1掌握毛细管电泳法的基本原理
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实验二十一
毛细管电泳法测定水杨酸 的含量
实验目的 1．掌握毛细管电泳法的基本原理、结构与使用方 ．掌握毛细管电泳法的基本原理、 法。 2．掌握紫外吸收光谱检测方法。 ．掌握紫外吸收光谱检测方法。 3．测定阿司匹林与水杨酸。 ．测定阿司匹林与毛细管电泳又称高效毛细管电泳 High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一种仪器分析方法。通 是一种仪器分析方法。 过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管 的高电压于充有缓冲液的极细毛细管， 过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液 体中离子或荷电粒子进行高效、快速的分离。现在， HPCE已广泛应用于氨基酸 、 蛋白质 、 多肽 、 低聚核苷酸 、 已广泛应用于氨基酸、 已广泛应用于氨基酸 蛋白质、 多肽、 低聚核苷酸、 DNA等生物分子分离分析， 药物分析， 临床分析， 无机离 等生物分子分离分析， 等生物分子分离分析 药物分析，临床分析， 子分析，有机分子分析， 子分析 ， 有机分子分析 ， 糖和低聚糖分析及高聚物和粒子 的分离分析。人类基因组工程中DNA的分离是用毛细管电 的分离分析 。人类基因组工程中 的分离是用毛细管电 泳仪进行的。 泳仪进行的。
数据处理
从色谱工作站打开保存的文件，通过调节参数表里的满屏量程和满屏 时间，把谱图调到最佳。当需要改动起始峰宽水平时，还要按在处理 这个图标。把谱图调到最佳后，点击定量组分，出现一张表格。选中 套峰时间下的一个空格，再用鼠标右键点击需要研究的峰的内部，弹 出一个菜单，点击自动填写“定量组分”表中套峰时间。然后输进样 品的浓度，点击定量方法，点击计算校正因子，点击屏幕上的定量计 算图标，点击定量结果表，出现校正因子和峰面积，记录校正因子和 峰面积。点击定量结果，在定量结果表格里输入组分名称、浓度、平 均校正因子、平均峰面积。点击当前表存档，重复上述操作，存入七 档数据。然后点击定量方法，点击工作曲线中的计算，再点击显示。 显示出峰面积—浓度的线性关系图和峰面积—浓度的方程。然后把标 准曲线复制到word文档里。 将样品中水杨酸峰面积的平均值代入峰面积—浓度方程，求得水杨酸 的浓度。
3．阿司匹林药片中水杨酸含量的测定 ． a．取阿司匹林药品溶液，在上述的电泳条件下对样品 溶液进行测定，平行测三次。 b．把一定浓度的水杨酸加入样品溶液中，进行测定。 4．数据采集 ． 打开色谱工作站软件。把电压上升到20Kv，立即点击 主界面的绿色图标—谱图采集，开始谱图采集。在进样之 前把屏幕调到色谱工作站的主界面。点击主界面的红色图 标—手动停止，可以停止谱图采集。然后将文件起名并保 存在指定的文件夹。
仪器与试剂
高效毛细管电泳仪；石英毛细管柱50cm×50m；色 谱工作站；PHS-3C数字酸度计 ；离心机 ；超纯水仪 器A10 水杨酸（SA）、北四硼酸钠、氢氧化钠、十二烷基 硫酸钠（SDS）等试剂均为高纯试剂；
实验步骤
1．电泳条件 ． 毛细管柱在使用前分别用0.1 mol的NaOH溶液和二次蒸馏 毛细管柱在使用前分别用 的 溶液和二次蒸馏 水及缓冲液冲洗3min后，在运行电压下平衡 水及缓冲液冲洗 后 在运行电压下平衡10min。以后每 。 次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡5min。 次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡 。 本实验采用电迁移进样（ 本实验采用电迁移进样（10Kv、5s）。 高压端进样， 低 、 ）。 高压端进样， 压端检测， 的工作电压。 压端检测，20 Kv的工作电压。检测波长为 的工作电压 检测波长为214nm。 。 2．水杨酸标准样品的测定 ． 分别测定0.05、0.01、0.8、1.2、1.6、2.0和5.0 mmol的水 分别测定 、 、 、 、 、 和 的水 杨酸标准溶液。每个浓度平行测三次。 杨酸标准溶液。每个浓度平行测三次。
思考题
