聚丙烯酰氨凝胶电泳

聚丙烯酰氨凝胶电泳
1聚丙烯酰氨凝胶电泳简介
聚丙烯酰氨凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称PAGE）是生物化学中常用的一种分离和检测分子量较小的蛋白质和核酸的方法。

它最早由Tiselius于1937年发明，后来逐渐发展成为一种基本技术手段。

2聚丙烯酰氨凝胶电泳的原理
聚丙烯酰氨凝胶电泳是利用匀质聚合物凝胶的特性、电场作用与分子大小排列顺序的差异进行分离。

聚丙烯酰氨凝胶电泳的凝胶是由丙烯酰酰胺和交联剂甲基双丙烯酰胺结合而成的三维网状物质，形成孔隙结构。

充当的一种分子筛。

该凝胶的表面有带负电的COO-，随着PH值增加，COO-中的负电荷逐渐减少，凝胶电动力学的性质随之变化，导致用于电泳的凝胶的pH 值必须通过Tris-HCl缓冲溶液调整。

PAGE是一种静电场分离技术，电场有助于将带电粒子(蛋白质、DNA)从一个极性电极迁移到另一个极性电极时，受到阻碍，从而使分子离散排列。

由于凝胶孔隙的尺寸和孔隙产生的纵向电场梯度，分子会依据其分子大小和电荷性质进行分离。

3操作步骤
1.制备凝胶和应用样品
根据实验需要制备聚丙烯酰氨凝胶。

决定内含钠离子浓度和凝胶孔隙大小的缓冲溶液通常是一种含有Tris-HCl(一种有机胺)及其盐的缓冲液，加入凝胶缓冲液，加入N,N-甲基双丙烯酰胺(MBA)、过硫酸铵(APS)、TEMED后等待凝胶溶液聚合成固态凝胶。

在凝胶中加入待检测样品，通常是一种脱水液。

2.电泳运行
将活性凝胶悬置在混合了缓冲液的电泳池中，然后使用电极连接电源，设置电场电位。

根据样品属性和分解调节选择正确的电流和voltage以及持续时间。

3.染色和影象分析
完成电泳实验后，将凝胶从电离中取出，洗涤并染色来观察分离效果。

常用的染色方法是银染色和染蓝。

4应用
聚丙烯酰氨凝胶电泳在分离和检测蛋白质、核酸及其它小分子化合物中非常有用。

它广泛应用于许多生物医学领域的研究中。

5局限性
虽然聚丙烯酰氨凝胶电泳几乎可用于所有生物化学分子的分离和检测，但其局限性也很明显，例如：
-必须知道待检测分子的大致分子量和电性质；
-不能分离和检测大分子量的蛋白质和复杂的核酸；
-检测灵敏度不高。

总体而言，聚丙烯酰氨凝胶电泳是生物医学研究中常用的一种技术，对于确定分子大小和电性质的研究非常有用。