葛根、葛花及其总黄酮对酒精性肝病大鼠防治作用研究

第2 2卷第丨1期2020年11月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 22 No. 11
N ov.，2020
DOI ：10.13194/j.issn. 1673-842x.2020.11.007
葛根、葛花及其总黄酮对酒精性肝病大鼠防治作用研究
张国哲1,季建伟2,刘平平1,汪楠1,孙明忠2,梁晓东2
(1.江苏医药职业学院，江苏盐域224005;2.盐城市第三人民医院，江苏盐域224005 )
摘要：目的比较中药葛根、葛花及其总黄酮对酒精诱导的急性肝损伤大鼠的防治作用差异及其作用机制方 法采用白酒灌胃法建立急性酒精性肝病模型将SPF级SD大鼠（雄性,70只），随机分为7组，每组10只，包括：正 常$、模型对照组、联苯双酯阳性药对照组、葛根组、葛花组、葛根总黄酮组和葛花总黄酮组连续造模并治疗15 d 后采集大鼠血清、肝脏组织自动生化分析仪检测谷丙转氣酶（alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氣酶（aspartate aminotransferase,AST)、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN)、甘油三醋（triglyceride，TG)、总胆固醇（total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C )肝组织采用苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE)染色，显微观察 肝组织病理变化结果与模型组相比，各治疗组均可以显著降低大鼠血清尿素氮和血清甘‘油三酯水平，而血清总 胆固醇，高、低密度脂蛋白胆固醇各组间无明显差异，仅葛根组可以显著降低血清总胆固醇和高、低密度值蛋白胆固 醇水平结论过量白酒可引起肝肾损伤，葛根、葛花在治疗酒精性肝损伤方面可以互补；葛根、葛花总黄酮为解酒 活性成分，但解酒效果不如总提物
关键词：酒精性肝病；ALD;葛根；葛花
中图分类号：R285.5 文献标志码：A文章编号：1673-842X(2020) 11-0029-04
C om parison Effects of R a d ix P uerariae L o h a ta e and P uerariae L o h a ta e Flos and
Their Tolal Flavonoids on Prevention and Treatm ent o f ALD in Rats
ZHAN(y G uozhe1, Ji Jianw ei", LIU Pingping1, WANG N an1 , SUN Mingzhong2, LIANG X iaodong2
(1 .Jiangsu Vocational College of M edical, Y ancheng 224005 , Jiangsu , (Ellina;
2.Third P eople's Hospital of Y ancheng, Yanc heng 224005, Jia n g su, C hina )
A bstract: Objective To com pare the prevention and treatm ent of acute liver flisease induced hy alcohol in rats with Rar/ix PueraW ae /ohafae, P uerar/ae /ohafae Flos and their total flavonoids. M ethods The acute alcoholif liver d isease morlel was established hy ethanol gavage. 70 m ale SPF grade Sprague Dawley rats were random ly divided into 7 groups, 10 for each gro u p, in c lu d in g：norm al gro u p, m odel control group, l^ifendate positive group. Radix Puerariae lohatae, Puerariae；lobata^Flos group, Rnclix Puerariae lohatae total flavone group and Puerariae lohatae^ Flos total flavone group. Serum and liver tissue were rollecterl after 15 days. Autom atic biochem ical analyzer was used for delecting serum alanine am inotransferase, aspartate am inotransferase, blood urea nitrogen, triglyceride. Total cholesterol, high density lipf>protein cholesterol and low d en sity lip o p ro te in c holesterol. H em ato x y lin—eo sin sta in in g m ethod w as u sed to o b serv e th e pathological changes of liver tissue. Results Com pared with the model group, all the treatm ent groups ro u ld significantly reduce the serum urea nitrogen and serum triglyceride lev els, while there was no significant difference betw een the groups of total cholesterol, high aiul low density lipoprotein cholesterol, and only the Radix Puerariae lobatae group could significantly reduce level of total cholesterol and high and low density value protein rholesterol. Conclusion E xcessive white spirit taken ra n cause liver and kidney injury. T he flavonoids of Radix Puerariae lobatae and Puerariae lohatae Flos w ere the active com ponents, hut the effect was not as good as the total extracts.
K eyw ords: alcoholic liverrlisea.se; ALD; Radix Puerariae lnhatae^;Puerariae lohata^Flos
酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD )是—■种由酒精摄入过度引起的肝脏中毒疾病，早期通常表现为脂肪肝，进而可引发酒精性肝炎（alcoholic hepatitis,AH )、肝纤维化和肝硬化等。

