白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究

白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究
黄素华;林标声;邱丰艳;庄文敏;廖少芬
【摘要】By using extracting method of ethyl alcohol combining with ultrasonic wave to carry out orthogonal experiments, an optimal flavone extracting process from patrina villosa juss was selected and an activity study on flavone was made. The results show that four factors have an effect on the content of flavone in the following order:the extracting time, ratio of solid to liquid, extracting temperature and the volume fraction of ethyl alcohol. The optimal extracting process is as follows: extracting time 2 h, extracting temperature 70℃, ratio of solid to liquid 1∶20 and 50% of the volume fraction of ethyl alcohol. The flavone extracting rate under the optimal extracting process is 9�98%. The flavone extracted from patrina villosa juss has an obvious antibacterial effect on staphylococcus aureus and escherichia coli and has a good anti-oxidation effect.%使用乙醇结合超声波提取法做正交实验选取白花败酱草总黄酮最佳提取工艺，并对黄酮进行活性研究。

结果表明：四个因素对黄酮含量影响的为提取时间＞料液比＞提取温度＞乙醇体积分数；最佳提取工艺是提取时间2 h、提取温度70℃、料液比（m∶V）1∶20、乙醇体积分数50％，最佳提取工艺下黄酮提取率为9�98％。

白花败酱草黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有明显的抑菌效果，并具有较强的抗氧化活性。

【期刊名称】《龙岩学院学报》
【年(卷),期】2016(034)005
【总页数】4页(P117-119,136)
【关键词】白花败酱草;黄酮;提取工艺;抑菌;体外抗氧化
【作者】黄素华;林标声;邱丰艳;庄文敏;廖少芬
【作者单位】龙岩学院福建龙岩 364000;龙岩学院福建龙岩 364000;龙岩学院福建龙岩 364000;龙岩学院福建龙岩 364000;龙岩学院福建龙岩 364000
【正文语种】中文
【中图分类】TQ929.2
败酱草始载于《神农本草经》，为败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草。

白花败酱草（Patrina villosa Juss，PVJ）又名苦菜、苦斋，因其具有的独特陈酱气和清苦味而得名，分布于我国华东、华中、华南及西南各地，福建为主产区之一。

白花败酱草因含有多种氨基酸、维生素和矿物质等有益成分而被广泛食用，是我国的传统野菜；白花败酱草具有清热利湿、解毒排脓、促进肝细胞再生、改善肝功能、增强抑菌、抗氧化和抗病毒等作用，是我国传统中药，临床上可用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、流行性腮腺炎等［1］。

败酱草含有较高的黄酮、皂苷、多糖等活性物质，已引起人们的重视。

白花败酱草中含有较多的黄酮类化合物，具有独特的药理作用。

目前，对白花败酱草活性物质的提取和研究主要有：李娜等对白花败酱草的总皂苷的提取及抗炎活性功能研究［2］；徐洁昕等对白花败酱草总皂苷、总黄酮、总糖的提取工艺进行了研究，但并未做进一步的相关功能研究［3-4］；白花败酱草水提取液对小鼠有镇静作用
［5-6］；白花败酱草乙醇提取液的抑菌作用［7］；白花败酱草黄酮对小鼠有体
内抗氧化作用［8］；白花败酱草叶挥发物具有明显的自由基清除活性［9］。

本
论文对白花败酱草进行了乙醇结合超声波提取黄酮，研究了总黄酮提取的最佳工艺，
计算在最佳提取工艺下总黄酮的提取率，并将所获得的总黄酮进行抑菌活性及体外抗氧化研究，这为白花败酱草主产区—福建，进一步开发败酱草资源，促进败酱
草在农业、食品、医药等领域中的应用具有积极的意义。

福建龙岩产的野生白花败酱草全草干草，用微型植物粉碎机粉碎，过40目筛，密封保存。

2.1 白花败酱草中总黄酮提取
2.1.1 白花败酱草中总黄酮的提取工艺流程
参照文献［10］。

精确称取白花败酱草粉末，按设定的料液比加入不同体积分数
的乙醇进行超声波试验。

选择料液比（m/v）、乙醇的体积分数、超声波时间、超声波温度四因素，进行L9（34）正交表试验（见表1）。

以总黄酮得率为指标进
行考察，确定白花败酱草黄酮最佳提取工艺。

2.1.2 白花败酱草中总黄酮样品的制备
依据正交设计表，安排试验、进行提样。

准确称取白花败酱草粉末5 g，加100 mL体积分数为50%乙醇溶液，于70℃恒温水浴中加热2 h，离心（4000 r/ min）10 min，浸提重复2次，合并上清液，抽滤后定容在100 mL容量瓶中备用。

2.2 提取样品中总黄酮含量测定
采用NaNO2—Al（NO3）3比色法。

在波长510 nm处测吸光值并记录数据。

根据芦丁标准曲线计算提取物总黄酮的含量，计算黄酮得率。

黄酮得率（%）=提取液中总黄酮质量/白花败酱草质量×100%
2.3 白花败酱草黄酮的抑菌研究
将保存的菌种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基活化后制成菌悬液，吸取0.1 mL菌悬液均匀涂布于平板上。

