虫药美洲大蠊水溶性成分及其促血管生成活性

虫药美洲大蠊水溶性成分及其促血管生成活性
王心龙;向斌;李亚美;耿福能;晏永明;程永现
【摘要】采用色谱手段从美洲大蠊中分离得到22个化合物,利用波谱解析鉴定了它们的结构,分别命名为甘油(1)、邻羟基苯甲酸(2)、苯丙氨酸(3)、色氨酸(4)、尿嘧啶(5)、腺嘌呤(6)、环(脯氨酸-苏氨酸)(7)、环(脯氨酸-丙氨酸)(8)、环(丙氨酸-缬氨酸)(9)、环(甘氨酸-异亮氨酸)(10)、环(甘氨酸-亮氨酸)(11)、腺嘌呤核苷(12)、次黄嘌呤核苷(13)、环(亮氨酸-丝氨酸)(14)、环(丝氨酸-苯丙氨酸)(15)、环(天冬酰胺-苯丙氨酸)(16)、环(酪氨酸-甘氨酸)(17)、环(酪氨酸-丙氨酸)(18)、环(酪氨酸-丝氨酸)(19)、环(酪氨酸-苏氨酸)(20)、环(酪氨酸-天冬氨酸)(21)和Cordyrrole A (22).其中,化合物7～n、14～22为首次从美洲大蠊中分离得到,而化合物20和21为新的天然产物.此外,对化合物抗一氧化氮生成作用和促血管生成活性进行了测试.%Twenty-twocompoundswere isolatedfrom Periplaneta americana.Their structures were identified as glycerol (1),salicylic acid (2),phenylalanine (3),tryptophan (4),uracil (5),adenine (6),cyclo (Pro-Thr) (7),cyclo (ProAla) (8),cyclo (Ala-Val) (9),cyclo (Gly-Ile) (10),cyclo (Gly-Leu) (11),inosine (12),adenosine (13),cyclo (Leu-Ser) (14),cyclo(Phe-Ser) (15),(3S,6S)-3-phenylmethyl-6-amidocarboxymethyl-piperazine-2,5-dione,cis-cyclo (Asn-Phe) (16),cyclo (Tyr-Gly) (17),cyclo (Tyr-Ala) (18),cyclo (Tyr-Ser) (19),cyclo (Tyr-Thr) (20),cyclo (Tyr-Asp) (21) andcordyrrole A (22),respectively,by spectroscopic pounds 20 and 21 are new naturally occurring substances.In addition,compounds 7-11 and 14-22 were isolated from the title insect species for the first time.In addition,biological evaluation
towards nitric oxide (NO) production and angiogenesis activity was conducted.
【期刊名称】《天然产物研究与开发》
【年(卷),期】2017(029)012
【总页数】6页(P2004-2009)
【关键词】美洲大蠊;环二肽;一氧化氮生成;血管生成活性
【作者】王心龙;向斌;李亚美;耿福能;晏永明;程永现
【作者单位】中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650201;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650201;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650201;药用美洲大蠊四川省重点实验室,成都610000;深圳大学医学部药学院,深圳518060;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650201;深圳大学医学部药学院,深圳518060
【正文语种】中文
【中图分类】R93
美洲大蠊(Periplaneta americana)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，俗称“蟑螂”，是世界上生命力最强、最古老，至今繁衍最成功的昆虫类群之一。

美洲大蠊是传统的中药材，入药始载于《神农本草经》，被列为中品，谓“味咸、寒”。

现代研究表明其具有抗癌、抗菌、抗炎、促进组织修复等药理作用[1]。

治血淤坚、寒热、破积聚，喉咽痹、内寒无子；用于癥瘕积聚、小儿疽积、脚气肿、
疗疮肿毒、蚊虫所伤[2]。

已有研究表明，美洲大蠊中的化学成分主要分为两大类，第一类为信息素，是大蠊向体外释放的具有挥发性的信息素成分，主要包括性信息素和聚集信息素。

第二类为氨基酸和各种昆虫神经肽[3]。

我们对美洲大蠊的水溶
性化学成分进行了研究，从中分离并鉴定了22个化合物，其中化合物20和21
系新的天然产物，化合物7～11和14～22是首次从美洲大蠊中分离得到；此外，我们对其中的大部分化合物进行了抗一氧化氮生成活性和血管生成活性测试。