近年来，ALD 发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着人类健康。

ALD在治疗上仍以戒酒和营养支持为主，至今没有特殊有效的方法能明确的提高患者的生存率:ALD 在发达国家占酒精相关疾病的比例最高，在发展中国家预计比例将迅速上升m。

因此，寻找和开发防治A LD的有效药物是当前研究的重点。

葛根和葛花为传统解酒中药，虽来自同一植物，为药食同源中药。

《名医别录》曰：“葛花干末，酒服，饮酒不醉也”。

甄权、陈藏器等历代医家均认为葛根可以解酒毒。

《本草正义》称葛根“最能开发
基金项目：江苏省卫生健康委员会项目（Z2017017 );国家f t然科学基金青年基金（81702422 )
作者简介：张国哲（1979-)，男（满族),辽宁丹东人，讲师.博士，研究方向：中药防治肝病及中药成分代谢. 通讯作者：梁晓东（1980-),男，江苏盐城人.主治医师，硕士，研究方向：病理生理学
辽宁中医药大学学报22卷
30.37 ±2.12 26.82 ± 1.67 A 24.63 ±4.36 ^ 24.66 ± 336 A 27.79 ± 2.37 A 28.65 ±2.21 27.03 ±2.72 厶
注：与正常组比较，APcO .OS ;与模型组比较，☆P <0.053.2 葛根、葛花对大鼠血清ALT 、AST 和BUN 的影响
各组大鼠血清A L T 、A ST 和BUN 水平如表2所 示。

各组大鼠血清ALT ,与正常组相比，A LT 均有 所增加，但只与葛根组、葛花组和葛根总黄酮组相 比差异有统计学意义（P <〇.〇5 )，而其它各组之间差 异无统计学意义。

肝脏另一项重要检测指标血清 AST ,与正常组相比，模型组和阳性对照组血清AST 含量显著增加（P <〇.〇5 ),葛根总黄酮组显著降低 (P <0.05 );与模型组相比，各中药治疗组均可以显著 降低血清A ST 含量（P <0.05 ),而阳性对照组与模型
型吒所有大鼠均给予基础饲料，A 由进食、饮水 每天上午，正常组和模型组按1 mL /10 g 鼠重蒸馏水 灌胃，其它各组按相应浓度1 mL /10g 鼠重给药，下 午除正常组灌胃蒸馏水，其它各组按照1.2 mL /100 g 鼠重灌胃牛栏山二锅头白酒，连续15 <1后，10%水合 氯醛腹腔注射麻醉，眼眶静脉丛采集大鼠血清，摘取 肝脏，切取肝组织置于10%福尔马林中备用。

2.1.3 动物给药
阳性对照组（联苯双酯片治疗）：3 mg /100 g 鼠 重给药，用蒸馏水配制得0.003 g /10 m L 药液，即 0.3 mg /m L ;葛根组：水煎煮后旋转蒸发仪浓缩制备 药液，I mL /10 g 鼠重给予I g /m L 生药量；葛花组：水 煎煮后旋转蒸发仪浓缩制备药液，I mL /10 g 鼠重给 予1 g /m L 生药量；葛根、葛花总黄酮：用0.5%羧甲 基纤维素钠制备0.15 mg /m L 混悬液，按150 mg/k g 鼠 重给药。

2.2 指标检测
2.2.1 血液生化学指标检测
全自动生化分析仪测定大鼠血清A LT 、A ST , BUN 、T C 、T G 、H D L-C 和 LDL-C 水平。

