播种育苗技术研究李 方1 陈昆松2 陈汉韬2 夏宜平1(1浙江农业大学园艺系,杭州310029;2浙江新昌大佛寺教师休养所,浙江省新昌312513)摘 要 以蕙兰×台兰种间杂交的种子为材料,研究适合于种子无菌播种、原球茎分化芽、生根壮苗的不同培养基Λ结果表明:在5种用于无菌播种的培养基中,添加I AA 10m g L 的C 1培养基,种子萌动率达3%,原球茎由培养120天的10.13个 瓶,平均直径1.63mm 到220天增至19.86个 瓶,平均直径4.30mm ;BA 1～2m g L 有利于原球茎分化芽,分化率达100%以上;NAA 2m g L 使生根壮苗率达100%Λ添加活性炭1.5～3g L 对种子成苗过程效果较好,在芽分化与生根壮苗培养中,减少M S 大量元素的使用量有利于生长Λ兰花试管苗移栽成活率为80%,已获得4～5年生的杂种苗Λ关键词 蕙兰;台兰;种间杂交;杂交种子;无菌播种;杂种苗中图分类 S 603.6;S 682.31L i F ang 1;Chen K unsong 1;Chen H antao 2;X ia Y ip ing 1(1D ep art m ent of H orticu ltu re ,Z hej iangA g ricu ltu ral U niversity ,H ang z hou 310029,Ch ina ;2T eacher ’s S anatorium of Z hej iang X inchang D af o T e m p le ,X inchang 312513,Ch ina )A septic seedi ng of i n terspec if ic hybr idization seed fro m “Huilan ”(Cym bid ium f aberi )and “Ta ilan ”(C .f loribundum var .p um ilum )orch ids .Journal of Zhejiang A gricultural U niversity ,1998,24(1):69～73Abstract V ari ous m edia w ere tested of their suitability fo r asep tic seeding ,bud differentiati on of p ro toco r m and roo t inducti on culture w ith interspecific hybridizati on seed from “H uilan ”and “T ailan ”o rch ids as m aterial .T he results show ed that among five k inds of m edia ,C 1(10m g L I AA )fo r asep tic seeding w as better than the o thers ,the rate of p ro toco r m fo r m ing from seed being as h igh as 3%,the num ber of p ro toco r m increasing from 10.13per p late at 120days to 19.86per p late at 220days after culture ,and at the sam e ti m e ,the average diam eter of p ro toco r m s increasedfrom 1.63mm to 4.3mm ;w h ile 1～2m g L BA w as suitable fo r bud differentiati on of p ro toco r mw ith the bud differentiati on rate being over 100%;2m g L NAA w as suitable fo r roo t inducti on ,roo t inducti on rate being over 100%.Favo rable effect of active carbon (1.5～3g L )on hybrid seedling culture w as observed .D ecrease in usage of m acro elem ents favo rs bud differentiati on ,roo t inducti on ,and grow th of seedlings as w ell.T he transp lanting survival rate of these seedlings w as 80%.T hese seedlings have grow n in the labo rato ry fo r mo re than five years .Key words Cym bid ium f aberi ;C .f loribund um var .p um ilum ;interspecific