6株猪圆环病毒2型山东分离株ORF2基因的克隆与序列分析

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Ⅱ型圆环病毒山东泰安株的分离鉴定及系统进化分析

ｔｏｉｎ，ｄｉｅｅｔｔｓｕｓｏｉｉｇｐｇｅｓ，ｗｈｃｒｒｍｉｎＳａｄｍｇｐｏｉｃｆｒｎｉｓｅｆａｌｎｉｌｔｆｉｈｗｅｅｆｏＴａａｈｎ（ｒｖｎｅ，ｗｅｅｄｔｃｅｏｏｃｎｉ— ｒｅｅｔｄｆｒｐｒｉｅｃｒ
ＡｂｓｒｃＷｉｈｅｐｏｎｉｅｔａｔ：ｔｔｅｈｌｆａｔｇｎ— ｃｐｕｅｅｚｍｅ—ｌｎｅｍｍｕｏｏｂｎｓａｎｏｙｒｓｈｉｅｃｈａｔｒｎｙｉｋｄｉｎｓｒｅｔａｓｙａｄｐｌｍｅａｅｃａｎｒａ —
一
Ｔ—ＯＦ、ＭＤ８一Ｔ—ＯＦＲ１ｐ１Ｒ２和ｐ１ＭＤ８一Ｔ—ＰＶ。测序结果显示，Ｃ２所分离病毒的ＯＦ、Ｒ２和全基因组序Ｒ１ＯＦ
列长度分别为９５ｐ７２ｐ和１６ｂ。ＤＡｔｒ４ｂ、０ｂ７７ｐＮＳａ生物学软件分析发现，Ｃ２分离毒株与参考株的全基因组同ＰＶ
ｌＳ０ＬＡ１１ ’０ＮＡＮＤＤＥＮＴｌ ’ Ｉ重ＩＣＡＴｌ０Ｎ ’ ｏ重ＰＣＶ２Ｓ ’ Ｄ１ＡＤＰＨＹＬｏＧＥＮＥＴｌＡＮＡＬＹＳＩＣＳ
ＬＯＵｏｇ— ｚ，ＷＡＮＧａ — ｈＺｈｎｉＴｉｎｕ，ＤＯＮＧＬｉ—ｌｉＬＩＳｎｎ，Ｕｉ—ｄａｇｎ
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山东农业大学学报（自然科学版）０７８（）０５４，２０，３４：５９— １
ＪｕａｏｈｎｏｇＡｒｕｔａＵｉｒｉ（ａｕａＳｉｃ）ｏｒｌｆａｄｎｇｃｌｒｌｎｖｓｙＮｔｒｌｃｎｅｎＳｉｕｅｔｅ

猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析

（龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室，黑黑龙江大庆１３１）６３９
摘要：为探讨原核表达的ＰＶ２ＯＲ２ＯＲ１串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可Ｃ一Ｆ－Ｆ
１２方法．
本研究利用ＤＮＡ重组技术将去除ＮＬＳ的Ｏ２ＲＦ
（ＮＩ — Ｆ）Ｏ１基因串联克隆到表达载体ｄＯＲ２与ＲＦＳ
动物医学进展。００，１２：卜４２１３（）４４
ＰｒｒｓｎＶｅｅｉａｙＭｅｃｎｅｏｇｅｓｉｔｒｎｒｄｉｉ
猪圆环病毒２型ＯＲＦ一２ＯＲＦ１串联基因的原核表达及活性分析
闻晓波，冬野，树东，旭华，晓娟，李李冉李邵磊，王密，范泽，焕民，喜林，宏波朴杨侯倪
一
农垦大学动物科技学院预防兽医学重点实验室保农垦大学动物科技学院预防兽医学实验室构建。
存，ＭＤ～８／Ｃ一ｐ１ＴＰＶ２大庆分离株质粒由黑龙江八
一
等］。病原学及血液学调查表明该病毒在世界各地广泛存在，重危害世界养猪业的发展｛严。ＰＶ一Ｃ２因组全长１７７ｂ基６ｐ或１７８ｂ，包含１６ｐ共１个开放阅读框（Ｆ，中ＯＲ１０Ｒ２是两个最大的ＯＲ）其Ｆ、Ｆ开放阅读框，别编码复制相关蛋白（ｅ分Ｒｐ蛋白）和

两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析

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动物医学进展。０７２（１：－２０，８１）４７
ＰｒｒｓｎＶｅｅｉｒｅｉｉｏｇｅｓｉｔｒｎａｙＭｄｃｎｅ
两的克隆和序列分析
竭综合征（Ｐｓｗｅｎｎｌｓｓｅｅｗａｔｇ物学、ｏｔａｉｇｍｕｔｙｔｍｉ — ｉｓｉｎ流行病学、致病机理等方面的研究奠定基础。
收稿日期：０７０ —０２０ —８２基金项目：东省自然科学基金（０６７）农业部制标项目广５０６８；
２．ＮａｉｎｌＫｅｂｒｏｙｏ，ＡｇｉｕｔｒｔｏａｙＬａｏａｔｒｒｃｌｕｅＭｉｒｂｏｏＹ。ａｈｎｃｏｉｌｇＨｕｚｏｇＡｇｉｕｔｒｉｒｉＹ，ｕａＨｕｅ，３００，ｉａ）ｒｃｌｕｅＵｎｖｓｔＷｈｎ，ｂｉ４０７Ｃｈｎｅ
作者简介：逸民（９４）男，南益阳人，士研究生，何１８一，湖硕主要从事病毒分子生物学研究。＊通讯作者
ＰｒｐａａｉｎａｄＩｅｉｉａｉｎＯｏｏｌｎｌｅｒｔｏｎｄｎｔｆｃｔＯｆＭｎｃｏａ
何选民，玉均，全会，翠花，宗喜，留五，少方，罗潘吴曹孔李张桂红
（南农业大学兽医学院，东广州５０４）华广１６２
摘要：根据ＧｅＢｎ中猪圆环病毒２型（Ｃ２Ｏ２基因序列，计一对引物，分离的ＰＶ一ｎａｋＰＶ一）ＲＦ设从Ｃ２ＧＺ株、ＨＮ株的细胞培养物中扩增出Ｏ２基因（０ｐ。将此基因片段克隆入ｐ１一载体，ＲＦ７２ｂ）ＭＤ８Ｔ筛选获得重组质粒ｐ－Ｆ，ＭＤＯＲ２并对其测序。结果表明，所克隆的ＯＲ２基因与其他ＰＶ２的Ｏ２基因核苷酸序ＦＣ一ＲＦ列同源性在９．％～９．％之间，导的氨基酸序列同源性在８．％～９．％之间。０６９６推８９８７