.2.2.2 组织病理学检查
取肝左叶相同部位，用10%中性福尔马林固 定，石蜡包埋，苏木精-伊红（HK )染色后，于光学显 微镜下观察肝组织病理学改变。

2.3 统计分析
采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，数据以 (S ±s )表示，多组间比较用单丙素方差分析（One Way ANOVA )方法，P <0.05有统计学意义。

3 结果3.1
各组大鼠体质量差异连续给药15 d 后，模型组、阳性对照组和葛根总 黄酮组各剩余6只大鼠，每组死亡4只；葛花组和葛 花总黄酮组各剩余9只大鼠，每组死亡I 只；正常组
和葛根组大鼠全部存活。

测得各组大鼠体质量如表 I 所示，正常组体质量最重，与模型组比较差异有统 计学意义（P <0.05 )，其它各组与模型组相比差异无 统计学意义（P >0.05 )，说明酒精可能会对消化系统 造成损伤，影响食物的摄人
表I 各组大鼠第15天体质M 比较（I ±s )
WW \
n
体质量（g )
脾胃清阳之气 '解酒过程主要是通过抑制乙醇的 吸收或加速乙醇的代谢两种方式，但葛根和葛花成 分及解酒机制都不尽相同。

葛根与葛花的解酒作用 已经得到公认，有学者分别测定葛根和葛花与酒精 混合后酒精比重的变化，发现二者均可以提高酒精 的比重，且葛根效果优于葛花'虽然有报道葛根和 葛花对小鼠酒精性肝损伤均有较好的保护作用' 但未见关于两味中药解酒作用比较的其它研究，也 未见关于两味中药总黄酮的解酒研究。

因此，本实 验通过酒精灌胃法建立急性酒精肝损伤大鼠模型, 评价葛根、葛花的解酒活性差异及作用机制。

由于 异黄酮类成分为葛根、葛花中的主要活性成分，因 此，本实验也对两味中药的总黄酮类成分进行了解 酒活性的比较。

1 实验材料1.1 实验动物
S P F 级雄性S D 大鼠70只，体质量200~220 g ,购 自南通大学实验动物中心，实验动物生产许可证号 SCXK (苏）2019—000“1.2 样品
葛花、葛根药材购自江西上饶市当地药农，由 江苏医药职业学院宋建平教授鉴定。

葛花水提物、 葛根水提物采用传统水煎煮方法，用旋转蒸发仪浓 缩至1 g /m L 生药量浓度；葛根素（纯度>98%,盐城 市药检所）；联苯双酯片（北京协和药厂）；牛栏山 二锅头白酒（北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒 厂）。

葛根总黄酮、葛花总黄酮：葛根、葛花粉碎成粗 粉，用70%乙醇回流提取2次，每次2 h ,合并2次提 取液，旋转蒸发仪浓缩至浸膏，加蒸馏水沉淀杂质， 抽滤除去杂质得滤液。

AB -8大孔吸附树脂加蒸溜 水装柱，用漏斗缓慢加样品水溶液，吸附完全后，先 用蒸馏水洗脱杂质，再用70%乙醇洗脱总黄酮，乙 醇洗脱层旋转蒸发仪减压浓缩干燥，研钵研成细粉， 以葛根素为对照品，紫外分光度度仪在250 n m 处测 定吸光度建立标准曲线，样品稀释至标曲范围，测 定吸光度值确定总黄酮纯度―51.葛根总黄酮含量为 58.3%,葛花总黄酮含量为52.5%。

1.3 主要试剂
无水乙醇（分析纯），甲醇（色谱纯）；水合氯醛, 10%福尔马林，均购自盐城春雨化X 试剂公司。

1.4 主要仪器
全自动生化分析仪（R o rh e ，CohaS C 701 ),转轮 式石錯切片机（HM 340E , MICKOM ),超声波清洗机 (SB -5200D ,上海双旭电子有限公司），旋转蒸发仪 (RE 52C ,上海亚荣），紫外分光光度计（UV 1801 ,北 京瑞利），光学显微镜及图像系统（1000,江南永 新），高速低温离心机（TG L 16K ,湘仪）。

