丹皮酚增强顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用

丹皮酚增强顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用丹皮酚增强顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用
徐淑萍
1
，孙国平
2
，王华
1
，魏伟
1
摘要目的探讨丹皮酚和顺铂联合应用对人肝癌细胞
SMMC-7721的增殖抑制作用。

方法用不同浓度的丹皮酚、
顺铂和两药联用处理人肝癌细胞SMMC-7721，采用四甲基
偶氮唑盐（MTT）法测定药物在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用，应用两药相互作用指数（CDI）进行联合
用药分析。

结果丹皮酚（7.81～250mg/L）和顺铂（0.625
～20mg/L）单独应用均对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制作
用，呈现剂量效应关系。

丹皮酚与顺铂联合应用后对人肝癌
SMMC-7721细胞的抑制率明显大于单药，有显著的协同杀
伤作用。

结论丹皮酚与顺铂联合应用具有明显的协同抗
肝癌细胞株SMMC-7721增殖的作用。

主题词牡丹酚/药理学；顺铂/药理学；药物协同作用；癌，
肝细胞/药物疗法
2005-08-02接收
基金项目：安徽省自然科学基金项目（编号：050430901），安徽省教
育厅自然科学基金重点项目（编号：2003Kj037zd），安徽省
卫生厅自然科学基金项目（编号：2002A025）
作者单位：
1
安徽医科大学临床药理研究所，合肥230032
2
安徽医科大学第一附属医院肿瘤科，合肥230022
作者简介：徐淑萍，女，25岁，硕士研究生；
孙国平，男，43岁，博士，教授，主任医师，硕士生导师，通讯作者
中图分类号R730.261；R735.7；R284.1
文献标识码A文章编号1000-1492（2006）01-0063-03
丹皮酚（paeonol，Pae）是牡丹皮的主要活性成
分，具有广泛的药理活性
［1］。

近年来研究发现，Pae
有一定的抗肿瘤作用
［2-5］。

顺铂（cisplatin，CDDP）
为临床一线抗癌化疗药，大剂量可以引起不可逆性
肾功能损害及严重的胃肠道反应，从而限制了临床
应用及疗效的进一步提高，因此临床上主张联合用
药。

此研究旨在探讨Pae和CDDP联合应用对人肝
癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。

1材料与方法
1.1药品及试剂Pae注射液：上海第一制药厂
（规格10mg/2ml，批号990402）；CDDP氯化钠注
射液：江西东亚药业有限责任公司（每100ml含
CDDP0.02g，NaCl0.9g）；RPMI-1640培养粉购于
美国Gibco公司；胎牛血清购于杭州四季青生物材
料研究所；胰蛋白酶和EDTA购于合肥生工生物技
术研究所；四甲基偶氮唑盐（MTT）购于美国Sigma
公司；DMSO等其它试剂均为国产AR级试剂。

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Theestablishmentofnonalcoholicsteatohepatitisanimalmode l
WangJianqing，LiJun，ZouYuhong，etal
（Schoolofpharmacy，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032）
AbstractObjectiveT oestablisharatmodelofnonalcoholicsteato hepatitis.MethodsThemodelratswerefed
withhighfat，highsucroseandhighproteinemulsionviagavage（from2.5～
10ml/kg，onceaday）andstandard
rodentchowadlibitumfor6weeks.SerumlevelsofALT，AST，TC，TG，HDL，LDL，hepaticTCandTGcontent
andhistopathologicchangesofliverwereevaluated.ResultsThe serumlevelsofALT，AST，HDL，LDL，TC，
TG，hepaticTCandTGcontentinmodelratsweresignificantlyhigherthant hoseinnormalrats.Thehistopatholog-
icalanalysissuggestedthatthemodelratsdevelopedpanlobular steatosisandinflammatorycellinfiltration.Conclu-
sionANASHmodelissuccessfullyinducedinratsbyfeedingwith highfat，highsucroseandhighproteinemul-
sionviagavage.
MeSHfattyliver；diseasemodels，animal
·36·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2006Feb；41（1）
1.2主要仪器设备Nacpo-6100CO
2
培养箱：美国
杜邦公司产品；YJ-1450型医学净化工作台：苏州净化设备公司；倒置式显微镜：OLYMPUS产品；EL301 Stripreader（酶标仪）：美国BW-Tek公司产品。

