红霉素的发酵工艺及提取工艺

注射用红霉素
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谢谢！
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• （5）发酵黏度的控制：发酵液的黏度一定程度上反映 了菌丝生长浓度，并对红霉素A.B.C组分的比例有直接 的影响
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红霉素的提取工艺
在碱性条件下，红霉素一游离碱的形式存在，可容于有 机溶剂中。在碱性的条件下，可与一些酸形成盐。目前， 国内外主要采用有机溶剂萃取或大孔树脂吸附进行提取。
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红霉素的发酵工艺
(3) 培养条件： （1） 温度：红霉素发酵采用31℃恒温培养。温度过 高时，会产生红霉素C，红霉素C与红霉素A结构相似， 但毒性却是红霉素A的两倍， （2）pH：整个发酵过程中pH维持在6.6～7.2，菌丝生 长良好，发酵水平稳定。红色糖多孢菌最适生长pH为 6.7～7.0，而红霉素合成的最适 pH为6.7 ～6.9。
红霉素的发酵工艺及提取工艺
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红霉素的产生菌及育种
• 1950年，Lily研究室首次从菲律宾的一个土样 中筛选到了一株产红霉素的红色链霉素〈现称 为红色糖多胞菌〉。该菌在合成培养基上生长 时，气生菌丝为白色，孢子丝呈不紧密的螺旋 状，3～5圈，孢子呈球状
• 我国20世纪60年代以红色糖多胞菌P32– 103为菌种开始红霉素的工业生产，该菌发酵 效价低，且易染噬菌体。随后，国内学者不断 以该菌为原始菌进行了传统的诱变育种，获得 许多生产性能良好的菌株。
丙酸是红霉内脂〈合成红霉素的三中产物之一〉合成的前体 物质，但丙酸对菌丝生长有抑制作用，所以发酵时以丙醇为发酵 前体物质，丙醇在发酵时对菌丝的毒性作用相对较小，对pH的 影响也较小，代谢稳定，发酵单位和产品质量都较高。此外，正 丙醇除了起前体作用外，还对红色糖多孢菌中乙酰CoA合成的诱 导物。
在无机元素中，铁离子抑制红霉素的合成。
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红霉素的发酵工艺
（2）培养基 发酵培养基最适合的碳源为蔗糖、其次为葡萄糖、淀粉、糊
精。生产上常用葡萄糖和淀粉为混合碳源，效果与使用葡萄糖相 似。
氮源的代谢对红霉素合成影响很大，当适于菌体生长的氮源 耗尽时，菌体才停止生长并迅速合成红霉素。红霉素生产中一般 都用有机氮源，其中以黄豆饼粉、玉米浆为最佳。由于黄豆饼粉 菌时泡沫较多，故一、二级种子罐及后期补料用部分花生饼粉代 替，但全用花生饼粉则最终产品会出现带会现象。在发酵培养基 中加少量硫酸铵，可促进菌丝生长。
1、发酵液的预处理：向发酵液中加入碱式氯化铝沉 淀蛋白质，促进菌丝结团加快过滤。
2、有机溶剂萃取： （1）防止和去乳化：用酸性的十二烷基磺酸钠，在碱 性条件下留在水相中，使产品色泽有所改进。 （2）pH：发酵液碱化时控制pH在10±0.4的范围内。 （3）温度：控制提取过程的温度有利于提高萃取收率。
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红霉素的发酵工艺
(1)种子培养：
〈1〉生产孢子的制备：红色糖多胞菌斜面孢子培养 基由淀粉、玉米浆、硫酸铵等组成，孢子培养的温度 为37℃，湿度50﹪左右。母瓶斜面培养9d，子瓶斜面 培养7d。成熟的孢子呈深米黄色，色泽鲜艳、均匀、 无黑点，孢子瓶背面有红色色素。
〈2〉生产种子的制备：种子罐及繁殖罐的培养基由 淀粉、葡萄糖、花生饼粉、蛋白胨、硫酸铵和碳酸钙 等组成，灭菌后将子瓶斜面孢子制成孢子悬液，用微 控注射的方式接 入种子罐。种子培养温度为35℃，培 养时间为65h，繁殖罐培养温度为33℃，培养时间为 30～32h左右。种子培养成熟并经检验合格后以10﹪ 的接种量移入发酵罐。
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红霉素的发酵工艺
孢子培养
孢子培养
沙土孢子
母瓶斜面培养
37℃ 7 ～ 10 d
37℃ 7 ～ 10 d
种子罐培养
种子罐培养
子瓶斜面孢子
34 ～ 35℃ 60 ～ 70h 种子罐培养
34~35 ℃ ，60~70h 发酵
一级种子液
二级种子液
32 ～35 ℃ 30～32h
发酵液
31℃ 150～160h
（3）通气和搅拌：红霉素发酵为好氧发酵。一般地， 发酵最初12h，通气量保持在0.4vvm（每分钟通气量 与罐体实际料液体积的比值），12h后到放罐可控制 在0.8～1.0vvm。搅拌速度不宜太快，容易损伤菌丝， 不利于发酵
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红霉素的发酵工艺
• （4）补料：发酵过程中还原糖浓度控制在1.0％～1.4 ％范围内，每隔6补加葡萄糖一次，直到放罐前1218停 止补糖。40后补加有机氮源，每日34次，若发酵罐的 黏度上升则增加补料量，反之则减少，放罐前24停止 补氮。发酵后期添加氨水可以提高发酵单位，减少脱水 红霉素的形成，改善产品质量，补加硫酸镁可以改善菌 丝生长状况，提高发酵单位。前提一般在24后补加
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红霉素的提取工艺
预处理过滤
提取离心分离
发酵液
滤洗液
BA萃取液
甩滤、洗涤、干燥
红霉素乳酸盐湿晶体
干晶体
溶解
碱化转化
红霉素溶液
红霉素碱湿晶体
分离、洗涤、干燥
红霉素碱成品
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结构式及药剂
红霉素药物粉剂
红霉素结构式
罗红霉素粉剂
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有关药物
罗红霉素分散片
红霉素软膏制品