该研究进一步丰富了美洲大蠊的化学成分，为由美洲大蠊组成的康复新液提供了化学物质基础。

Bruker AvanceⅢ 400 MHz、500 MHz和Bruker Avance 600 MHz核磁共振仪(TMS为内标，δ为ppm，J为Hz)；薄层色谱硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；
RP-18(40～63 μm，日本Daiso)；MCI gel CHP 20P(75～150 μm，日本三菱公司产品)；Sephadex LH-20(25～100 μm，Pharmacia公司)。

Agilent 1200型HPLC和北京创新通恒LC3000型HPLC，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm× 9.4 mm,i.d.5 μm)。

美洲大蠊提取物于2015年9月由四川好医生攀西药业有限责任公司提供，美洲大蠊系该公司养殖。

取美洲大蠊干燥虫体25 kg，粉碎后用热水回流提取(3×2 h)，提取液减压回收溶
剂得总提物(约2 kg)。

总提物行MCI gel CHP 20P 柱(甲醇-水，0%～100%)梯度洗脱得11个组分(F1～F11)。

F2(23 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤得2
个组分(F2.1～F2.2)。

其中F2.2(15 g)经RP-18柱(甲醇-水，0%～100%)，再行
制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，8%)得化合物3(3.0 mg)。

F3(34 g)行MCI gel CHP 20P 柱(甲醇-水，0%～100%)得4个组分(F3.1～F3.4)。

其中F3.1(3 g)
经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，10%)得化合物5(10.7 mg)、6(1.1 mg)和7(12.8 mg)。

F4(8 g)经RP-18柱(甲醇
-水，0%～100%)得6个组分(F4.1～F4.6)。

其中F4.2(3.2 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，12%)得化合物
8(30.0 mg)、14(5.0 mg)、17(20.0 mg)、19(2.0 mg)、20(5.0 mg)和21(3.5 mg)。

F5(25 g)经MCI gel CHP 20P 柱(甲醇-水，0%～100%)得4个组分
(F5.1～F5.4)。

其中F5.2(17 g)经RP-18柱(甲醇-水，0%～100%)得10个组分(F5.2.1～F5.2.10)。

F5.2.3(3.8g)再行制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，10%)得到化合物1(79.1 mg)、4(4.7 mg)、12(1.2 mg)、13(2.8 mg)和18(4.7 mg)。

F6(20 g)行MCI gel CHP 20P 柱(甲醇-水，0%～100%)得10个组分(F6.1～
F6.10)。

其中F6.3(1.3 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备薄层色谱(氯仿-甲醇-氨水，4∶1∶1%)和半制备HPLC(甲醇-水，8%)得化合物9(1.8 mg)。

F6.4(1.8 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备薄层色谱(氯仿-甲醇-氨水，4∶1∶1%)和半制备HPLC(甲醇-水，10%)得化合物10(5.6 mg)和11(28.5 mg)。

F6.6(3.1 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备HPLC 和半制备HPLC(甲醇-水，10%)得化合物2(170.0 mg)。

F6.7(2.8 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，15%)得化合物15(3.2 mg)和16(2.6 mg)。

F7(18 g)经RP-18柱(甲醇-水，0%～100%)得13个组分(F7.1～F7.13)。

其中F7.6(1.1 g)经Sephadex LH-20(H2O)凝胶过滤，再行制备HPLC和半制备HPLC(甲醇-水，15%)得化合物22(18.4 mg)。

小鼠单核巨噬细胞RAW264.7购自中科院上海细胞库，DMEM培养基和胎牛血清购自BI公司。

Griess Reagent、LPS(lipopolysaccharide)及对照药物L-NMMA(NG-monomethyl-L-arginine,monoacetate salt)购自Sigma公司。

将RAW264.7细胞接种至96孔板，用1 μg/mL LPS进行诱导刺激，同时加入待测化合物(终浓度25 μM)处理，设置不含药物组和L-NMMA阳性药物组(50 μM)做对照。

细胞过夜培养后取培养基检测NO生成，在570 nm处测定吸光值。

在剩
余培养基中加入MTS进行细胞存活率检测，排除化合物对细胞的毒性影响。

NO生成抑制率(%)=(非药物处理组OD570 nm-样品组OD570 nm)/非药物处理组OD570 nm × 100%
IC50(50% concentration of inhibition)按Reed & Muench法计算。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)由深圳大学医学部刘宝华教授研究组馈赠。