猪圆环病毒2型四川分离株ORF2基因的克隆与序列分析

ｅｓ，ＣａｅＰＶＡＤ［。由于ＰＶ一）７］Ｃ２感染可使感染猪免
１１１毒株、．．菌种及试剂
ＰＶ２ｃ２１株和Ｃ一ｓｈ００毒
Ｅ．ｏｉ由四川农业大学动物检疫研究室保存；ｃｌＤＨ
ｄＮＴＰＭｉｔｒ、ｘｕｅＤＮＡａｅＭｋｒＤＬ０２００和ｒａＴＭＴｑ
动物医学进展。０１３（）２ —４２１，２６：９３
ＰｏｒｓｎＶｅｅｉａｙＭｅｉｉｅｒｇｅｓｉｔｒｎｒｄｃｎ
猪圆环病毒２型四川分离株ＯＲＦ２基因的克隆与序列分析
杨泽晓刘宁。王印姚学萍张彦明，增岐汪开毓 ¨ ，一，，，，杨，韩茜
核苷酸氨基酸序列同源性分别为８．～９．和８．～９．；２株ＰＶ一８４９７７２９６与Ｃ１ＯＲＦ（Ｕ３１０、２Ｇ７９８Ｆ４５２）Ｊ７１９的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为５．～５．和６．～６。；Ｃ２ｓｈ００８７９５２８４５ＰＶ－ｃ２１
１１２引物根据ＧｅＢｎｈｔ：／．．ｎａｋ（ｔ／ｗｗｗ．ｃｉｐｎｂ．
摘要：临床分离毒株ＰＶ２ｓｈ００ＯＲ２基因全序列进行了克隆和序列分析。结果表明，Ｃ－对Ｃ－ｃ２１ＦＰＶ２ｓｈ００Ｏ２全基因共７５ｂ，ｃ２１ＲＦ０ｐ编码２４个氨基酸，ＧｅＢｎ３与ｎａｋ发表的２１株ＰＶ－Ｃ２的Ｏ２参考序列的ＲＦ

猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因的克隆与表达

ＷＡＮｈｎ－ｕ，Ｎｉｇｈａ，Ｏａ —ｅ，ＩＮＧＨａｊｎ，ＧＳｅｇｙＹＡＪｎ－ｕＫＮＧＦｎｄＪａＡｉｕ－
ＺＨＡＮＧａｇｇｎＨＵＡＮＧｉ－ａＣｈｎ－ｏｇ。Ｙｎｙｏ
ｐＴ２ｂＲ２Ｅ．２／Ｆ，转化大肠杆菌Ｂ２（Ｅ）ＯＬｌＤ，经ＩＴＰＧ诱导表达，收集菌液进行ＳＳＰＧＤ．ＡＥ分析。确定重组蛋白主要以包涵体的形式表达，包涵体洗涤溶解后，采用Ｎ离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白，逐步透析法进行复ｉ性：Ｗｅｔｎｌ和ＥＩＡ分析结果表明Ｒｐ蛋白和Ｃｐ蛋白均能与猪圆环病毒２型阳性血清发生特异性反应。ｓｒｏｅｂｔＬＳｅａ
ａｃｒｎｇｔＣＶ－ｓｑｎｅｉｎａｋａｄｌｎｅｉｔＥＴ－２ｂ，ｒｐｃｉｅｙ．ＴｈｅｓｌａｏｎｓｒｔｒｒｎｓｏｍｅｎｔｃｏｄｉｏＰ２ｅｕｅｃｎＧｅＢｎｎｃｏｄｎｏｐ２ｅｓｅｔｖｌｅｒｕｔｎｔｃｔｕｃｓｗｅｅｔａｆｒｄｉｏ
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第２卷第ｌ期９２
２０年０７ｌ月２
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
中国预
防兽
医学报
Ｖｏ．９ＮＯ１１．．２２
Ｄｅ．２７ｃ００
ＣｈｎｓｏｕｎａｆＰｒｖｎｔｔｒｎｒＭｅｃｎｅｉｅｅＪｒｌｏｅｅｉＶｅｅａｙ－ｄｉｉｖｅｉ

猪圆环病毒2型基因组DNA的结构与功能研究进展

猪圆环病毒2型基因组DNA的结构与功能研究进展赵燕;喻正军【摘要】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒病相关疾病的主要致病原,可损伤宿主的免疫系统,加剧一些细菌病和病毒病感染的临床症状,在全球养猪业中造成巨大损失.PCV2的基因组DNA含有11个开放阅读框(ORFs),其中至少有7个ORFs编码的蛋白质分子质量大于5 ku,但目前只有5种编码的蛋白(Rep、Rep’、Cap、ORF3和ORF4)发现于PCV2复制过程中.作者概述了当前PCV2基因组DNA的结构与功能,阐明PCV2的病原学,为防控PCV2感染提供科学依据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2016(043)005【总页数】6页(P1176-1181)【关键词】猪圆环病毒2型;基因组DNA;开放阅读框;病毒编码蛋白【作者】赵燕;喻正军【作者单位】湖南中岸生物药业有限公司,长沙410199;湖南中岸生物药业有限公司,长沙410199【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的一系列疾病的总称[1]，主要包括猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(PDNS)及繁殖障碍等疾病。

PCV2感染可严重破坏易感动物的免疫系统，产生严重的免疫抑制，且易诱发多种细菌及病毒的协同或继发感染，给该病的防控带来巨大困难[2]。

1991年，猪圆环病毒病首次发现于加拿大，之后迅速在北美洲、南美洲、欧洲、亚洲、大洋洲和非洲流行，严重威胁生猪养殖业的可持续发展。

中国自2001年首次分离到PCV2以来，山东、浙江、山西、广东、河南等省先后报道该病发生，近年来由PCV2引起的PMWS在中国相关养猪地区呈现暴发流行趋势，对中国的生猪产业造成巨大经济损失[3]。

PCV2是圆环病毒科的一种无囊膜、二十面体对称、共价闭合、环状、单股DNA病毒，直径平均为17 nm，是目前发现最小的动物病毒[4]。

猪2型圆环病毒辽宁分离株ORF2基因真核表达载体的构建及鉴定

具有来源于人巨细胞病毒ＣＭＶ的复合启动子
ＴＣＣＡＡｇ－３ ’ ，ＯＲＦ２下游引物：５＇－ｇＣｇｇＡＴＣＣＴＴＡ—
ＡｇｇｇＴＴＡＡｇＴｇ－３ ’ 。
‘ ：ｉｉＵ哪
所以其免疫原能够非常的纯化。
吉林畜牧善医２０１３年第４期
疫小鼠，试验结果表明，第ｌ周小鼠便开始产生１．１．２酶与试剂特异性抗体，第４周体内抗体水平达到最高，抗体可维持１Ｏ周以上。脂质体转染试剂（１ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭＲｅａｇｅｎｔ）购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的
猪２型圆环病毒（ＰＣＶ２）可引起断奶仔猪多Ｃａｐ蛋白的免疫功能，本研究在对辽宁分离株系统衰竭综合征（ＰＭｗＳ），该综合征以多系统进ＯＲＦ２基因进行克隆的基础上，以ｐｌＲＥＳ为真核表行性衰竭为特征，可严重影响仔猪的生长发育。达载体，以ＰＣＶ２的ＯＲＦ２基因为目的基因，构建ＰＣＶ２主要引起淋巴组织的病变，引起免疫抑制，
。：啊
吉林畜牧善医２０１３年第４期
猪２型圆环病毒辽宁分离株ＯＲＦ２基因真核表达载体的构建及鉴定

