透射电镜生物样本制备流程及注意事项

透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。

它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。

然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。

下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。

一、样品固定
1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。

常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。

2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。

通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。

3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。

二、样品剖解
1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。

超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。

2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。

离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。

三、样品固化
1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。

常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。

2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。

通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。

这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。

3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适
当的温度下进行固化。

树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度
填充。

四、样品切片
1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进
行切割。

切片应尽量均匀，薄度一般为70至100纳米。

2.收集和保存切片：切片应收集在铜或金切片网上，并注意避免
切片叠压和保持切片的干燥。

收集后的切片需要存放在干燥的环境中，以防止水分进入样品导致形变和退化。

五、染色和对比增强
1.染色：样品可能需要采取染色方法增加对比度和清晰度。

通常
采用的染色剂有酸性染料（如乙苯胺染料）、碱性染料（如重金属盐）和抗体标记等。

2.对比增强：通过添加重金属盐或聚合物来增强样品的对比度。

重金属盐的常用选择有铋、铅和铋/铅合金等。

六、将样品转移到透射电镜上
1.选择合适的载玻片：透射电镜样品通常采用薄的碳或铜（mesh）网，可以附着在窗玻璃上进行操作。

2.使用适当的工具移动样品：样品应小心地用钳子或刷子等工具
转移到透射电镜上，并注意避免伤害到样品。

七、透射电镜观察和成像
1.选择适当的工作条件：透射电镜工作时，应根据样品的特性选
择合适的电压、对比度和缩放倍数等工作条件。

2.进行观察和成像：根据需要，可以采用不同的模式进行透射电
镜样本观察，如相差对比、透射电子显微术（TEM）、扫描透射电子显
微术（STEM）等。

3.注意样品的稳定性：在观察和成像的过程中，应注意样品的稳
定性，避免样品的晃动和失真。

总之，透射电镜生物样本制备是一个复杂且关键的过程，需要精
确操作和细致处理。

以上流程和注意事项只是一个大致的指导，具体
操作应根据实际情况和样本特性进行优化和调整。