M199培养基和胎牛血清购自Gibco公司。

Matrigel胶购自CORNING公司。

将Matrigel胶均匀铺于预冷的96孔板中，每孔50 μL，37 ℃孵育40 min。

待Matrigel胶凝固后，每孔加入1×104 HUVEC细胞，实验组加入待测化合物(终浓度20 μM)处理，对照组不含药物。

在37 ℃、5% CO2条件下，培养6 h后，于显微镜下观察拍照，图片分析用Image J软件进行，每个实验重复3次。

血管生成率(%)=药物处理组成管长度/对照组成管长度×100%
化合物1 无色粘稠液体;1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:3.65 (1H,m,H-2),3.59 (2H,dd,J = 11.2,4.7 Hz,Ha-1,Ha-3),3.51 (2H,dd,J = 11.2,6.0 Hz,Hb-1,Hb-3);13C NMR (100 MHz,methanol-d4) δ:64.9 (C-1,C-3),74.3 (C-2)。

以上数据与甘油标准品1HNMR对照基本一致，所以确定化合物1为甘油。

化合物2 白色针状固体;1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:7.87 (1H,dd,J = 7.7,1.1 Hz,H-6),7.29 (1H,m,H-4),6.81 (2H,m,H-3,H-5);13C NMR (100 MHz,methanol-d4) δ:175.1 (C-7),160.9 (C-2),132.6 (C-4),130.3 (C-6),118.7 (C-5),117.9 (C-3),115.8 (C-1)。

以上数据和文献[4]对照基本一致，故确定化合物2为邻羟基苯甲酸。

化合物3 白色固体；1H NMR (500 MHz,methanol-d4) δ:7.20～7.30
(5H,m,Ar-H),3.57 (1H,dd,J = 8.2,4.4 Hz,H-2),3.11 (1H,dd,J = 14.4,4.4 Hz,Ha-3),2.86 (1H,dd,J = 14.4,8.2 Hz,Hb-3);13C NMR (125 MHz,methanol-d4) δ:172.5 (C-1),137.1 (C-1′),130.4 (C-2(,C-6′),129.8 (C-3(,C-5′),128.2 (C-4′),56.5
(C-2),37.5 (C-3)。

以上数据与苯丙氨酸标准品NMR数据对照基本一致，所以确定化合物3为苯丙氨酸。

化合物4 黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:7.56 (1H,d,J = 7.8 Hz,H-4′),7.34 (1H,d,J = 7.9 Hz,H-7′),7.06 (1H,t,J = 7.4 Hz,H-6′),6.97 (1H,t,J = 7.4 Hz,H-5′),3.45 (1H,dd,J = 8.7,3.4 Hz,H-2),3.31 (1H,dd,J = 15.1,3.4 Hz,Ha-3),2.95 (1H,dd,J = 15.1,8.7 Hz,Hb-3)。

以上数据与色氨酸标准品NMR数据对照基本一致，所以确定化合物4为色氨酸。

化合物5 黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:7.39 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-6),5.45 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-5);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:164.5 (C-2),151.6 (C-4),100.3 (C-5),142.3 (C-6)。

以上数据和文献[5]对照基本一致，故确定化合物5为尿嘧啶。

化合物6 白色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.11 (2H,s,H-2,H-8),7.97 (2H,s,6-NH2)。

以上数据和文献[5]对照基本一致，故确定化合物6为腺嘌呤。

化合物7 黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:7.61 (1H,s,H-4),4.75 (1H,m,H-10),4.12 (2H,m,H-3,H-6),3.85 (1H,m,Hb-9),3.46 (1H,m,Ha-9),2.13 (1H,m,Hb-7),1.82 (3H,m,Ha-7,H-8),1.20 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-11);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:169.2 (C-2),164.9 (C-5),64.7 (C-10),59.6 (C-6),58.3 (C-3),44.6 (C-9),28.0 (C-7),22.0 (C-8),20.2 (C-11)。

以上数据和文献[6]对照基本一致，故确定化合物7为cyclo(Pro-Thr)。

化合物8 无色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.13 (1H,s,H-4),4.16 (1H,m,H-3),4.08 (1H,m,H-6),3.36 (2H,overlapped,H-9),1.81-2.13
(4H,overlapped,H-7,H-8),1.21 (3H,d,J = 6.8 Hz,H-11);13C NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ:170.0 (C-5),166.6 (C-2),58.7 (C-6),50.2 (C-3),44.9 (C-
化合物8为cyclo(Pro-Ala)。

