适用于本科实验教学的衣藻核遗传转化方法研究

照 ， ８ｈ黑 暗， 照 强 度 ：０ Ｉ ｌ ）以 １ ０ ｒｍ 震 荡 光 １ ｍｏ／ Ｓ ， ２ ｐ ｘ ｍ
培 养 ４ ５ｄ ～ 。然 后按 实 验 要 求 扩 大 培 养 或 分 装 至 一 定
体积培养 。
１４ 大 肠 杆 菌 培 养 与 质 粒 提 取 ．
个 眼点 ， 中最 重 要 的 一 个 特 点 是 具 有 一 个 占细 胞 总 其 体 积 ４ ％左 右 的 杯 状 叶 绿 体 。 莱 茵 衣 藻 培 养 方 法 简 ０
３ ０ ０ｏ ７１）
ห้องสมุดไป่ตู้
摘 要 对 莱 因衣 藻 衣 藻核 遗 传转 化 关键 技 术 中的 衣 藻 对 数 生 长 期 确 定 、 璃 珠 性 质 及 振 荡操 作 环 玻
节进 行 了研 究 ， 立 了既 简便 、 价 ， 建 廉 又稳 定 、 效 的 衣 藻 核 遗 传 转 化 系统 方 法 。 该 方 法 适 用 于 高 等 院 有 校 本 科 生 遗 传 学 实验 教 学 ， 涉及 的 实验 技 术 可成 为培 养 学 生 综合 实 验技 能 的 理 想 教 学 内容 。 其
图 １ 衣 藻 细 胞 密 度 与 ５ ０ ｎ 光 密 度 的 关 系 ０ ｍ
生物 工 程 有 限 责任 公 司 ： Ｄ Ａ、 和 酚 、 白胨 和 酵母 ＥＴ 饱 蛋
提 取 粉 均 购 自 鼎 国 生 物 公 司 ：ｃＲ Ｅ ｏ Ｉ和 Ｄ Ａ Ｍａｋｒ Ｎ ｒｅ
（ Ｌ ５ ０ ） Ｔ Ｋ Ｒ ｉｔ ｈ ｏ ｇ ｏ Ｔ Ｄ １ ０ ０ 自 ａ ａ ａＢｏｅ ｎ ｌ ｙＣ ． Ｄ；Ｒ ａｅ购 ｃ ｏ Ｌ Ｎｓ
型受体 藻恢 复生 长所依 赖 的基 因，如 能 合成 精 氨酸 的精
氨 酸一 珀 酰 裂 解 酶 （ｒｉｉ０ｕ ｃ ａ ｙｓ， Ｒ 基 因， 琥 ａｇ ｎ ｓｃｉ ｔ ｌａｅＡ Ｇ） ｎ ｎｅ 获得外 源 Ａ Ｇ基 因转 化 的精 氨 酸缺 陷型 受体 藻， Ｒ 能在无
精 氨 酸平板 上生 长， 藻 落 。 他感 兴趣 的外 源基 因可 形成 其 与这些 筛选 标记 基 因融合 ， 起 转入 衣 藻细胞 核 中表 达 一
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 来 源 转 化 实验 所 用 受 体 细 胞 为 细 胞 壁 缺 ． 陷 的 精 氨 酸依 赖 型 莱 茵 衣 藻 Ｃ ５ Ｗ１ ，转 化 所 用质 粒 为
Ｐ Ｒ ７８ （ 有 精 氨 基琥 珀 酸 裂 解 酶 基 因 ） 均 由德 Ａ Ｇ． ３ 带 ， 国弗 赖 堡 大学 Ｃ ｒ ｔｐ ｅ ｋ教 授 惠 赠 。 ｈｉ ｏ ｈ Ｂ ｃ ｓ １２ 试 剂 琼 脂糖 购 自 Ｐｏ ｇ － ｒｍｅａ公 司 ：ｒ 购 白天 象 人 Ｔｉ ｓ
关 键 词 莱茵 衣 藻 遗 传 转 化 本 科 实验
莱 茵 衣 藻 （ ｈａ ｄ ｍ ｎ ｓｒｉｈ ｒｔ） 也 称 莱 哈 衣 Ｃｌ ｍｙ ｏ ｏ ａ ｅ ａｄｉ ， ｎ ｉ 藻 ， 广 泛 用 于 遗 传 学 、 物 分 子 生 物 学 等 领 域 基 础 是 植