1.3细胞系人肝癌细胞株SMMC-7721购于上海
肝癌研究所。

1.4实验方法
1.4.1细胞培养及细胞悬液的制备人肝癌
SMMC-7721细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI- 1640培养液中，置37℃、0.05CO
2
的培养箱，待细
胞长满瓶底后，用等体积质量浓度为2.5g/L的胰
酶和质量浓度为0.2g/L的EDTA消化几分钟，镜
下观察胞质回缩、细胞间隙增大后，立即停止消化，离心去上清，更换培养液，分瓶培养，取对数生长期
细胞用于实验。

1.4.2肿瘤细胞体外增殖抑制实验
［6］
采用MTT
法，设实验组、细胞对照组和空白对照组，取对数生
长期细胞（1～5）×10
7
/L接种于96孔板上，每组设
3个复孔，每孔接种100μl，置37℃、0.05CO
2
的培
养箱中24h后，弃上清，实验组每孔分别加入200
μl培养液稀释的药物（Pae的终浓度为7.81、
15.63、31.25、62.5、125、250mg/L，CDDP终浓度为0.63、1.25、2.5、5、10、20mg/L，两药合用的比例为
1:1方案），细胞对照组和空白对照组只加入等量
的培养液，继续培养48h，在终止培养前4h实验组
及对照组每孔加入20μlMTT（5g/L），再培养4h 后，小心吸弃上清，并加入150μlDMSO溶解MTT
沉淀，用振荡器混匀后，在酶标仪上用570nm测定
吸光值（A）。

按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑
制率：肿瘤细胞生长抑制率（IR）=（1-实验组A
值/细胞组A值）×100%。

1.4.3药物联合作用评价
［7］
采用两药相互作用
指数（coefficientofdruginteraction，CDI）评价两药相互作用性质，CDI按下列公式计算：CDI=AB/（A
×B）。

根据活细胞数（吸光值）进行计算，AB为
两药联合组与对照组吸光值的比值；A或B是各药
物单独使用组与对照组吸光值的比值。

当CDI<1 时两药作用性质为协同；当CDI<0.7时，协同作用非常显著；CDI=1，则两药作用性质为相加；CDI> 1，则两药作用性质为拮抗。

1.4.4统计学处理实验数据以
#
x±s表示，组间
显著性检验采用方差分析，药物剂量与抑制率之间的关系采用直线相关分析，两药相互作用的性质采用CDI评价。

2结果
2.1Pae与CDDP单独应用对SMMC-7721细胞
的增殖抑制作用Pae和CDDP对SMMC-7721细胞均有增殖抑制作用，且呈现明显的剂量依赖效应关系，IC
50
分别为85.07mg/L和2.97mg/L。

Pae
7.81、15.63、31.25、62.5、125、250mg/L对SMMC- 7721细胞的抑制率依次为0.22%、13.86%、
20.32%、29.45%、56.62%、86.94%；CDDP0.63、1.25、2.5、5、10、20mg/L对SMMC-7721细胞的抑制率依次为6.4%、13.19%、44.28%、86.24%、
87.23、92.42%。