1. 毛细管电泳仪的分离原理是什么？ 毛细管电泳仪的分离原理是什么？ 2. 说明毛细管电泳法的特点及应用
毛细管电泳法测定水杨酸 的含量
实验目的 1．掌握毛细管电泳法的基本原理、结构与使用方 ．掌握毛细管电泳法的基本原理、 法。 2．掌握紫外吸收光谱检测方法。 ．掌握紫外吸收光谱检测方法。 3．测定阿司匹林与水杨酸。 ．测定阿司匹林与毛细管电泳又称高效毛细管电泳 High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一种仪器分析方法。通 是一种仪器分析方法。 过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管 的高电压于充有缓冲液的极细毛细管， 过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液 体中离子或荷电粒子进行高效、快速的分离。现在， HPCE已广泛应用于氨基酸 、 蛋白质 、 多肽 、 低聚核苷酸 、 已广泛应用于氨基酸、 已广泛应用于氨基酸 蛋白质、 多肽、 低聚核苷酸、 DNA等生物分子分离分析， 药物分析， 临床分析， 无机离 等生物分子分离分析， 等生物分子分离分析 药物分析，临床分析， 子分析，有机分子分析， 子分析 ， 有机分子分析 ， 糖和低聚糖分析及高聚物和粒子 的分离分析。人类基因组工程中DNA的分离是用毛细管电 的分离分析 。人类基因组工程中 的分离是用毛细管电 泳仪进行的。 泳仪进行的。
数据处理
从色谱工作站打开保存的文件，通过调节参数表里的满屏量程和满屏 时间，把谱图调到最佳。当需要改动起始峰宽水平时，还要按在处理 这个图标。把谱图调到最佳后，点击定量组分，出现一张表格。选中 套峰时间下的一个空格，再用鼠标右键点击需要研究的峰的内部，弹 出一个菜单，点击自动填写“定量组分”表中套峰时间。然后输进样 品的浓度，点击定量方法，点击计算校正因子，点击屏幕上的定量计 算图标，点击定量结果表，出现校正因子和峰面积，记录校正因子和 峰面积。点击定量结果，在定量结果表格里输入组分名称、浓度、平 均校正因子、平均峰面积。点击当前表存档，重复上述操作，存入七 档数据。然后点击定量方法，点击工作曲线中的计算，再点击显示。 显示出峰面积—浓度的线性关系图和峰面积—浓度的方程。然后把标 准曲线复制到word文档里。 将样品中水杨酸峰面积的平均值代入峰面积—浓度方程，求得水杨酸 的浓度。
3．阿司匹林药片中水杨酸含量的测定 ． a．取阿司匹林药品溶液，在上述的电泳条件下对样品 溶液进行测定，平行测三次。 b．把一定浓度的水杨酸加入样品溶液中，进行测定。 4．数据采集 ． 打开色谱工作站软件。把电压上升到20Kv，立即点击 主界面的绿色图标—谱图采集，开始谱图采集。在进样之 前把屏幕调到色谱工作站的主界面。点击主界面的红色图 标—手动停止，可以停止谱图采集。然后将文件起名并保 存在指定的文件夹。
仪器与试剂
高效毛细管电泳仪；石英毛细管柱50cm×50m；色 谱工作站；PHS-3C数字酸度计 ；离心机 ；超纯水仪 器A10 水杨酸（SA）、北四硼酸钠、氢氧化钠、十二烷基 硫酸钠（SDS）等试剂均为高纯试剂；
实验步骤
1．电泳条件 ． 毛细管柱在使用前分别用0.1 mol的NaOH溶液和二次蒸馏 毛细管柱在使用前分别用 的 溶液和二次蒸馏 水及缓冲液冲洗3min后，在运行电压下平衡 水及缓冲液冲洗 后 在运行电压下平衡10min。以后每 。 次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡5min。 次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡 。 本实验采用电迁移进样（ 本实验采用电迁移进样（10Kv、5s）。 高压端进样， 低 、 ）。 高压端进样， 压端检测， 的工作电压。 压端检测，20 Kv的工作电压。检测波长为 的工作电压 检测波长为214nm。 。 2．水杨酸标准样品的测定 ． 分别测定0.05、0.01、0.8、1.2、1.6、2.0和5.0 mmol的水 分别测定 、 、 、 、 、 和 的水 杨酸标准溶液。每个浓度平行测三次。 杨酸标准溶液。每个浓度平行测三次。
思考题
1. 毛细管电泳仪的分离原理是什么？ 毛细管电泳仪的分离原理是什么？ 2. 说明毛细管电泳法的特点及应用