将经121℃ 、20 min高压蒸汽灭菌，浸泡在浓度依次为50.00、25.00、12.50、6.25、3.13mg/mL白花败酱草的黄酮提取液24 h后的圆形纸片（直径为6mm）贴于培养基表面，每个平板等距
离贴4片。

以无菌水浸泡的滤纸作为空白对照，提取物及对照组均设3个重复，置37℃恒温培养箱，根据抑菌圈的大小判断抑菌效果。

2.4 白花败酱草黄酮的抗氧化活性研究
研究白花败酱草对羟自由基、超氧阴离子自由基、亚硝酸盐清除作用，方法参考文献［10］。

3.1 芦丁标准曲线：Y=10.331X+0.00715，R2=0.99727。

3.2 提取黄酮正交实验分析
由表2可知，由以上四个影响因素中，对白花败酱草黄酮含量影响的顺序为：A＞C＞B＞D，即提取时间＞料液比＞提取温度＞乙醇体积分数。

得较优因素水平组合为A2B1C2D2，即提取时间2 h、提取温度70℃、料液比（m∶V）1∶20、乙醇体积分数 50%。

在较优提取工艺下重复 3次，黄酮提取率为9.89%。

3.3 白花败酱草黄酮抑菌实验
由表3可知，本实验用游标卡尺测定白花败酱草中黄酮的抑菌圈直径，白花败酱草干草中黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌都有较好的抑菌效果，当黄酮质量浓度为50 mg/mL时，对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌抑菌圈分别达到15.88、13.12 mm；对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比较明显。

且在一定范围内，随着黄酮浓度的升高，抑菌的效果也逐渐增强。

3.4 白花败酱草黄酮抗氧化活性结果
3.4.1 白花败酱草黄酮提取物对羟自由基清除作用的测定
由图1可以看出，随着白花败酱草黄酮质量浓度的增加，对羟自由基的清除作用也在加强，当质量浓度为0.010 mg/mL时，清除率可以达84.07%，而在同样质量浓度的条件下，对照物VC对羟自由基的清除率可以达50.07%。

由此可见白花败酱草提取物与Vc对比，其具有较强的清除羟自由基的活性功能。

3.4.2 白花败酱草黄酮对超氧阴离子自由基清除作用
由图2可知，随着白花败酱草黄酮质量浓度的逐渐升高，对邻苯三酚超氧化速率
的抑制作用也越强。

当白花败酱草黄酮溶液质量浓度为0.010 mg/mL时，对超氧阴离子自由基的清除率为77.66%，而此浓度下Vc的清除率为46.36%。

可见白
花败酱草黄酮对超氧阴离子自由基有较强的清除作用，且清除作用明显优于对照组Vc。

3.4.3 白花败酱草黄酮提取物对亚硝酸盐清除作用由图3可以看出，白花败酱草黄酮对亚硝酸盐具有较强的清除率，随着白花败酱草黄酮质量浓度的增大，对亚硝酸盐的清除作用增强。

当溶液质量浓度为0.010 mg/mL时，清除率为36.98%，而在此质量浓度下，VC的清除率为15.21%。

可见在同等条件下白花败酱草黄酮对
亚硝酸盐的清除率明显比Vc高。

白花败酱草总黄酮提取的最佳条件是：乙醇体积分数50%、提取时间2 h、温度70℃、料液比（m∶V）为1∶20，在此最佳提取条件下，黄酮的提取率为9.98%。

白花败酱草总黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有较好的抑菌效果，其中对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比较明显。

白花败酱草总黄酮在各抗氧化体系中均表现出较强的抗氧化活性，在0.002～0.01 mg/mL范围内，随着白花败酱草总黄酮添加溶液浓度的升高而各清除效果变强，且其抗氧化活性明显强于同一浓度的VC。

本研究为白花败酱草的药用和作为保健野菜的开发利用提供科学依据。

【相关文献】
［1］何福江，杨建萍，田义杰.败酱属植物化学成分与药理研究概况［J］.甘肃医药，1993，12（3）：161-163.
［2］李娜.白花败酱草化学成份、抗炎作用以及总皂苷提取纯化工艺研究［D］.成都：成都中医药
大学，2006.
［3］徐洁昕.中药材白花败酱有效成分的提取与分析研究［D］.湘潭：湘潭大学，2005.
［4］徐洁昕.白花败酱草总黄酮的提取研究［J］.广州食品科技，2004（4）：42-43.
［5］陈燕萍.白花败酱草水提液中枢抑制作用的研究［J］.中国药物与临床，2005，（5）6：439-
440.
［6］钟星明，白花败酱草提取物对小鼠睡眠功能和自发活动的影响［J］.中医康复研究，2004，（8）30：6688-6689.
［7］戴聪杰，林培庆.白花败酱草乙醇提取物的抑菌作用及其稳定性研究［J］.食品与机械，2011，（6）7：157-159.
［8］王莉萍，李武，胡奕军，等.白花败酱草总黄酮对小鼠抗氧化作用的影响［J］.江西医药，2015，（50）9：957-958.
［9］黄晓冬，黄晓昆，李洁桢，等.白花败酱叶挥发性化学成分及其DPPH¯自由基清除活性［J］.食品科技，2012，（37）10：187-190.
［10］孟良玉，兰桃芳，卢佳琨，等.败酱草中黄酮类化合物的提取及其抗氧化活性［J］.食品科学，2010，31（24）：214-217.。