猪圆环病毒2型的全基因克隆和序列分析

１２１引物的设计与合成．．
扩增获得４株Ｐ＿ＣＶ２的全基因组序列，分别命名为ＳＤＮｙＰＶ２ＳＩＰＶ一、ＨＢｄＰＶ一、ＳＮ— Ｃ－Ｃ－、ｈ）Ｃ２Ｉｂ — Ｃ２ＧＬＰＶ一２经测序确定长度均为１７７ｂ。应用ＤＮＡＳａ序列分析表明，，６ｐｔｒ４个ＰＶ－Ｃ２分离株与国外部分分离株的
工生物工程技术服务有限公司产品；质粒提取试剂盒
为博大泰克公司产品；限制性内切酶Ｈｉｄ］ＢｍＨＩｎ］、ａ］为美国Ｐｏｇｒｍｅａ公司产品；菌株Ｄ５为国家口蹄疫Ｈａ参考实验室保存。其他试剂均为国产分析纯。
１２方法．
定基础。
命名的，病毒属于圆环病毒科圆环病毒属成员，该是迄今发现的最小的动物病毒。该病毒分为两种基因
型，ＰＶ一即Ｃ１及ＰＶ一。自圆环病毒被发现以来，Ｃ２
在世界多个国家都有分离毒株出现，证明ＰＶ－并Ｃ２是断奶仔猪多系统衰竭综合征（ＭＷＳ的病原之Ｐ）
１１２试剂、粒和菌种ＰＲ试剂，Ｎ片段回．．质ＣＤＡ
收试剂盒，ＴＸｇｌＰ１一ｅｔｒＩＧ，－ａ，ＭＤ８ＴＶｃ为宝生物工Ｐｏ
程（大连）有限公司产品；Ｎ提取试剂盒为上海生ＤＡ
（国农业科学院兰州兽医研究所．畜疫病病原生物学国家重点实验室，业部畜禽病毒学重点开放实验室。中家农国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州７０４）３０６

2株猪圆环病毒ORF2基因的克隆测序

猪圆环病毒（ｏｃｅｃｃｖｒｓＰＶ）圆环病菌水溶解ＤＮＡ沉淀，Ｏ℃保存备用。Ｐｒｉｉｏｉ，Ｃ是ｎｒｕ一２毒中最小的病毒，囊膜，股环状Ｄ无单ＮＡ病毒，１４Ｐ．ＣＲ扩增
ＰＶ２主要导致一种以断奶仔猪呼吸急促困难、Ｃ－腹ＰＲ反应体系采用２Ｌ，１ ×ＰＲｂｆｒＣ５取０Ｃｕｆｅ泻、血、贫明显的淋巴组织病变和进行性消瘦为特征２Ｌ，ｄＰＬ，２个引物各１／．５ＮＴ２，Ｌ的一种疾病。ＰＶ－的基因组为１６ｂ或（Ｏｐｌ／）５Ｕ／ＬＴｑＤＣ２７８ｐ１ｍｏ／ｘ，ａＮＡ聚合酶０２Ｌ，Ｌ．７７ｂ，Ｃ－６ｐＰＶ２通常含有１１个开放阅读框（ｐｎ加灭菌超纯水补至２Ｌ。加入提取的病毒核酸ｏｅＯｒａｉｇｆｍｅＯＲ）ｅｄｎａ，Ｆ。位于正链上的最大的ＯＲＦ５Ｌ。以下条件反应：５ ℃预变性５ｍｉ；４℃ ｒ１按９ｎ９
同源性却只有９．。而荷兰分离的ＮＬ２３＿
ＰＭＷＳ２株与中国分离株的同源性却在－
９以上，明中国流行的ＰＶ２和国外分仿各抽提１次，清液中加入１ｌ积的３ｍｏ／９表Ｃ－上／Ｏ体ｌＬ离株有密切关系。ＮＡ（Ｈ５）和等体积的异丙醇，温放置ａｃｐ．２室

猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序列分析

（ｉｈｒ，９２，Ｔｓｅ等１８）含有一条单链、ｃ环状ＤＮＡ，病毒粒子直径平均为１ｍ（ｅａｘ等，００Ｍｅｈｎ７ｎＦｎｕ２０；ｅａ
等，９７。根据ＰＶ的致病性、原性，ＰＶ分１９）Ｃ抗将Ｃ为ＰＶ１和ＰＶ２两个血清型（ｅａＣＣＭｅｈｎ等，９７１９；Ｈｅｓ等，０８Ｏｌｅａ等，０７，Ｃｓｅ２０；ｖｒ２０）ＰＶ１最初从污
（．林大学畜牧兽医学院，春１吉长１０６；．南农业大学动物科学技术学院，明３０２２云昆６００；５２１
３军事医学科学院军事兽医研究所，长春．
１０６；．３０２４云南省蒙自县文澜镇畜牧站，自６１Ｏ）蒙６ｌＯ
奶仔猪多系统衰竭综合征（ｏｔｅｎｎｌｓｓｐｓｗａｉｇｍｕｔｙ — ｉ
ｔｍｉｗｓｉｇｓｎｒｍｅＰｅｃａｔｙｄｏ，ＭＷＳ的主要病原，ｎ）而且还与育肥猪的猪皮炎和肾病综合征（ｏｃｅｄｒ — ｐｒｉｅｍａｎ
与南美洲分离株核苷酸同源性最低（２０，典分离株核苷酸同源性最高（９４）这可能与云南省猪种引进有关。９．％）瑞９．分析
中图分类号：７Ｑ８文献标识码：Ａ文章编号：６１７３（０００ — １３０１７－２６２１）５００ — ５

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展1. 引言1.1 猪圆环病毒2型概述猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病的病毒，属于环状病毒科。

PCV2是一种小型非包膜的双链DNA病毒，病毒颗粒直径约17-25nm。

PCV2主要感染猪，特别是生长发育中的猪，并可引起多种免疫抑制相关疾病，严重影响了猪的生长发育和生产性能。

PCV2感染广泛分布于全球范围内，给猪养殖业造成了巨大的经济损失。

PCV2感染的临床症状主要包括疲劳、厌食、呼吸困难等，重症时还可导致猪的死亡。

随着猪养殖业的快速发展和养猪密度的增加，PCV2感染的发病率也在逐渐上升。

加强PCV2的检测和研究对于控制和预防猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病具有重要意义。