研 究 和应 用 研 究 的单 细 胞 真 核 绿 藻 。 藻 的结 构 简单 ， 衣 原 生 质 膜 紧 贴 着 细 胞 壁 ， 有 两 根 鞭 毛 ， 面 具 有 一 具 侧
霉Ｘ 塞（ 量０ ） ７ ５ ０ ０
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自华 美 生物工 程 公 司； 他试 剂均 为 国产 分析 纯 。 其
１３ 衣 藻 培 养 方 法 衣 藻 培 养 液 Ｔ Ｐ配 制 参 照 文 献 ． Ａ （ 体 成 分 与浓 度见 表 １ 列 ） 乙 酸调 ｐ 至 ７０ 固体 具 所 ， Ｈ ．，
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２０ 年 第 ４ ０６ １卷 第 １ １期
生
物
学
通
报
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适用于本科 实验教学 的衣藻核遗传转化方法研究
耿 云 红 奇 日迈 励 图 鲁 迪 红 池 友 健 贾 宏 赵 素 然 白 艳 玲
（ 开 大 学 生 命 科 学 学 院 天 津 南
单 ， 似 于 微 生 物 ， 长 周 期 相 对 于 其 他 真 核 生 物 比 类 生 较 短 ， 宜 条件 下 细 胞 分 裂 周 期 只 有 ６ ｈ 适 。 衣 藻 能 进 行 光 合 作 用 ． 目前 唯 一 能 特 异 性 地 对 是 细胞 核 、 叶绿 体 和 线 粒 体 基 因组 进 行 遗 传 转 化 的真 核 生 物 ． 且 已发 展 了多 种 衣 藻 遗 传 转 化 方 法 ． 基 因 而 如 枪 法 、 璃 珠搅 拌 法 和 电转 化 等 。 玻
衣 藻 核 转 化所 使 用 的筛 选 标 记 大 多 数 是 营养 缺 陷
按文献方法培养 大肠杆菌和提取转化用 质粒。 ２ 结果 与讨 论 ２１ 莱 茵 衣 藻 Ｏ ． Ｄ值 与 细胞 密度 的关 系 以无 衣 藻 的 液 体培 养基 为空 白， ５ ０ ｎ ６ ０ ｎ 可 见 光测 定 液 体 在 ０ ｍ～ ０ ｍ 培 养衣 藻 的吸光 度 （ ＯＤ值 ） 同时， 已测 吸 光度 的衣 藻 。 对 培 养液 进行 显微 细胞 计 数 。图 １ 图 ３分别 为 在统 一 的 至 衣 藻 培 养 条件 下 ，在 ５ ０ｎ ５ ０ｎ 和 ６ ０ｎ ０ ｍ、４ ｍ ０ ｍ下 测 定 的液体 培养 衣藻 光 密度 值 （ Ｄ） 细胞 浓度 的对应 关 系 ， Ｏ 与 结果 显 示 ， 在光 密 度 值为 ０ ２１范 围 内， 胞 浓 度 与光 密 ～． 细 度 值 基 本 成 正 比。５ ０ｎ ６ ０ｎ 光 密度 值 为 ０５ ２１ ０ ｍ～ ０ ｍ ．～ ． 在 对应 的衣 藻对 数 生长 期 细胞 浓度 １６ １ ７ ０ ０ ｍＬ范 围 内 。 ／