生化仪器中的空白定标和质控课件

2 质控品应具备的特性
人血清基质，因它的基质效应小. 无传染性. 添加剂和调制物的数量尽可能少. 瓶间变异小， （1）酶类项目瓶CV应小于2％，
其它分析物CV％应小于l％ （2）某些不稳定成分(如胆红素、ALP等)在复溶后前4小时的
变异应小于2％. （3）冻干品其复溶后，2～8℃环境中稳定不少于24h，
为了表达的方便，通常以“／”符号将各 项质控规则联接起来，如13s / 22s/R4s／41s／ 10x。
在实践中13s或R4s规则常检出随机误差， 而22s 、41s 、10x质控规则检出系统误差。
IQC中需要注意存在的问题
注意的问题：
（1）质控血清必须完全溶解和融化后才能 使用，同时，
③具有低的假失控或假报警概率；
④当失控时，能确定产生失控的分析误差的 类型，由此可帮助确定失控的原因以寻找 解决问题的办法。
最初的Westgard多规则通常有六个质控规则， 即12s、13s、22s、R4s、41s、10x。
其中12s规则是是一种警告规则也是Westgard 法的启动规则，它有助于对质控数据的快 速判断。
2 常用的质控规则
质控规则以符号AL表示： (1)A是指超过质控限(L)的质控测定值的个数 (2)L是质控界限。 (3) 1 2s质控规则,A=1,L=2s 当质控测定值超过了规定某规则要求时，
应判该批分析违背此规则。
1 2s：有1个质控测定值超过X±2s，该规则 称为“警告规则”。
13s规则：1个质控测定值超过X±3s质控限。 此规则多由随机误差造成
(仪器的精度、波长的准确度) 检测方法的选择和评价 （重复实验、回收实验、干扰实验、方法比较实验） 试剂和标准品的选择和评价 （线性范围测定、反应曲线的观察、稳定性实验） 标本准备 （血清、血浆、胸腹水等)
（二）分析中质控
建立项目操作程序 标准化的操作规程（SOP文件）。
室内质控和结果分析 对各个项目进行室内质量控制，并对质控结 果进行分析与处理。
个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试 剂器工作流 程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加 入R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项 目曲线 中是无法看到的。但是7600从 CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表 试剂空白吸光度，在CALIBRAT ION画面里的下 方找到Reaction Monitor（反应监察），其中STD(1) 就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立 仪器会连续做两次测定，所以你看到 FIRST和 SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试 剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采 取措施纠正。对于日立 的这种试剂空白测定很多 仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。 总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为 零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。
2、样本空白： 由于溶血、脂血、黄疸等情况， 会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。
所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可 以去除这 方面的影响。测量方法是按照正常测试
的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水 来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。
与消除样本空白有关的大约有如下几点: a).在双 试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定 程度上扣除样本空白，所以有单 试剂不能扣除样
②用红笔划出X±2SD作为警告线； 用蓝笔划出X±3SD作为出控线。 这样称为一张空OCV或RCV图。
③质控图上所包括的内容
常规靶值 、控制限的确定：
一个月结束后,将该月的在控结果与前20个 质控测定结果汇集在一起，计算累积X、S、 CV,再作为第二个月的IQC的暂定靶值和控 制限，观测第二个月的IQC。
要进行室内质量控制就必须要有指示物对 各项目的质量进行指示和判断，来说明质 量好坏的情况，指示物就是我们需要的控 制物（也称质控物） 。
控制物定义（也称质控物）：含有被检测 的化学成份，用于监测实验室的精密度和 准确度的一种指示血清（溶液）称之为控 制物。
标准品定义（参考物）：是指它的一种或 几种物理或化学性质已经充分被确定，被 用于校准仪器或证实一种测定方法的物质。
第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准 确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您 的仪器相当稳定，试剂是影响K值的一个主要因素。 如何确定K值是正确的？ 一般我们用质控血清来检 查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果 很好，可以说K值是准确的，用这个K值计算出来病 人的结果也是准确的，所以K值非常关键。 K值的真 面目： K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白， 试剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性决定您 的仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那K 值也很稳定。 多长时间定一次标合适？ 这要看您 试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空 白可以解决，有些项目要做两点定标。 酶的项目如 何确定K值： 一是计算出来的理论K值； K = (TV × 1000)/(SV × L × ε) 二是用有酶项目的定标液得出K 值：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有 底物类的项目，也有酶类的项目。
22s规则:2个连续的质控测定值同时超过X＋2s 或X－2s质控限。此规则主要由系统误差造成
R4s规则：在同一批内进行两种不同浓度质 控品监测时,高浓度测定值与低浓度测定值 之间的差值超过4s。此规则多由随机误差造 成。
41s规则：4个连续的质控测定值同时超过X ＋1s或X－1s。此规则主要由系统误差造成。
全面质量控制的内容
全面质量控制的内容主要包括分析前、分 析中、分析后这三个主要过程的质控。
只有认真的检测和控制这三个过程中各个 环节可能出现的误差，才能保证最后检测 结果的准确性，才能达到我们的质量要求。
（一）分析前质控