化合物9 白色固体；1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:4.04 (1H,q,J = 7.0 Hz,H-3),3.84 (1H,m,H-6),2.27(1H,m,H-8),1.45 (3H,d,J = 7.0 Hz,H-7),1.05 (3H,d,J = 7.1 Hz,H-9/H-10),0.95 (3H,d,J = 6.8 Hz,H-9/H-10)。

以上数据和文献[13]对照基本一致，故确定化合物9为cyclo(Ala-Val)。

化合物10 白色粉末；1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:4.00 (1H,d,J = 17.6 Hz,Hb-3),3.84 (1H,overlapped,H-6),3.84 (1H,overlapped,Ha-3),1.97
(1H,m,H-7),1.57 (1H,m,Hb-8),1.28 (1H,m,Ha-8),1.03 (3H,d,J = 7.0 Hz,H-10),0.97 (3H,t,J = 7.4 Hz,H-9);13C NMR (100 MHz,methanol-d4) δ:170.1 (C-5),168.8 (C-2),61.0 (C-6),45.3 (C-3),41.2 (C-7),25.5 (C-8),12.0 (C-9),15.4 (C-10)。

以上数据和文献[9]对照基本一致，故确定化合物10为cyclo(Gly-Ile)。

化合物11 棕色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.27 (1H,s,H-1),8.02 (1H,s,H-4),3.82 (1H,d,J = 17.3 Hz,Hb-3),3.61 (1H,overlapped,H-6),3.61
(1H,overlapped,Ha-3),1.74 (1H,m,H-8),1.51 (2H,t,J = 6.8 Hz,H-7),0.86
(6H,overlapped,H-9,H-10);13C NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ:168.8 (C-5),166.5 (C-2),53.0 (C-6),44.3 (C-3),42.2 (C-7),23.7 (C-8),23.0 (C-9/C-10),21.9 (C-9/C-10)。

以上数据和文献[10]对照基本一致，故确定化合物11为cyclo(Gly-Leu)。

化合物12 白色粉末；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.29 (1H,s,H-8),8.05 (1H,s,H-2),5.85 (1H,d,J = 5.8 Hz,H-1′),4.50 (1H,t,J= 5.4 Hz,H-2′),4.13
(1H,m,H-3′),3.94 (1H,q,J= 3.5 Hz,H-4′),3.65 (1H,dd,J = 12.0,3.7 Hz,Hb-5′),3.54 (1H,dd,J = 12.0,3.7 Hz,Ha-5′);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6)
δ:156.6 (C-6),148.3 (C-4),146.3 (C-2),138.7 (C-8),124.5 (C-5),87.5 (C-1′),85.7
确定化合物12为inosine。

化合物13 白色粉末；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.34 (1H,s,H-8),8.13 (1H,s,H-2),7.34 (2H,s,6-NH2),5.87 (1H,d,J = 5.8 Hz,H-1′),4.60 (1H,t,J= 4.9 Hz,H-2′),4.14 (1H,m,H-3′),3.96 (1H,m,H-4′),3.67 (1H,m,Hb-5′),3.54
(1H,m,Ha-5′);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:156.2 (C-6),152.4 (C-2),149.1 (C-4),139.9 (C-8),119.4 (C-5),87.9 (C-1′),85.9 (C-4′),73.5 (C-2′),70.7 (C-3′),61.7 (C-5′)。

以上数据和文献[11]对照基本一致，故确定化合物13为adenosine。

化合物14 白色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.21 (1H,s,H-4),7.91 (1H,s,H-1),5.11(1H,m,H-3),3.69 (3H,m,H-6,H-7),1.82 (1H,m,H-9),1.61
(2H,m,H-8),0.87 (3H,d,J = 6.6 Hz,H-10/H-11),0.85 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-10/H-11);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:168.2 (C-5),166.3 (C-2),62.3 (C-7),57.3 (C-3),52.7 (C-6),44.7 (C-8),23.3 (C-9),23.2 (C-10/C-11),21.6 (C-10/C-11)。

