牛种布鲁氏菌病疫苗的研究进展

养殖与饲料2020年第03期
针”，确保疫苗免疫剂量。

制定科学合理的免疫程序，猪瘟疫苗免疫要避开配种期和妊娠期，为了确保猪瘟疫苗的免疫效果，
猪瘟疫苗免疫应该在母源抗体即将消失时进行，可以加大免疫剂量，
可以在超前一次免疫后70日龄时进行第2次免疫，猪群可以产生较高的猪瘟抗体水平。

在免疫接种后通过测定猪瘟抗体水平了解猪瘟疫苗免疫效果，如达不到免疫防控的抗体水平需要再次免疫接种。

2.2避免免疫抑制病干扰
在进行猪瘟防疫的同时也应该做好常见高发
病毒病的防疫，做好猪场的免疫状态评估，避免其他疫病感染影响猪瘟的防疫效果。

在猪瘟疫苗接种前后要确保猪群健康，可以通过抗原检测和抗体筛查了解猪群体的健康状况，对存在免疫抑制病感染的猪群及时淘汰。

2.3避免应激因素干扰
猪瘟疫苗免疫时应该避免应激因素的影响，一
般在应激情况消失后再进行猪瘟疫苗免疫[5]。

猪舍要保持通风，及时清理粪便垃圾，定期消毒，养殖密度不宜过大，给猪群提供舒适的饲养环境，减少各种应激因素的影响。

2.4加强饲养管理
提倡科学喂养，禁止大量滥用抗生素，不同饲
养阶段、不同用途的猪要分开饲养，根据不同阶段的猪提供优质饲料，确保饲料营养均衡，不饲喂霉变饲料，发现疑似病猪要立即隔离饲养，并逐步淘汰净化。

3结
语
猪场应根据自身实际情况逐步消除饲养场内
各种干扰疫苗免疫效果的影响因素，
采用科学合理的免疫操作方法和免疫程序，
确保猪瘟疫苗的免疫效果，提高猪瘟的防疫水平，有效防止猪瘟病毒的发生和流行，为实现我国猪瘟的净化目标奠定基础。

参考文献
[1]汪胜华，张永志，赵永旭，等.猪瘟防疫存在的几个误区[J].今日畜牧兽医，2010（5）：19-21.[2]张国成.猪瘟防疫失败的原因及改进措施[J].中国畜禽种业，2015，11（4）：80.
[3]徐卫康，王鑫，孟相秋.猪瘟防疫的“喜”与“忧”[J].今日养猪业，2017（3）：49-51.
[4]李鸿淼.猪瘟的流行特点及常用防疫措施[J].吉林农业，2014（23）：54.
[5]
孙亮.浅谈猪场猪瘟防疫技术[J].现代畜牧科技，2017（4）：153.
【责任编辑：胡敏】
牛种布鲁氏菌病疫苗的研究进展
李亚杰
河南省周口市动物疫病预防控制中心，
河南周口466000摘要
疫苗免疫是布鲁氏菌病的主要防控措施之一，本文主要概述了几种牛种布鲁氏菌病疫苗
（经典的弱毒活疫苗、亚单位疫苗、基因工程弱毒活疫苗和活载体疫苗）的优缺点，接种疫苗是控制和消灭布鲁氏菌病最经济和最关键的方法，也能最大程度地降低人感染的风险。

关键词牛种；布鲁氏菌；疫苗
收稿日期：2020-01-09
李亚杰，女，1991年生，助理兽医师。

1布鲁氏菌病概述
布鲁氏菌是一种革兰氏阴性兼性细胞内寄生
菌。

布鲁氏菌病（布病）是由布鲁氏菌引起牛、羊、猪、鹿、犬等哺乳动物和人类共患的一种动物源性传染病，我国将其列为二类动物疫病。

布病的传播
疫病防控88··. All Rights Reserved.
养殖与饲料2020年第03期
主要通过与血液、被感染宿主动物的粪便、尿液和胎盘的密切接触，或通过吸入被污染的灰尘或气溶胶。

布病的典型症状是怀孕母畜流产，乳腺炎也是常见症状之一；公畜往往发生睾丸炎、附睾炎或关节炎；而人类感染布病多表现为持续性感染、波浪热、多汗和关节痛等，而且可能复发或留下后遗症。