hybridizati on ;hy 2brid seed ;asep tic seeding ;hybrid seedling浙江农业大学学报 24(1):69～73,1998 Journal of Zhejiang A gricultural U niversity 中国兰是兰科兰属中的地生兰,为我国的传统名花Λ杂交育种是培育新品种的有效手段之一,但地生兰的杂交种子很难萌发[1],利用无菌播种技术可提高洋兰种子的萌发率,并培养成苗[2],但有关中国兰的杂种苗培育研究鲜见报道Λ我们以中国兰的蕙兰×台兰杂交种子为试材,研究其无菌播种、原球茎分化芽、生根壮苗培养等杂种苗培育技术,为中国兰的杂交育种和杂种优势利用提供实践基础Λ1 材料与方法1.1 实验材料以蕙兰(Cym bid ium f aberi)×台兰(C.f loribund um var.p um ilum)杂交种子为试材Λ蕙兰气味芳香,台兰叶型秀气花色美丽,意在利用杂种优势获得色香具佳的子代Λ授粉于1990年4～5月花期进行,10月上中旬,果实由深绿色转变成淡黄绿色时,挑选尚未爆裂、长约5.1c m、重5g、饱满的蒴果,于10月29日进行无菌播种试验Λ1.2 实验方法1.2.1 果实消毒和无菌播种 在超净台上,将经流水洗净后的果实放入小烧杯中,倒入75%酒精浸泡10s,无菌水冲洗3次,再经10%次氯酸钠溶液浸泡10m in,无菌水冲洗5次,将消毒后的果实纵剖为两半,用镊子挖取着生于侧膜胎座上的未成熟种子,置入盛有无菌水的小烧杯,使种子悬浮于无菌水中,后用滴管均匀移入准备好的培养基上,轻摇三角瓶,使种子均匀分布在培养基上Λ1.2.2 培养基、培养条件与调查 无菌播种培养基(m g L)C1:M S+I AA10+A C1500C2:M S+KT0.05+A C1500C3:M S+I AA10+C M100C4:M S+I AA10+YE500C5:M S+I AA10+L H500原球茎分化芽的培养基(m g L):1 2M S+BA1+NAA0.05生根壮苗培养基(m g L):M S(1 10N H4NO3,1 3CaC l2)+NAA2 +A C3000以上培养基中蔗糖为30g L、琼脂7.5g L、pH5.8Λ播种后的种子置于(20±5)℃,无光照的条件下培养三个月后,加光照1000～2000 lx继续培养Λ定期调查原球茎数、直径大小、萌芽数、芽高、根数、根长等性状,以确定适合各阶段的最佳培养基成份Λ试验采用完全随机设计Λ2 结果与分析2.1 不同培养基对无菌发芽的影响杂交种子在C1,C2,C3,C4,C55种不同培养基上无菌播种,经120d、220d培养后,在C1培养基上的种子生长情况最好,不仅形成原球茎数量最多,且原球茎的平均直径最大,培养120d后的原球茎数量和直径分别为10.13个 瓶和1.63mm,培养220d后的则增至19.86个 瓶和4.30mm;C4和C5两种培养基不适于无菌播种种子的生长(图1)Λ比较5种培养基的组成成份可知,生长素(I AA)与活性炭(A C)对种子生长有利,其效果优于细胞分裂素(KT);天然复合物椰乳(C M)对前期(120d)种子生长有促进作用,但后期(220d)的效果下降,其原因有待进一步研究Λ杂交种子培养过程中的生长发育进程不同步,出现几个发育阶段并存的现象Λ在培养120d时,发育状态呈现为:有的种皮内无胚,有的胚不生长;正在生长的种子最初是胚逐渐膨大呈小圆锥状(图版之1),胚继续发育突破种皮呈球状,顶端逐渐突出形成叶原07浙江农业大学学报 24卷 图1 不同培养基对原球茎及其大小的影响F ig.1 Effects of vari ous m edia on num ber andsize of p ro toco r m s 基,即原球茎(p ro toco r m)(图版之2),dia.0.7mm以上的颗粒,在显微镜下,可看出不单是由胚发育成的原球茎的继续增大,而且是孕育更多类似原球茎的类原球茎体(p ro2 toco r m2like body)(图版之3),酷似胚发育产生的原球茎,是建立兰花快速无性繁殖体系的种源,在dia.1mm以上的颗粒中,可以看到桑果状的圆球突起,原球茎的发育更成熟(图版之4),部分原球茎上有许多丝状突起物,可能与吸收水份和养料有关(图版之5)Λ 在培养220d时在C1和C2培养基上,有从原球茎上萌发形成小苗,但萌芽率仅分别为6.29%和6.85%(表1)Λ图版之6与7可见原球茎形成芽,芽生根产生的小苗,同时也可以在同一三角瓶中看到种子、直径大小不同的原球茎及小苗,发育程度差异极大Λ表1 培养220天时不同培养基中原球茎萌芽及生根情况T able1 T he status of budding and roo ting of p ro toco r m s on vari ous m edia after p ri m ary culture fo r220days 培养基调查瓶数原球茎数萌芽数及%最高芽高ςθ芽发根数及%最长根长ςθ(m g l)(瓶)(个)(个)(c m)(条)(c m)C1:M S+I AA10+A C1500815910 6.29%1.053 