通过对PCV2的检测技术和研究进展的深入探讨，可以为疫苗研制和防疫工作提供重要的参考和支持。

【字数：276】1.2 研究意义猪圆环病毒2型是一种广泛存在于猪群中的病原体，能够引起猪圆环病毒病，严重危害猪的生产业。

猪圆环病毒2型检测技术的研究意义在于及早发现并控制病毒传播，保障猪群的健康和生产安全。

通过对猪圆环病毒2型检测技术的研究和应用，可以提高疾病的早期诊断率和治疗效果，降低疫情的传播风险，减少养猪业的经济损失。

研究猪圆环病毒2型的检测技术还可以为相关病毒的检测提供借鉴和参考，推动病毒学领域的发展。

加强对猪圆环病毒2型检测技术的研究具有重要的意义，有助于提高我国养猪业的竞争力和可持续发展能力。

【研究意义】2. 正文2.1 猪圆环病毒2型检测方法猪圆环病毒2型（PCV2）是一种严重危害猪只健康的病毒，因其高度变异性和传染性而备受关注。

为了及时发现和控制PCV2感染，研究人员开发了多种检测方法。

1. 病毒核酸检测：PCR技术是目前应用最广泛的检测方法之一。

通过设计特异性引物，可以实现对PCV2基因组的扩增和检测，具有高灵敏度和特异性。

2. 免疫学检测：病毒抗原检测通过检测病毒在体内产生的蛋白质来确认感染情况。

猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

Ｓ２０ｍｙｌｍａｃｌｎｐｅｎｃｌｓｏＡＬＢｃｍｉｅｉｐ／ｅｏｅｌａｄｓｌｅｅｌｆＢｓ／ｃｍｍｕｉｅｔｕｉｅｅｏｉａｔｐｏｅｎｎｚｄｗｉｐｒｆｄｒｃｍｂｎｎｒｔｉ．Ｔｈｈｉｅ
中图分类号：８Ｑ７６文献标识码：Ａ文章编号：５９６０（０７１－０９００２ —０５２０）１００ — ３
Ｐｒｐｒｔｏｎｈｒｃｅｉａｉｎｏｏｏｌｎａｎｉｏｉｓａａｎｔｅａａｉｎａｄｃａａｔｒｚｔｏｆｍｎｃｏｌａｔｂｄｅｇｉｓ
ＰＣＶ２ＯＲＦ２ｒｃｍｂｎｎｔｐｏｅｎ＿ｅｏｉａｒｔｉ
ＷＥＩＷｅ，ＹＡＮＧｎｃｎ，ＧＵＯｎ，ＣＨＥＮｎｈｇ，ＺＨＡｉＨａ — ｈｕＸｉＹａ — ｏｎＺｈｅｌｎｎ－ｉ
（ｙＬａｏａｏｙｏｒｖｎｉｅＶｅｅｉａｙＭｅｉｉｅｏｉｉｔｙｏｒｃｌｕｅＫｅｂｒｔｒｆＰｅｅｔｖｔｒｒｄｃｎｆＭｎｓｒｆＡｇｉｕｔｒ，ｎ
ＥＬＩＡｉｅｆａｃｔｓｗｅｅ１：２０４Ｓｔｔｒｏｓｉｅｒ．８× １，：２６× １，：１２８× １，：２５０１．５０１．０１．６× １．Ｉｅｔｒ — ｌ０ｎａｗｓｅｎｂＱｔ
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ＣｉｅｅＪｕｎｌｆｔｒａｙＭｅｉｉｅｈｎｓｏｒａｏｅｉｒｄｃｎＶｅｎ

猪圆环病毒II型ORF2基因克隆及其在E.coli中的融合表达

ｍｅｔａｅｏｔｏｒｈｎｉｅｃｎｒ１ｎｓｗｌａｆｒｉｃｍｐｅｅｓｏｔ．ｓｓｖｏＫｅｒＨ２；０ＲＦｅｅＬ２；Ｐｏａｙｔｘｒｓｉｎｙｗｏｄｓ２ｇｎ；Ｉ－ｒｋｒｏｉｅｐｅｓｏｃ
猪圆环病毒Ｉ型（ｏｉｉｏｒｐ２Ｐｖ）ＩＰｒｎｃｃｉｓｙｅ，Ｃ２是仔猪ｃｅｒｖｕｔ断奶后多系统哀竭综合征（Ｓ的病原。它可以引起断奶）仔猪发生衰竭、亡，为严重的是ＰＶ的感染可以造成免死更Ｃ２疫抑制，引起其他各种病原的继发感染＿，成的间接损失１造Ｊ难以估计。目前，Ｃ２己经成为严重阻碍养猪业发展的主ＰＶ
要病原之一。ＰＶＣ２全基因长１６ｐ或１６ｐ有１个开放性阅读７ｂ７８ｂ，１７
１材料与方法
１１质粒和菌种．
ＰＴ２Ｉ－Ｅ３／Ｌ２质粒（Ｇ含
＋Ｉ－）宿主Ｌ２、
菌Ｊ１、Ｍ０载体ＰＶ２由河南省生物工程技术研究中心惠赠。９Ｂ２０
ＰＶ２．Ｓ－ＡＧａｄＷｅｔｒｌｔａｓｙｎｉｔｈｔｔｅｆｓｏｒｔｉｓｗｉｌｃｌｒｗｅｇｔｏ４ｋｗｅｅｅｑｉｎｌｘｒｓｅｉＢ：ＤＳＰＥｎｓｅｎｂｏｓａｓｉｄｃｅｔａｕｉｎｐｏｅｎｔｍｏｅｕａｉｈｆ４ＤｒｆｃｅｔｅｏｅｓｄＥ．ｃｌａｄｈｈｌｙｎｏｉ
定了基础。
关键词圆环病毒２；Ｒ２因；－；型ＯＦ基Ｉ２原核表达Ｌ中图分类号Ｑ８７５文献标识码Ａ文章编号０１— ６ｌＯ７２一８Ｏ０５７６１（Ｏ）Ｏ９一２２８Ｏ

猪圆环病毒Ⅱ型ZZ株ORF2基因的扩增、测序

关键词： Ⅱ型圆环病毒，Ｆ猪ＯＲ２基因；测序中图分类号：８２６９２￥５．５．文献标识码：Ａ文章编号：０８— １１２０）１０１２１０３１（０８０ —００一Ｏ
ＡｍｐｉｙａｄＳｑｕｎｃｆＯＲＦ２ＧｅｆＴｗｏＰＣＶ一２Ｓｔａｎｓｌｆｎｅｅｅｏｎｅｏｒｉ
毒由郑州牧业工程高等专科学校中心实验室保存；扩增模板为经ＰＫ一１５细胞传代，其细胞毒作为取
提取核酸的材料。各种限制性内切酶、ＮＡ连Ｔ４Ｄ接酶、子量标准Ｍａｋｒ购自ＴＫａａ公司，分ｒｅａＲＴａＤｑＮＡ聚合酶、ＮＴｓ自上海生物工程公司，ｄＰ购其它试剂均为进口或国产分析纯试剂。１２引物设计根据Ｇｅｅａｋ中的ＰＶ一２国．ｎｂｎＣ
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第２８卷第ｌ期２００８年２月
郑州牧业工程高等专科学校学报
ＪｕｎｌｆＺｅｇｈｕＣｌｇｆＡｎｍａＨｓａｄｙＥｎｉｅｒｎｏｒａｈｎｚｏｏｌｅｏｉｌｕｂｎｒｇｎｅｉｇｏｅ
ＷＡＮＧｎ，ＺＨＡ０ｈａ — ｂ，ＬＵｉｎ— ｚｏＹａＣｕｎｉＪａｈｕ
（ｈｎｚｏｏｌｇｆＡｎｍａｕｂｎｒｎｔｒｎｒ，ｈｎｚｏ，５０１ＺｅｇｈｕｃｌｅｏｉｌｏＨｓａｄｙａｄＶｅｅｉａｙＺｅｇｈｕ４００１）

2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达

2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟【摘要】本研究克隆、原核表达了猪圆环病毒2型Cap蛋白.根据新分离毒株PCV2-871的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去掉核定位信号的OBF2基因,命名为pcv-581,利用引入的双酶切位点BamHI/HindⅢ将其连接到表达栽体pQE-32中,命名为pQE-pcv581转化大肠杆菌M15中,经IPIG诱导表达和SDS-PAGE 鉴定,发现去核定位信号的OBF2片段可以大量表达.【期刊名称】《吉林农业科技学院学报》【年(卷),期】2010(019)003【总页数】4页(P3-6)【关键词】猪圆环病毒2型;Cap蛋白;原核表达【作者】梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟【作者单位】吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院动物医学学院,吉林,132101【正文语种】中文【中图分类】S85猪圆环病毒2型(Porcine circovirus2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome,PMWS)等相关疾病的主要病原。