以上数据和文献[12]对照基本一致，故确定化合物14为cyclo(Leu-Ser)。

化合物15 淡黄色固体；1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:7.27(5H,m,Ar-H),4.22 (1H,m,H-6),3.84 (1H,m,H-3),3.43 (1H,dd,J = 11.1,3.4 Hz,Hb-7),3.23 (1H,dd,J = 13.6,6.6 Hz,Hb-8),3.11 (1H,dd,J = 13.6,4.3 Hz,Ha-8),2.86 (1H,dd,J = 11.1,6.1 Hz,Ha-7);13C NMR (150 MHz,methanol-d4) δ:169.5 (C-2),168.2 (C-5),137.2 (C-9),131.3 (C-11,C-13),129.7 (C-10,C-14),128.2 (C-12),64.7 (C-7),58.7 (C-3),57.6 (C-6),41.6 (C-8)。

以上数据和文献[13]对照基本一致，故确定化合物15为cyclo(Phe-Ser)。

化合物16 淡黄色固体;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.09 (1H,s,H-4),7.60 (1H,s,H-1),7.24(5H,m,Ar-H),7.24(1H,s,Ha-16),6.92 (1H,s,Hb-16),4.18
(1H,m,H-3),4.02 (1H,m,H-6),3.10 (1H,dd,J = 13.6,4.8 Hz,Hb-7),2.93 (1H,dd,J = 13.6,4.9 Hz,Ha-7),2.27 (1H,dd,J = 15.9,4.1 Hz,Hb-14),1.39 (1H,dd,J =
15.9,8.6 Hz,Ha-14);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:171.7 (C-15),167.0 (C-5),166.5 (C-2),136.4 (C-8),130.2 (C-9,C-13),128.2 (C-10,C-12),126.8 (C-11),55.2 (C-3),51.2 (C-6),38.2 (C-14),38.1 (C-7)。

以上数据和文献[8]对照基本一致，故确定化合物16为cyclo(Asn-Phe)。

化合物17 淡黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:9.31 (1H,s,11-OH),8.08 (1H,s,H-1),7.84 (1H,s,H-4),6.94 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-9,H-13),6.66
(2H,d,J = 8.3 Hz,H-10,H-12),3.97 (1H,m,H-6),3.32 (1H,overlapped,Ha-3),2.98 (1H,dd,J = 13.6,4.0 Hz,Ha-7),2.73 (1H,overlapped,Hb-3),2.73
(1H,overlapped,Hb-7);13C NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ:167.8 (C-5),166.2 (C-2),156.8 (C-11),131.5 (C-9,C-13),126.2 (C-8),115.4 (C-10,C-12),56.2 (C-6),44.1 (C-3),38.6 (C-7)。

以上数据和文献[14]对照基本一致，故确定化合物17
为cyclo(Tyr-Gly)。

化合物18 淡黄色粉末；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.04 (1H,s,H-4),7.98 (1H,s,H-1),6.94 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-9,H-13),6.66 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-10,H-12),4.08 (1H,m,H-3),3.62 (1H,m,H-6),3.02 (1H,dd,J = 13.6,3.5 Hz,Ha-7),2.73 (1H,dd,J = 13.6,4.6 Hz,Hb-7),0.54 (3H,d,J = 7.0 Hz,H-14);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:167.7 (C-5),166.0 (C-2),156.2 (C-11,C-13),131.3 (C-
9),125.9 (C-8),114.9 (C-10,C-12),55.6 (C-3),49.8 (C-6),37.6 (C-7),19.9 (C-14)。

以上数据和文献[8]对照基本一致，故确定化合物18为cyclo(Ala-Tyr)。

化合物19 棕色固体；1H NMR (400 MHz,methanol-d4) δ:7.03 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-10,H-14),6.74 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-11,H-13),4.15 (1H,m,H-6),3.84
(1H,m,H-3),3.46 (1H,dd,J = 11.0,3.3 Hz,Ha-7),3.14 (1H,dd,J = 13.7,6.4
Hz,Ha-8),3.00 (1H,dd,J = 13.7,4.2 Hz,Hb-8),2.89 (1H,dd,J = 11.0,6.3 Hz,Hb-7);13C NMR (150 MHz,methanol-d4) δ:169.6 (C-2),168.2 (C-5),157.9 (C-12),132.3 (C-10,C-14),127.6 (C-9),116.4 (C-11,C-13),64.8 (C-7),58.7 (C-3),57.8 (C-6),40.7 (C-8)。