在地方病流行地区，接种疫苗是控制和消灭布鲁氏菌病最经济和最关键的方法，也能最大程度地降低人感染的风险。

2牛种布鲁氏菌疫苗概述
2.1经典的弱毒活疫苗
S19疫苗是在家畜中使用最广泛的流产布鲁氏菌疫苗，又称作A19疫苗。

S19菌株是强毒株在室温培养1年意外分离得到的光滑型突变菌株，其中有一段720bp序列缺失，导致赤藓糖醇分解代谢基因被破坏，与原代菌株相比，其毒力较低[1]。

S19疫苗接种可诱导相对较高的免疫原性，保护期较长，几乎可达到对整个生产期的保护。

小鼠动物模型研究显示，可产生较高水平的IFN-γ、CD4+和CD8+[2]。

然而，S19疫苗也有一定的副作用：干扰布鲁氏菌血清学诊断试验；导致怀孕母畜流产，降低产奶量；而且对人类具有一定的致病性。

RB51疫苗菌株是一种耐利福平突变体，最初通过牛种布鲁氏菌2308在含青霉素和利福平的培养基多次传代培养分离筛选得到的粗糙型菌株。

研究表明，编码O侧链合成必需的糖基转移酶wbo基因在2308菌株通过连续传代培养后缺失[3]。

RB51疫苗菌株较为稳定，无残余毒力和毒力返祖的可能性，不干扰血清诊断试验，可预防流产；若使用全剂量仍会导致怀孕母牛的流产，而且保护率低。

此外，尽管RB51疫苗的减毒程度更高，但它对人类依然具有传染性，而且，它具有利福平抗性，不利于人类布鲁氏菌病的治疗。

2.2亚单位疫苗
目前用于布鲁氏菌亚单位疫苗进行研究，包括重组肽、蛋白质、DNA、脂多糖（lps）和外膜囊泡（omvs）。

与传统的弱毒活疫苗相比，亚单位疫苗安全性高、无残留毒力，可用于人类和怀孕动物。

但保护率较低，需要高效免疫佐剂加强免疫效果。

T细胞抗原诱导分化的Th1反应是主要的免疫应答，可增强亚单位疫苗的保护作用。

其中，作为蛋白质亚单位疫苗的OMp16、OMp19，脂质体蛋白L7/L12、OMp25、p39和AsnC，促进Th1型免疫应答，和S19疫苗保护水平相当。

相反，二氢硫辛酰胺琥珀酰转移酶（rE2o）和半胱氨酸合酶A（rCysK）亚单位疫苗引发Th2型免疫应答，保护力相对较低。

SurA和DnaK（热休克蛋白70家族）作为蛋白质亚单位疫苗，与经典活疫苗S19相比，保护力较低。

将重组蛋白混合物（rOMP19+rp39）接种小鼠可诱导Th1介导的同型抗体和细胞免疫应答，对牛种布鲁氏菌544菌株产生保护力。

OMp19和p39结构域组成的嵌合亚单位蛋白疫苗接种小鼠模型后，产生与Th1型免疫反应相关的IgG2a和细胞因子，并诱导二次免疫应答。

OMP25-BLS融合蛋白和热休克蛋白60ku，以壳聚糖纳米粒为载体制备的亚单位疫苗，对其免疫效果进行了评价，发现二者结合使用诱导的细胞免疫应答高于单独使用时。

布鲁氏菌保守重组蛋白OMP25c与弗氏佐剂混合可诱导Th1和Th2型免疫应答，与S19保护水平相当。

其他的重组蛋白如：AspC、Dps、lnpB和Ndk作为亚单位疫苗，可诱导产生高水平的IgG2a，与RB51的保护效果相当。

以DNA为基础的另一种亚单位疫苗能在多次免疫后诱导体液和细胞免疫反应。

牛种布鲁氏菌基因组岛3（GI-3）区域编码的几个开放阅读框（ORF），其表达的抗原对细胞内生存和机体的发病机制起重要作用。

因此，基于GI-3区域设计的布鲁氏菌DNA疫苗可能是一种有效的候选疫苗。

编码GI-3区域的BAB1-0263或BAB1-0278基因的DNA疫苗，可刺激体液和细胞免疫，并产生高水平的IFN-γ。

此外，表达BAB1-0278基因的DNA疫苗可以对感染2308菌株产生保护力。

评价GI-3区域含ABC型转运体（pV278a）的DNA疫苗发现，可显著增强Th1免疫应答，并产生高水平的IgG2a。

Gomez等人构建的含BAB1-0273和/或BAB1-0278和基因的多价融合DNA疫苗，可产生细胞免疫和体液免疫，IFN-γ、抗体和Th1型反应，然而保护力低。