该病1991年在加拿大首次报道[1],主要感染5～12周龄仔猪,致死率可达40%[2],PCV2在淋巴细胞增殖,可引起免疫细胞的凋亡,损伤猪体的免疫系统造成免疫抑制[3],易造成PPV、PRRS及其他疾病的继发感染[4],给全世界养猪业带来巨大的经济损失[5]。

PCV2是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员[6],为单股环状负链无囊膜的DNA病毒,为已知的最小动物病毒之一,约17～20nm,二十面体对称。

根据病毒的抗原性和基因组成不同,可分为2种基因型或称血清型,即 PCV1型和 PCV 2型。

PCV1无致病性[7];PCV2具有致病性[8],基因组全长1767bp或1768bp,包括11个读码框,其中ORF2编码病毒的主要结构蛋白—核衣壳蛋白(Cap)[9],其N端包含一个由41个氨基酸残基组成的的核定位信号(Nuclear loca-tion signal,NLS),与PCV 2在细胞核内定位有关[10]。

猪圆环病毒Ⅱ型新疆分离株全基因组及ORF2基因的克隆与测序

Ｃｏ．ＬｔＵｒｍｑ３０３Ｃｈｉ）ｄ，ｕｉ８０２，ｎａ
ＡｂｔａｔＡｃｏｄｎｏｔｅｐｂｉｈｄｇｎｍｅｓｑｅｃｓｏＶ２ｔａｒｆｓｅｉｃｐｉｒｗｅｅｄ — ｓｒｃ：ｃｒｉｇｔｈｕｌｅｅｏｅｕｎｅｆＰＣｓ，ｗｏｐｉｓｏｐｃｆｒｍｅｒｅｉ
摘
要：根据ＧｅＢｎｎａｋ中已发表的猪 Ⅱ型圆环病毒（Ｃ２全基因组序列，计合成了２对特异性引物。将ＰＶ）设
ＰＶ２疆分离株（Ｃ一Ｊ用Ｐ５细胞培养数代，细胞培养物中提取病毒总ＤＣ新ＰＶ２Ｘ）Ｋ１从ＮＡ，取其作为模板，Ｃ扩并ＰＲ增出病毒全基因和结构基因（Ｒ２。将ＰＲ回收产物克隆到ｐ１一载体，功构建了重组质粒ｐ１一 — ＯＦ）ＣＭＤ８Ｔ成ＭＤ８ＴＰＶ２和ｐＣＭＤ１一－Ｆ，对筛选出的阳性质粒进行测序。应用序列分析软件对测序结果分析可知，隆得到８ＴＯＲ２并克的ＰＶ２Ｘ基因组全长１７８ｂ。通过序列分析结果显示，Ｃ一与国内外ＰＶ１ＰＶ２参考毒株的核苷酸同Ｃ一Ｊ６ｐＰＶ２Ⅺ Ｃ、Ｃ
新疆农业大学学报２１，３１：２６００３（）４￣４ＪｕｎｌｆＸｎｉｎｇｉｕｔｒｌＵｉｒｉｏｒａｉｊａｇＡｒｌａｎｖｓｔｏｃｕｅｙ

猪2型圆环病毒河南株ORF2基因的克隆、序列分析及其真核表达的开题报告

猪2型圆环病毒河南株ORF2基因的克隆、序列分析及其真核表达的开题报告一、研究背景猪2型圆环病毒（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）是一种小型的单链DNA病毒，是猪圆环病毒属（Circovirus）的代表性病毒。

此类病毒无外层包膜，仅有一个直径为17-22nm的硬壳，病毒颗粒内含有一个全长为1.7kb的不固定阅读框（ORF）。

病毒仅能在猪身体内复制繁殖，其感染范围广泛，且可以导致严重的猪瘤性胃肠炎、脑病、体重停滞、呼吸道疾病等症状。

PCV2的ORF2编码的是主要的抗原表位，能在疫苗研究、临床诊断和病毒流行病学研究中发挥重要作用。

在PCV2基因结构中，ORF2位于PCV2基因组的正义链中，其编码产物为一种分子量为26-28kDa的蛋白，即Cap蛋白。

目前，有关PCV2 Cap蛋白的研究仍比较少。

二、研究目的本研究旨在从PCV2河南株中克隆ORF2基因，并进一步进行序列分析和真核表达研究，期望深入了解PCV2 Cap蛋白的生物学特性和功能。

三、研究内容与步骤1. PCV2河南株ORF2基因的克隆通过PCR技术从PCV2河南株中扩增ORF2基因，并将其插入载体中，使之形成重组质粒。

对所构建的重组质粒进行酶切测序和PCR等验证，以确保其准确性和可用性。

2. PCV2河南株ORF2基因的序列分析对所得到的PCV2河南株ORF2基因进行测序，利用生物软件进行比对分析、基因结构和氨基酸序列分析，以了解其结构和生物学特性。

3. PCV2河南株ORF2基因的真核表达构建ORF2基因的真核表达载体，将其转化入适当的细胞中进行真核表达实验，利用Western blotting技术对所表达的Cap蛋白进行分析和鉴定。

四、研究意义与预期结果本研究将揭示PCV2 Cap蛋白的生物学特性、功能和分子机制，有助于深入了解PCV2的感染与致病机理。

预期结果将提供PCV2疫苗和诊断试剂研究的理论基础和应用价值。

PCV2-ORF2去信号肽基因的克隆与原核表达及对小鼠免疫效力的评价

PCV2-ORF2去信号肽基因的克隆与原核表达及对小鼠免疫效力的评价王云龙;朱永喜;李玉林;霍雯;李恒思;王真;邓黎黎;黄欣【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2009(004)003【摘要】目的通过基因工程的方法表达猪圆环病毒2型的ORF2蛋白,并对表达蛋白进行小鼠免疫效力评价,为猪圆环病毒病疫苗的研制提供技术支持.方法根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物.从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的死亡仔猪病料中提取基因组DNA,用PCR方法扩增出ORF2去信号肽基因,将该基因克隆至原核表达载体pET32α,获得重组质粒,经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表明插入的片段为目的基因,插入的位置、大小和阅读框均正确,成功构建了重组质粒pet32α-ORF2,阳性重组质粒转化大肠杆菌Blgold(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达的最佳条件,表达产物经纯化后,以每只小鼠0.2mg免疫5周龄的雌性小鼠,然后用ELISA检测免疫小鼠血清中抗体的产生情况.结果纯化的重组蛋白能使小鼠产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体,从第7d开始产生抗体,第28d抗体水平达到最高,抗体可维持7周以上,并具有良好的安全性.结论表达目的蛋白能在小鼠体内产生特异性抗体,为进一步研究猪圆环病毒亚单位疫苗奠定了基础.【总页数】5页(P219-223)【作者】王云龙;朱永喜;李玉林;霍雯;李恒思;王真;邓黎黎;黄欣【作者单位】453002,新乡,河南师范大学;450121,郑州,郑州职业技术学院;453002,新乡,河南师范大学;450001,郑州,河南省生物工程技术研究中心;450001,郑州,河南省生物工程技术研究中心;450001,郑州,河南省生物工程技术研究中心;450001,郑州,河南省生物工程技术研究中心;450121,郑州,郑州职业技术学院;450121,郑州,郑州职业技术学院【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.小鼠干扰素应答基因(Ifrg15)的克隆、原核表达及其融合蛋白的亲和纯化 [J], 丁彪;刘一飞;张运海;李文雍2.去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价 [J], 魏明童;夏兵兵;何志远;周炜;刘兴东;赵俊;陈敬贤;王明丽3.牦牛日本血吸虫Sjp38MAPK基因克隆、原核表达及免疫保护效果研究 [J], 杜敏4.小鼠DHRS4基因原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备 [J], 张廷银;闫银侠;黄东阳5.单增李斯特菌内化素基因inlG基因原核表达及小鼠免疫保护性分析 [J], 刘圆园;曹启航;孙亚楠;委慧玲;薛惠文;苟惠天因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测