人员培训 实验室的设置 （水、电、相关设备、用具等） 实验仪器的质量保证
以此重复３～５个月建立常规的靶值 、控 制限。
在计算累积值的时候需去掉超过±3SD的数 据
室内质控的结果分析 （1）测定值的分布规律 ①95%的测定结果应落在X±2SD范围内。 ②不能有连续5次结果逐渐上升或下降。 ③不能有连续5次结果在均值的同一侧。 ④不能有连续2次结果在X±2SD 以外。 ⑤不能有数据落在X±3SD 外。
本空白的说法。 b).现在优质的试剂的抗干扰能 力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样 本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪
胆红素等反应 掉，再加入R2开始测定反应。在一 定范围内都可以消除样本空白。 c).现代全自动 生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是 根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征， 选择两个波长和 ，使干扰组分在这两个波长处的 吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光 系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的 吸光度， 以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可 以扣除一部分样本空白. d).有些仪器,例如日立 系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都 是单 独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品 空白校准。 3、水空白： 比色杯在加入水以后 的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行 检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中 起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）测定的就是水空白。
（2）必须有准确的加样器，而且水的质量 一定要得到保证。
（3）质控血清必须与常规标本同等对待， 不得特殊处理，只有这样才能真正反映常 规工作的质量。
（4）质控血清测得值应及时在质控图上。 确认没有失控后，再填发当天的检验报告。
如违反上述规律时，称为失控。
（２）质控图的几种 失控表现
①曲线漂移：是由于 系统误差造成，准确 度发生了一次性的向 上或向下的改变，这 种往往是由于一个突 然出现的新的情况引 起。如更换质控血清、 试剂及操作人员。
②趋势性变化：质控 图趋势性向下或向上 变化。表明检测的准 确度发生逐渐的变化， 这种变化多发生是由 于一个逐渐改变的因 素造成的。如试剂的 挥发、吸水、沉淀等。
常规质控图（ｘ±S）法
这种方法操作简单，直观，易懂，它具有 成熟的理论和实际经验，它只需要单一浓 度的质控血清就可实现对临床进行室内质 量控制，是目前国内外采用最广泛的一种 常规室内质量控制的方法。
也称为均值-标准差质控图法，也称leveyJenning质控图法。
①在纵坐标上标出X、X±2SD、X±3SD的标 志，横纵标上标出日期或次数。
（三）分析后质控
审核实验结果 室内质控的数据管理 参加室间质量评价 建立投诉调查与反馈机制
二、临床生化检验室内质量控制
（一）、概念与意义 室内质量控制：指各实验室为了监测和评
价本实验室工作质量，以决定常规检验报 告能否发出，而采取的一系列检查，控制 手段，包括实验室工作的全过程。 意义：是检测常规工作中的精密度，并观 察准确度的改变，提高本实验室常规工作 中天内与天间标本检测的一致性。
③精密度变化：仪器、试剂或方法学不稳 定
8、失控后处理
①迅速回顾，检查整个操作过程。是否有发生错 误的环节，包括试剂、方法、波长，以及程序等 出现差错。
②如操作步骤均无问题，可重复试验一次，如有 改进，说明误差很可能操作错误所致，标本量， 试剂量的错误，或波长选择错误所致。
③如仍不能更正，可取一份新鲜的控制血清重作。
稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白， 称为实时试剂空白。 在全自动分析仪上，大
体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追 求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂 空白。以日立全系 列生化仪为例。该系列分析仪
是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样 本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试 剂空白，保 存起来，需要扣除试剂空白时再减这
统计学的基本概念
１、精密度：测定值与均值之间的差值情况 称为精密度，差值越大精密度越差，反之 越好。 ２、准确度：测定值与真实值之间的差值 情况称为准确度，越接近真值准确度也好， 反之就越差。
室内质量控制的主要方法
1. 常规质控图（ｘ±S）法 2. Westgard多规测质控法 3. 6西格玛质控图法 4.日常标本测定结果均值图法
10x规则：10个连续的质控测定值同时落在 均值（X）的同一侧。此规则主要由系统误 差造成。
Westgard多规则的主要特点是： ①是在Levey-Jennings方法基础上发展起来的， 因此,它很容易与常用的Levey-Jennings质控 图进行比较并涵括后者的结果；
②通过单值质控图进行简单的数据分析和显 示
生化检验中的各种空白概念
1、试剂空白： 由于生化测试测量的吸 光度为相对吸光度，所以从理论上说，所 有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光 度扣除。试剂本身的吸光度就是 试剂空白。 测量方法是按照正常测试的试剂和样本量
把样本换成蒸馏水来测量。 在传统手工方法 中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、 空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也 就是试剂空白。因为 操作环境、仪器状态、试剂
－20℃环境中稳定不少于20天， 到实验室后的有效期应在1年以上.
室内质控血清浓度水平要求
１、三级以上医院的临床实验室，定量测 定每批(不超过24小时)至少使用两个浓度水 平的质控血清。
２、二级、一级医院临床实验室，至少使 用一个浓度水平(医学决定水平)的质控血清。
３、医学决定水平：是指某项待测物的含 量，围绕该浓度的升高或降低，对确定疾 病的诊断或治疗起帮助甚至关键的作用。
④仍不能解决问题，取一份定值血清重做。
⑤仍不能解决，应仔细检测仪器。
⑥仍未得到纠正，试剂、质控血清重新配制和溶 解，仪器保养检修，全部重新查找原因直到问题 解决。
Westgard多规则法
1、方法：
要求在常规条件，同时测定2份不同浓度的 定值质控血清，所含测定物浓度最好分别 为医学决定水平的上限或下限。