以上数据和文献[14]对照基本一致，故确定化合物19为cyclo(Tyr-Ser)。

化合物20 淡黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:7.99 (1H,s,H-1/H-4),7.78 (1H,s,H-4/H-1),6.96 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-11,H-15),6.66 (2H,d,J = 8.3 Hz,H-12,H-14),3.84 (1H,m,H-7),3.68 (1H,m,H-6),3.50 (1H,m,H-3),2.96
(2H,m,H-9),0.97 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-8);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6)
δ:167.5 (C-2),166.6 (C-5),156.0 (C-13),130.7 (C-11,C-15),127.2 (C-10),115.0 (C-12,C-14),67.2 (C-7),60.3 (C-3),56.1 (C-6),40.0 (C-9),19.7 (C-8)。

结合文献[14]所报道的数据，确定化合物20为cyclo(Tyr-Thr)，该化合物为新天然产物。

化合物21 淡黄色固体；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:8.00 (1H,s,13-OH),7.62 (1H,s,H-1/H-4),6.96 (2H,d,J = 8.2 Hz,H-11,H-15),6.66 (2H,d,J = 8.2 Hz,H-12,H-14),4.08 (1H,m,H-6),4.02 (1H,m,H-3),2.98 (1H,dd,J = 13.7,4.6 Hz,Ha-9),2.81 (1H,dd,J =13.6,4.6 Hz,Hb-9),2.32 (1H,dd,J = 15.7,4.0 Hz,Ha-7),1.52 (1H,dd,J = 15.7,8.7 Hz,Hb-7);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:171.7 (C-8),166.9 (C-2),166.5 (C-5),156.2 (C-13),131.1 (C-11,C-15),126.2 (C-10),115.0 (C-12,C-14),55.4 (C-6),51.2 (C-3),38.2 (C-9),37.4 (C-7)。

结合文献[14]所报道的数据，确定化合物21为cyclo(Tyr-Asp)，该化合物为新天然产物。

化合物22 浅棕色胶状物；1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ:9.30 (1H,s,H-1),7.51 (1H,s,H-5′),7.00 (1H,d,J = 3.5 Hz,H-3),6.19 (1H,d,J = 3.5 Hz,H-4),5.36 (1H,m,H-1′),4.84 (1H,m,Ha-4′),4.50 (2H,m,H-6),3.16 (1H,m,Hb-4′),2.10
(2H,m,H-2′),1.87 (2H,m,H-3′);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6) δ:178.5 (C-
1),168.4 (C-6′),144.5 (C-2),132.1 (C-5),125.4 (C-3),109.5 (C-4),56.6 (C-1′),55.5 (C-6),41.7 (C-4′),29.4 (C-2′),22.7 (C-3′)。

以上数据和文献[15]对照基本一致，故确定化合物22为cordyrrole A。

美洲大蠊是康复新液的主要组成药味，康复新液主要用于创伤愈合，考虑到愈创和炎症相关，而NO是炎症的重要指标之一，因此我们对部分化合物进行了抗NO 生成抑制试验，结果见表1。

由表1可知筛选的化合物均没有显示抑制NO生成活性。

创伤愈合的最后阶段是组织构建，这一过程中血管形成发挥了重要作用，为考察化合物是否干预这一过程，我们对部分化合物进行了血管生成活性试验[16]，结果见图1。

由图可见，被筛选的化合物中，化合物9～11、21在20 μM时可显著促进HUVECs形成管状结构，表明具有血管生成促进活性。

可以看出，本研究的22个化合物中，14个(7-11，14-21)为环二肽类化合物，其涉及的氨基酸组合较多。

虽然环二肽在植物和微生物中也广为存在，但从美洲大蠊中获得如此多的环二肽(且其中2个为天然界首次发现)却值得关注。

考虑到创面修复包括炎症发生、肉芽组织形成和组织重建，我们对部分化合物进行了NO生成抑制活性观察，遗憾的是没有化合物在此模型上表现出活性。

而血管生成活性试验中，我们却发现化合物9、11和21却能极显著地促进HUVECs血管生成(P<0.01或0.001)，结合它们的结构，我们可以得出具有特定组成的环二肽类化合物是美洲大蠊发挥创面愈合的重要成分之一。

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