动物医学进展,2010,31(9):6367Pr ogress in Veterinary Medicine猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测梁晓艳1,李玉林2,李兆学3,王继美2,贾丽锋1,周贺娟1,王云龙1,2*(1.郑州大学,河南郑州450002;2.河南省生物工程技术研究中心,河南郑州450002;3.河南工业大学,河南郑州450002)摘要:以病猪脾脏组织为材料,提取总RNA,通过RT PCR 得到579bp 的猪圆环病毒2型(PCV 2)/ORF2片段,与原核表达载体pET32a 重组,通过菌落PCR 鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,证实重组质粒pET 32a/ORF2构建成功,将其转化入表达菌Balgold,通过IPT G 诱导表达,利用Ni NT A 亲和层析纯化目的产物,Western blot 验证其免疫原性,重组蛋白免疫Balb/c 小鼠,检测小鼠体内中和抗体滴度。

获得的重组蛋白包涵体的形式出现,表达量占菌体总蛋白的30%,变性纯化后纯度达90%以上,Western blot 证实重组蛋白能与PCV 2阳性血清发生反应,免疫Balb/c 小鼠45d 后中和抗体滴度达到122。

关键词:猪圆环病毒;ORF2;原核表达;免疫原性中图分类号:S852.659.2;S858.28文献标识码:A文章编号:10075038(2010)09006305猪圆环病毒2型(PCV 2)是危害养猪业的一种重要病原,可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PM WS)[1]。

除此之外,PCV 2还与猪呼吸道综合症(PRDC)、母猪繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PD NS),肉芽肿性肠炎、渗出性表皮炎及肝炎等疾病有关[26],因此PCV 2感染给养猪业造成的危害严重。

PCV 2为圆环病毒科圆环病毒属成员,是一种无囊膜、20面体对称、共价闭合、环状单股DNA 病毒。

病毒粒子直径平均为17nm,基因全长1767bp 或1768bp,有11个阅读框(ORF),其中ORF1和ORF2是最主要的阅读框[7]。

猪瘟病毒Erns基因的克隆与序列分析

（．岛农业大学动物科技学院，东青岛２６０；．东省动物疫病预防与控制中心，１青山６１９２山山东济南２０２）５０２
摘要：了解山东地区猪瘟病毒的变异情况，６份经ＲＴＰＲ方法鉴定为猪瘟病毒（ＳＶ）为将 —ＣＣＦ阳性的
株的方向变异［］因此，展猪瘟病毒分子流行病２。开
基因的变异及生物学功能研究提供参考。
Hale Waihona Puke １材料与方法１１材料．
１１１病料．．
病料采集山东省济南、州、坊、德潍济
学调查，了解猪瘟病毒流行株的变异情况，猪瘟流对行及其防控具有重要意义。
山东地区患病猪的病料接种Ｐ — ５细胞，离得到６株猪瘟病毒。对该６株猪瘟病毒的Ｅ。因主要抗原Ｋｌ分基
编码区序列进行了Ｒ — Ｃ扩增、隆、序，经ＤＴＰＲ克测并ＮＡｔｒ件对测序结果与ＨＣＶ疫苗株、ｈｍｅＳａ软ＬＳｉｎ株及Ａｌｒ株Ｅ基因进行比较和分析，建了ＣＦ遗传进化树。结果扩增的６株山东ＣＦ分离株Ｅ。ｆｔｏ构ＳＶＳＶ基因同源性为９．～１０，ＨＣＶ疫苗株，ｈｍｅ８５０与ＬＳｉｎ株及Ａｆｒ株的同源性为８．～８．；６株ｌｔｏ２９５２

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－６０・ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１０Ｖ０１．４２Ｎｏ．１０ＰＣＶ２的基因组全长为１７６７ｂｐ或１７６８ｂｐ，包括１１个开放式阅读框（ＯＲＦｓ）∞ｊ，其中含有２个主要的开放阅读框：ＯＲＦｌ和ＯＲＦ＇２。

ＯＲＦｌ编码与病毒复制有关的蛋白，ＤＮＡ序列具有很强的保守性∞１；ＯＲＦ２编码病毒的主要结构蛋白，相对来说存有较高的变异＂Ｊ。

国外已有的研究报道认为，ＰＣＶ２的遗传变异与地域有关【８Ｊ。

因此通过对ＯＲＦ２的遗传变异研究可以了解ＰＣＶ２的流行状况。

本试验以ＰＣＶ２ＯＲＦ２为靶基因，对山东境内的ＰＣＶ２进行了分子流行病学分析，从而为ＰＣＶ２感染的防治奠定基础。

１材料与方法１．１材料大肠杆菌ＤＨ５ａ菌株为本实验室保存菌种。

ｐＧＥＭ—Ｔｅａｓｙ载体购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司（美国）。

ＤＮＡ片段回收试剂盒、质粒小量提取试剂盒、１０×ＲｅａｃｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ、ＭｇＣＩＪ２、ｄＮＴＰ、ＴａｑＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ购自ＴａＫａＲａ公司（大连）。

疑似猪圆环病毒病的材料（淋巴结和脾脏）从山东省德州、临沂、潍坊、临邑、淄博等地区收集，取Ｏ．５—２．Ｏｇ病料在酒精灯下无菌充分研磨并用Ｈａｎｋ’ｓ液（ｐＨ７．２—７．４）稀释成ｌ：３乳剂，在４℃冰箱放置２ｈ让病毒充分释放，然后反复冻融３次，８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清于－２０ｏＣ保存备用。

１．２病毒ＤＮＡ的提取根据文献，采用酚。

氯仿一异戊醇法从制备的上清病料中提取ＤＮＡ归Ｊ。

１．３引物设计和ＰＣＲ反应根据ＧｅｎＢａｎｋ上公开发表的ＰＣＶ２全基因组序列，采用Ｐｒｉｍｅｒ５．０软件设计二对引物。

引物由上海博亚生物技术有限公司合成。

上游引物为：５’－ＧＣＡＴ—ＧＣＡ７ｒＡＴＡＴＧＡＣＧＴＡＴＣＣＡＡＧ．３’，对应于ＰＣＶ２的ｌ０３３～１０４８位；下游引物引物为：５７一ＡＴｒＡＴＣ－ＧＡＴＩＴＡＧＧＧＴｒＴＡＡＧＴＧＧ－３’，对应于ＰＣＶ２的１７１９一ｌ７３４位，可扩增出含ＯＲＦ２全长基因在内的７２０ｂｐ片段。