以浓度的对数与抑制率进行直线
相关分析：Pae：r=0.959，P<0.01；CDDP：r=
0.949，P<0.01。

2.2Pae与CDDP联合应用对SMMC-7721细胞
的增殖抑制作用MTT结果显示（表1、图1）不同
浓度的Pae与CDDP联用时显示不同程度的协同作
用。

抑制率均较单用其中一种药物时提高，单独用
药组和联合用药组之间差异具有显著性。

采用两药
相互作用指数分析，当Pae15.63、31.25、62.5mg/L 与CDDP系列浓度联合用药具有协同或显著协同作
用（CDI<1）。

提示在合适的剂量下Pae与CDDP 联合应用可起到降低用药剂量，提高疗效的作用。

表1Pae和CDDP联合应用对人肝癌细胞
SMMC-7721的增殖抑制作用（n=6，
#
x±s）
药物浓度（mg/L）
PaeCDDP
A
570
CDI
联合
作用程度
001.974±0.020
15.6301.700±0.027
31.2501.610±0.045
62.501.479±0.105
01.251.784±0.091
02.51.100±0.075
050.272±0.035
0100.252±0.007
15.631.251.582±0.0760.83869+ 15.632.50.982±0.0600.907206+ 15.6350.169±0.009
$
0.552925’
15.63100.213±0.002
$
0.665484’
31.251.251.541±0.058 $
1.059851-
31.252.50.785±0.035 $
0.808649+
31.2550.167±0.005 $
0.480872’
31.25100.159±0.006 $
0.479814’
62.51.251.282±0.110 $
0.951359+
62.52.50.275±0.030
$
0.260539’
62.550.158±0.013
$
0.482598’
62.5100.143±0.006
$
0.441765’
联合用药组与同等剂量CDDP各单药组比较：
$
P<0.01；+有
协同作用，’协同作用非常显著
·46·安徽医科大学学报
ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2006Feb；41（1）图1Pae对CDDP抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用的影响3讨论
在前期的研究中，我们发现Pae对多种体外培
养的肿瘤细胞有增殖抑制作用，体内应用有抗肿瘤
作用
［2-5］
，Pae与其他化疗药物杀伤肝癌细胞的协
同作用尚未见文献报道。

本实验将Pae与临床一线
抗癌药CDDP联合应用，采用MTT法观察其对人肝
癌细胞SMMC-7721的抗肿瘤活性。

实验结果显示，
Pae和CDDP单独应用时对人肝癌细胞SMMC-7721
有增殖抑制作用，且呈剂量效应关系，IC
50
分别为
85.07mg/L和2.97mg/L。

Pae与CDDP联合应用对人肝癌细胞SMMC-7721可产生显著的协同杀伤作用，尤其是Pae与CDDP的浓度接近IC
50
时即Pae
62.5mg/L与CDDP2.5mg/L联合用药时对人肝癌
细胞SMMC-7721增殖抑制作用最佳，两药合用后可使CDDP的抑制率从单独用药的44.28%提高到联合用药的89.12%，提示丹皮酚与CDDP联合用药确实可起到提高药效、降低用药剂量的作用，这将有助于克服单用化疗药所引起的毒副作用大、容易发生耐药等缺点，为Pae和CDDP联合用于临床提供了实验依据
［8］。

但Pae增强CDDP的体外抗人肝癌
细胞SMMC-7721增殖作用的分子机制尚需深入研
究。

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Synergisticallysuppressiveeffectofpaeonolandcisplatin
ontheproliferationofhumanhepatomacelllineSMMC-7721
XuShuping，SunGuoping，WangHua，etal
（InstituteofClinicalPharmacology，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032）
AbstractObjectiveT oinvestigatethesynergisticallysuppressive effectofpaeonolandcisplatinontheprolifera-
tionofhumanhepatomacelllineSMMC-7721.MethodsSMMC-7721cellswereculturedinregularconditionand
incubatedwithdifferentconcentrationsofdrugs.Cytotoxicityof thedrugswasmeasuredbyMTTassay.Thecoeffi-
cientofdruginteraction（CDI）wasusedtoanalysethesynergisticallysuppressiveeffectofdrugcom bination.Re-
sultsPaeonol（7.81～250mg/L）andcisplatin（0.625～20mg/L）hadinhibitoryeffectsontheproliferationof
humanhepatomacelllineSMMC-7721indose-dependentmanner.TheinhibitoryratesofSMMC-7721treatedwith
combinedagentsweresignificantlyhigherthanthosetreatedwi thPaeonolandcisplatinalone.Thesynergistically
suppressiveeffectwassignificant.ConclusionTheresultssugge stthatthecombinationofpaeonolandcisplatin
hasobviouslysynergisticallyinhibitoryeffectontheproliferatio nofhumanhepatomacelllineSMMC-7721.
MeSHpaeonol/pharmacology；cisplatin/pharmacology；drugsynergism；carcinoma，hepatocellular/drugtherapy
·56·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2006Feb；41（1）。