30%0.6C2:M S+KT0.05+A C15009735 6.85%1.113 60%0.7C3:M S+I AA10+CM100569C4:M S+I AA10+YE500626C5:M S+I AA10+L H5004222.2 原球茎的诱导、增殖及芽分化 把培养120d后所获得的原球茎,进行原球茎增殖及芽分化的继代培养,经80d培养后调查表明,以BA为主的芽分化培养基对原球茎数量的增加效果不明显,其增殖率在10%左右,但直径增大明显,在光照下原球茎从乳白色变成绿色,个体发育日趋成熟,体积变大,发育良好的叶原基,有利于提高芽的分化率,原球茎直径大小与芽分化率成正相关,原球茎可分化出丛生状芽(图版之8),来自C1培养基上的原球茎芽分化率最高,达到189%Λ来自C1与C3培养基上的原球茎还有少数生根成苗(表2)Λ2.3 生根及壮苗培养当分化的芽长至2～3c m时,转入以NAA为主添加活性炭的生根壮苗培养基中,根芽成比例正常生长(图版之9),当苗高7～8c m,根数3～4条,叶片4片以上时,根苗茁壮,即可移栽Λ优质试管苗可提高移栽成活率及移栽成活后的生长量,有利于提前开花Λ2.4 试管苗的移栽及生长情况兰花生长缓慢,因此,试管苗的移栽养护技术难度较大Λ除培养壮苗外,应注意基质、光照、温度、水份、营养等因素与兰花生物学特性的协调统一Λ具体操作时,开瓶口炼苗1～2d,在有孔塑料筐的底层铺上一些碎木17 1期 李 方等 蕙兰×台兰种间杂交种子无菌播种育苗技术研究27浙江农业大学学报 24卷 图版说明Explanation of plates1—胚渐渐膨大呈小圆锥状(×160); 2—胚突破种皮呈球状,顶端突出为叶原基,称原球茎(×160);3—原球茎表面孕育更多的类原球茎体PLB(×62.5); 4—桑果形状的圆球突起PLB发育更成熟(×37.5);5—部分PLB上有许多丝状突起物(×37.5); 6—个别原球茎萌发芽; 7—个别芽发根形成小苗;8—大量的PLB分化出芽; 9—生根壮苗培养产生的杂种兰苗表2 培养120天后转入继代培养基中原球茎的增殖及芽分化①T able2 T he status of p ro liferati on and bud differentiati on of p ro toco r m son subculture m edia after p ri m ary culture fo r120days原球茎原球茎最大直径ςθ(mm)芽分化数及%最高芽高ςθ芽发根数及%最长根长ςθ接入数(个)增殖数(个)及%接入时调查时(个)(c m)(个)(c m) C1:81→91 12.34%1.636.57172 189%1.141 0.58%0.7 C2:35→39 11.43%1.134.8349 126%1.25C3:49→52 6.12%0.93.6257 111%0.72 3.5%0.5 ①继代80天的调查数据炭块,将洗净根部琼脂的小苗密植排列于筐内,四周填以水苔和木炭土的混合材料,先放置在高湿弱光条件缓苗一周,以后放在15℃～25℃,空气相对湿度80%左右,光线稍强的条件下养护,定期喷施1 1000的营养液和抗菌剂,控制浇水量为栽种的秘诀Λ本试验的移栽成活率达80%,获移栽成活小苗410株左右Λ,目前生长4～5年的杂种兰苗380株左右,生长良好,长势较旺,无疫病,叶形似蕙兰,叶质似台兰,从其叶数看,可望在1～2年内开花Λ3 讨 论 洋兰的人工杂交育种已有几十年时间,并培养了大量的新品种[3、4],但中国兰的杂交育种研究尚无成功的例子,这可能与中国兰杂交种子难以萌发和成苗有关Λ中国兰杂交种子难萌发的原因主要有:①种皮不透水(或不透气);②种子本身含有发芽抑制物质[5];③胚未能完全成熟等Λ有研究表明兰花种子抑制物质的主要成份是脱落酸(ABA),种子越成熟,ABA积累浓度越高,越难发芽Λ针对上述原因,本试验采用八成熟,尚未开裂的蒴果为材料,在无菌播种培养基中加入了相应的促进发芽组份,经筛选发现,含有I AA和活性炭的培养基中的种子生长情况最好Λ兰花种子生长可能受多种植物激素平衡的调控,ABA对种子生长起抑制作用,而生长促进物质I AA有利于种子的生长发育Λ本试验在兰花杂交种子无菌播种成功的基础上,进一步诱导芽、根的分化,并培养成苗Λ这为中国兰的人工杂交育种提供了一条可喜的途径Λ参考文献1 谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术.北京:中国农业出版社,1991.274～2782 裘文达.园艺植物组织培养.上海:上海科学技术出版社,1986.119～1213 吴应祥.兰花.北京:中国农业出版社,1980.95～97 4 T ucker R.Cym bidium hybrid from N ew Zealand.A m erican O rch id S ocietyB u lletin,1994,63(11):1258～12635 杨应华,吴小美.兰花种子萌发研究.热带作物科技,1994(3):32～34(责任编辑 杜玲玲) 37 1期 李 方等 蕙兰×台兰种间杂交种子无菌播种育苗技术研究。