ＰＣＲ反应体系（２０斗Ｌ）：２．０灿Ｌ１０ｘＰＣＲ缓冲液（Ｍ９２＋ｆｒｅｅ），ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏＬ／Ｌ）２．０ｖ．Ｌ，１．０恤ＬｄＮＴＰｍｉｘ（各２．５ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ），１。

０斗Ｌ弓【物（５ｐ．ｍｏｌ／Ｌ），１．０ｐ．Ｌ模板ＤＮＡ，０．２ＩｘＬＴａｑＤＮＡｐｏｌｙ—ｍｅｒａｓｅ（５Ｕ／止），用无菌双蒸水补充至２０ｐＬ。

ＰＣＲ反应条件为９４℃预变性３ｒａｉｎ；９４℃３０ｓ，５２℃４５ｓ，７２℃１ｍｉｎ，３５个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ。

ＰＣＲ产物经凝胶电泳分离、胶回收试剂盒回收后克隆入ｐＧＥＭ—Ｔｅａｓｙ载体中，测序。

１．４序列的生物信息学分析将获得的序列用ＮＣＢＩ网站上ＢＬＡＳＴ程序与数据库中的已有ＰＣＶ２ＤＮＡ序列进行相似性比较分析。

用ＤＮＡＳｔａｒ软件对ＯＲＦ２基因进行序列同源性分析和基因型分析。

用ＭＥＧＡ３．１软件包构建系统进化树。

１．５基因型分析利用ＤＮＡＳｔａｒ软件对６个分离毒株ＯＲＦ２基因序列以及ＧｅｎＢａｎｋ报道的山东境内分离的１３个ＰＣＶ２毒株的ＯＲＦ２基因序列进行Ｓａｕ３ＡＩ、ＢａｎＩＩ、脚Ｉ、ＸｂａＩ和昕Ｉ限制性内切酶的ＲＦＬＰ分析。

具体操作参照文献［１０］。

２结果２．１ＯＲＦ２基因的克隆与测序从山东省６个规模化猪场发病猪群检测得到６份ＰＣＶ２阳性病料，从病料中提取病毒ＤＮＡ，利用设计的引物进行ＰＣＲ，ｌ％的琼脂糖凝胶电泳进行检测，均获得了长度约为７２０ｂｐ的片段，与预期的扩增片段长度相符，且特异性和重复性好。

１．阴性对照（Ｈ２０）；２．Ｄ［２０００Ｍａｒｋｅｒ；３—８．阳性病料图１ＰＣＶ２ＯＲＦ２基因的ＰＣＲ扩增纯化的ＯＲＦ２ＰＣＲ产物与ｐＧＥＭ—Ｔｅａｓｙ载体连接，转化大肠杆菌ＤＨ５ｃｔ。

挑取平板上的白色转化子提取重组质粒，送至上海博亚生物技术有限公司测序。

６个ＯＲＦ２基因，分别命名为ＳＤＩ、ＳＤＩＩ、ＳＤＩＩＩ、ＳＤＩＶ、ＳＤＶ、ＳＤＶＩ。

２．２序列同源性分析利用ＤＮＡＳｔａｒ软件对已经测序的６个ＰＣＶ２的ＯＲＦ２基因序列进行分析。

从图２可以看出，６个ＯＲＦ２基因之间的核苷酸同源性为９３．３％一９９．７％，ＯＲＦ２编码的结构蛋白的推导氨基酸同源性为９２．３％一１００％，而且存在２个高变区，即分别位于５７—９０和１９０～２２０位的氨基酸区域，其中５７—９０区域位于结构蛋白的免疫反应活性区。

与ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的加拿大株（ＡＦｌ０９３９９）、德国株（ＡＦ２０１３０５）、美畜牧与兽医２０１０年第４２卷第ｌＯ期・６１・国株（ＡＹ０９９４９８）、法国株（ＡＹ３２２０００）、南非株（ＡＹ３２５４９５）、澳大利亚株（ＡＹ４２４４０２）、南朝鲜株（ＡＹ６７２６０１）、中国海南株（ＡＹ５５６４７６）及中国农大株（ＥＦ５２４５２１）的核苷酸序列进行同源性比较及由此推导出的氨基酸同源性比较，结果显示，这６个ＰｅｒｅｅｎｔＩｄｅｎｔｉｔｙＯＲＦ２基因核苷酸序列与加拿大株、德国株、澳大利亚株和南朝鲜株同源性较低，介于９０．３％一９２．Ｏ％和８８．Ｏ％一９１．５％之间，与法国株和中国农大株同源性较高，分别为９３．７％一９９．６％和９３．６％一９９．６％。

１２３４５６７８９１０ｌｌ１２１３１４１５９９．１９８．６９１．３９１．７９２．２９９．０９２．２９１．９９３．９９１．７９８．７ｌＳＤＩ１●一９３．６９８．６９３．６ＨＨ～—。

…２９２．７＿９１’９９．７９３．９９３．６９０．３９０．８９１．２９３．７９０．６９０．８９８．６９０．８９３．７２ＳＤⅡ＿Ｈ３９７．０９２．３—■９ｑ．３９８．９９８．９９１．２９１．６９１．９９８．７９１．９９１．７９３．９９１．５９８．４３ＳＤⅢ———１００．０，９２．３●■９”：９３．６９０．３９０．８：９１．２９３．７９０．６９０．８９８．６９０．８９３．７４ＳＤⅣ４９２．７…－”…５９８．７９３．２９７．４｝９３．２＿９８．９９１．５９１．９９２．３９９．３９２．３９２．Ｏ９４．４９１．９；９９．０５ＳＤＶ６９７．９９４．０９７．４｛９４．０，９８．３Ｉ９１５：９１．９９２．２９９．６９２．５９２．０９４．３９１．７９９．３６ＳＤⅥ７８９．３８８．９８８．０：８８．９８９．３８９．７一帆ｌ；９５．０９１．６９４．７９８．３９１．２９４．３９１．３７ＡＦｌ０９３９９—９９．１９１．６９５．２９１．７８ＡＦ２０１３０５８８９．７８９．３８８．５８９．３８９．７９０．２：９９．６．１９５．９９２．０９５．６ｐ＋●●●＿＇ｎ一９５．３■一９２５９８．３９５．９９２．０９８．２：９２．２９ＡＹ０９９４９８９９１．５９２．３９０．２９２．３９１．５９１．９９４．９１０９８．３９３．６９７．０９３．６９８．７９９．６８９．７９０．２９１．９—■ｑ２７９２．２９４．４９２．Ｏ：９９．７１０ＡＹ３２２０００ｌｌ９１．５９１．０９０．２９１．０９１．５９２．７９４．４９４．９＋９６．６９２．７＿９５．６９１．６９８．９９２．５ｌｌＡＹ３２５４９５１２９０．２８９．７８８．９８９．７９０．２９０．６；９９．１９９．６：９５．７９０．６９５．３—９１６：９５．２｛９１．９１２ＡＹ４２４４０２１３９１．９９８－３９１．５９８．３９２＿３９４．０８８．９８９．３９２．３９３．６；９１．９８９．７ｌ９１６９４．４１３ＡＹ５５６４７６１４９１．０９１．５８９．７９１．５９１．０９１．５９４．０９４．４９６．６９１．５９８．７９４．９；９１．５—■９１７１４ＡＹ６７２６０ｌ９３．６９１．５＿１５ＥＦ５２４５２１１５９８．３９３．６９７．０：９３．６９８．７９９．６８９．７９０．２９１．９１００．０：９２．７９０．６＿”Ｈｆｆｌ２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５注：对角线以上为核苷酸序列同源性。