编码SOD-Cu/Zn和IL-2融合蛋白的DNA疫苗，可诱导产生IgG2a和TNF-α，与RB51疫苗相比，可对2308菌株产生有效保护[4]。

2.3基因工程弱毒活疫苗
利用分子生物学技术敲除牛种布鲁氏菌毒力基因，可导致明显的衰减，正在开发的研究包括：嘌呤生物合成途径基因，铁螯合酶hem H突变体，脂质A脂肪酸转运基因，磷酸甘油酸激酶编码基
疫病防控89
··
. All Rights Reserved.
养殖与饲料2020年第03期
因，IV型分泌基因和LPS生物合成途径基因。

这些突变体的保护水平与经典减毒活疫苗相似。

Ugalde等人通过缺失2308菌株的磷酸葡萄糖变位酶（pgm）基因，研制了一种无血清诊断干扰的重组菌株，将光滑型改变成粗糙型，且Th1免疫应答和S19相当。

将RB51菌株cyd C cyd D和cyd
C pur D基因进行单、双基因缺失的疫苗，与RB51菌株相比，单剂量接种对小鼠的保护力较低，加大剂量即可诱导体液和细胞免疫反应，还可产生更高水平的保护力，对牛的免疫评价还需进一步验证。

牛种布鲁氏菌野外分离株（BA15）中也进行相同的双重缺失，可提供相同的保护效果，但不需要加大剂量进行疫苗接种。

缺失外膜融合蛋白基因的靶向突变体在小鼠模型中保护期较短，但疫苗评价显示和S19和RB51的保护水平相当。

甲酰基转移酶（wbk C）基因（参与脂多糖生物合成的关键基因），缺失后形成了粗糙型突变体，与光滑的S19菌株相比，衰减更大，对小鼠的保护性免疫力更低。

糖基转移酶基因的缺失产生的突变体，不能有效逃避宿主免疫的检测，免疫小鼠后可产生类似于S19菌株的保护水平。

和S19相比，布鲁氏菌
和基因的破坏导致免疫功能下降[4]。

2.4活载体疫苗
布病活载体疫苗主要是将布鲁氏菌保护性免疫抗原整合到另一种载体病毒或细菌基因组中，如小肠结肠炎耶尔森菌编码细菌铁蛋白（BFR）或P39诱导Th1型免疫应答。

人苍白杆菌和乳酸乳球菌表达SOD在小鼠模型免疫中产生保护力。

沙门氏菌表达31kDa、BCSP31、SOD、OMP3b、OMP19、L7/L12、BLS和prp A对小鼠、豚鼠、山羊可产生坚强的保护
力且安全性高。

重组牛痘病毒表达L7/L12、OMP18在小鼠模型中保护力不显著。

Semliki森林病毒（SFV）编码IF3和Sod C接种小鼠后保护力不如
RB51。

流感病毒表达L7/L12和OMP16作为载体开发的疫苗，与S19相比，安全性较高，可长期刺激体液和细胞免疫，尤其是在怀孕的小母牛身上防止感染；另外，通过添加OMP19和SOD蛋白来改进这种疫苗配方，以蒙脱石凝胶为佐剂，对绵羊和山羊有良好的保护作用。

表达p39和BLS的腺病毒作为载体在小鼠模型中可引起体液和细胞免疫。

RB51过表达SOD、wboA、L7/L12作为疫苗研发，和亲本菌株RB51相比、保护力显著提高；RB51表达异源抗原大肠杆菌β-半乳糖苷酶和牛分枝杆菌65ku热休克蛋白，小鼠免疫后可诱导产生IgG2a和IFN-γ[4]。

参考文
献
[1]SANGARI F J，GARCíA-LOBO J M，AG ERO J.The
vaccine strain B19carries a deletion in the erythritol catabolic genes[J].FEMS microbiol.lett，1994，121（3）：337-
342.
[2]YU D H，HU X D，CAI H.A combined DNA vaccine encod-
ing BCSP31,SOD,and L7/L12confers high protection against
2308by inducing specific CTL responses[J].
DNA cell biol，2007（26）：435-443.
[3]SCHURIG G G，ROOP II R M，BAGCHI T，et al.Sriran-
ganathan,Biological properties of RB51;a stable rough strain
of[J].Vet.Microbiol，1991（28）：171-188. [4]AZAM G，HOSSEIN K，KHOSROW K，et al.Development of
new generation of vaccines for[J].Heliyon，2018（4）：1079-1103.
【责任编辑：胡敏】
疫病防控
90
··
. All Rights Reserved.。