以下为氨基酸序列同源性图２ＯＲＦ２基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较２．３遗传进化分析利用Ｍｅｇａ３．０软件，采用ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ方法，选择ｂｏｏｔｓｔｒａｐ进行测试，重复次数设为１０００次，同时以ＰＣＶｌ（ＡＹｌ８４２８７）作为对照株，对６个ＯＲＦ２基因和上述９株ＰＣＶ２的０ＲＦ２基因序列绘制进化树。

从图３可以看出，ＰＣＶ２毒株与ＰＣＶｌ毒株形成２条独立的分枝，说明ＰＣＶ２与ＰＣＶｌ之间亲缘关系较远，具有明显的型的差异。

ＰＣＶ２各分离株之间存在着某种地理区域上的相关性，分为两大群，ＳＤＩ、ＳＤＩＩＩ、ＳＤＶ、ＳＤＶＩ与法国株和中国农大株共同形成一群，可能起源于共同的祖先；ＳＤＩＩ、ＳＤＩＶ与美国株、加拿大株等其他７株ＰＣＶ２毒株共同形成另一大２・４群，ＳＤＩＩ、ＳＤＩＶ与海南株的亲缘关系最近。

图３基于ＯＲＦ２基因核苷酸序列的系统进化分析山东省ＯＲＦ２基因的基因型分析各片段的限制性内切酶图谱见图４。

图４５个ＰＣＶ２基因型的ＲＦＬＰ图谱6株猪圆环病毒2型山东分离株ORF2基因的克隆与序列分析作者：王可，孙健全，孔文涛，孔健，孙芝兰作者单位：王可,孙健全(山东省农业科学院畜牧兽医研究所,山东,济南,250100)，孔文涛,孔健,孙芝兰(山东大学微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100)刊名：畜牧与兽医英文刊名：ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE年，卷(期)：2010,42(10)参考文献(12条)1.Lecann P;Albina E;Madec F Piglet wasting disease 1997(25)2.Harding J C The clinical expression and emergence of porcine circovirus 2[外文期刊] 2004(02)3.Allan G M;Ellis J A Porcine circoviruses:a review[外文期刊] 2000(01)dekjasr-mikkelsen A S;Nielsen J;Storgaard T Trunsplacental infection with PCV-2 associated with reproductive failure in a gilt 2001(24)5.Hamek A L;Lin L L;Nayar G P Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs 19986.Mankertz A;Mueller B;Steinfeldt T New reporter genebased replication assay reveals exchangeability of replication factors of porcine circovirns types 1 and 2[外文期刊] 2003(18)7.Nawagitgul P;Morozov I;Bolin S R Open reading frame2 of porcine circovirus type 2 encodes a major capsid protein 20008.Fenaux M;Halbur P C;Gill M Genetic characterization of PCV-2 from pigs with PMWS in diferent geographic regions of north America and development of a diferential PCR-RFLP assay to detect and diferentiate between infections with PCV1 and PCV2 20009.萨姆布鲁克·J;拉塞尔D W;黄培堂分子克隆实验指南 200210.Wen L B;Guo X;Yang H Genotyping of porcine circovirus type 2 from a variety of clinical conditions in China[外文期刊] 2005(1-2)11.Fenaux M;Opriessnig T;Halbur P Q Two amino acid mutations in the capsid protein of type 2 porcine circovirus(PCV2)enhanced PCV2 replication in vitro and atenuated the virus in vivo[外文期刊]2004(24)12.Mahed D;Blanchard P;Truong C Diferential recognition of ORF2 protein from type1 and type2 porcine circoviruses and identification of immunorelevant epitopes 2000本文读者也读过(9条)1.郭抗抗.张彦明.张红.刘华科.宁蓬勃.王晶钰.GUO Kang-kang.ZHANG Yan-ming.ZHANG Hong.LIU Hua-ke.NING Peng-bo.WANG Jing-yu猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测[期刊论文]-中国预防兽医学报2010,32(10)2.韩玉环.高峰.周双海.邵小雪.王志军.王保有.刘玉洁.Han Yuhuan.Gao Feng.Zhou Shuanghai.Shao Xiaoxue. Wang Zhijun.Wang Baoyou.Liu Yujie猪圆环病毒1型天津株全基因组的克隆与序列分析[期刊论文]-中国农学通报2010,26(18)3.张得玉.何逸民.秦宏阳.张翔峰.何冉娅.曹宗喜.张桂红.ZHANG De-yu.HE Yi-min.QIN Hong-yang.ZHANG Xiang-feng.HE Ran-ya.CAO Zong-xi.ZHANG Gui-hong猪圆环病毒2型广东株全基因组的克隆与序列分析[期刊论文]-华南农业大学学报2010,31(1)4.于俊勇.徐廷川.张得玉.罗玉钧.何逸民.张桂红.YU Jun-yong.XU Ting-chuan.ZHANG De-yu.LUO Yu-jun.HE Yi-min.ZHANG Gui-hong广东省猪圆环病毒2型全基因组序列的比较和分析[期刊论文]-华南农业大学学报2011,32(2)5.郭龙军.陆月华.危艳武.黄立平.刘长明.GUO Long-jun.LU Yue-hua.WEI Yan-wu.HUANG Li-ping.LIU Chang-min 我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析[期刊论文]-中国预防兽医学报2009,31(11)6.李鹏.冯书章.汤会琼.李文贵.柴俊.李作生.张以芳.LI Peng.FENG Shu-zhang.TANG Hui-qiong.LI Wen-gui. CAI Jun.LI Zuo-sheng.ZHANG Yi-fang猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序列分析[期刊论文]-中国畜牧兽医2010,37(5)7.娄忠子.杨彬.兰喜.李学瑞.李志勇.殷相平.李宝玉.柳纪省猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达[期刊论文]-畜牧与兽医2010,42(12)8.李文洁.李文涛.严伟东.陈焕春.何启盖.LI Wen-jie.LI Wen-tao.YAN Wei-dong.CHEN Huan-chun.HE Qi-gai中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析[期刊论文]-畜牧兽医学报2009,40(9)9.郑玉姝.赵朴.刘俊伟.陈金山.姚四新.赵坤.李任峰.王三虎.刘兴友.张智勇.ZHENG Yu-shu.ZHAO Pu.LIU Jun-wei.CHEN Jin-shan.YAO Si-xin.ZHAO Kun.LI Ren-feng.WANG San-hu.LIU Xing-you.ZHANG Zhi-yong猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用[期刊论文]-中国畜牧兽医2010,37(8)本文链接：/Periodical_xmysy201010017.aspx。