2 实验方法
2.1 动物分组、模型建立与给药2.1.1 动物分组
S P F 级雄性SD 大鼠70只随机分为7组：正常 组、模型组、阳性对照组（联苯双酯片）、葛根组、葛花 组、葛根总黄酮组和葛花总黄酮组，每组10只。

2.1.2 模型建立
采用白酒灌胃法建立急性酒精性肝损伤模
30
组 酮酮
组
组照组组黄黄 常型对根把总总 正模性葛葛根花 阳
葛葛
22 %
辽宁中医药大学学报
TG
0.57 ±0.08 2.79 ± 0.47 A 0.57 士 0.05、 0.59 ±0.08
0.68 ±0.18 0.62 ±0.09 0.54 ±0.10'.
TC ______1.83 ±0.27 2.14 ±0.35 2.33 ±0.32 A 1.65 ±0.23* ♦ 2.20 ± 0.27 A 2.28 ± 0.66 A 2.22±0.37A HD L-C 0.59 ± 0.07^ 0.55 ±0.10 0.67 ± 0.07 A 0.50 ± 0.05 A + 0.63 ± 0.05 0.65 ± 0.07 0.62 ± 0.09
LDL-C
0.34 ± 0.08
0.41 ±0.14 0.5 丨 ±0.15 0.26 ±0.07*. 0.45 ±0.06 A 0.44 ±0.12、 0.46 ± 0.07
注：与正常组比较，A P c O .OS ;与模型组比较，☆P <0.05;与阳性对照组比较，♦P <0.053.4
肝组织形态学改变
注：A .正常组；B .模型组；C .阳性对照组；D .舄根组;K .葛花组；F .葛根总黄酮组；G .葛花总黄酮组
丨冬 11各组大鼠HE 染色的肝组织切片图（400 x )
如图1所示，光镜下可见正常组大鼠具有正常 肝小叶结构，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状索 形整齐排列，肝细胞轮廓清晰，呈多边形，肝血窦结
构清晰。

模型组大鼠肝小叶周边大片的变性细胞， 肝细胞呈圆形疏松状以水肿为主，部分为无细胞核 的坏死肝细胞，肝小叶之间界限不清，小叶周边部失 去肝细胞索结构，而中央静脉附近肝细胞较为正常。

阳性对照组大鼠中央静脉附近肝细胞索排列整齐， 但仍然可见炎症细胞浸润，坏死程度降低，肝小叶边 缘肝细胞仍然可以见到胞质疏松的肝细胞，细胞呈 圆形，可观察到水样变性，葛根组可见肝细胞肿胀， 有少量的无细胞核肝细胞，表示有轻微的细胞坏死， 未见细胞空泡结构。

葛花组可见肝细胞索结构正常， 肝小叶之间界限清晰，水样变性完全消失，细胞核结 构清晰，但有少量细胞胞质肿胀葛根和葛花总黄 酮组，可见中央静脉附近的肝细胞呈条索状正常排 列，偶见细胞核消失，而小叶周边肝细胞胞质有轻微 肿胀，疏松的K 域明显小于模型组，说明葛根、葛花 总黄酮对ALD 有一定的治疗作用。

4 讨论
中医将酒精性肝病归于“酒疸”“酒癖”“酒臌” 等范畴。

《本草纲目》曰：“酒，少饮则和血行气，多 饮则杀人顷刻”，认为少量饮酒对机体有益，而过量 则有害。

《诸病源候论》曰：“酒性有毒，而复大热， 饮之过多，故毒热气渗溢经络，浸溢腑脏，而生诸病 也。

”认为大董饮酒能够助生湿热之邪，长期大剂量 饮酒则使湿热之毒蕴结于脾胃，使人体正常升降出 人之气机停滞，推动津液、血液运行无力，聚湿成痰、 气滞血瘀日久，气、血、痰瘀等相互搏结，引起一系列 肝脏损害。

临床上以去除酒毒、调肝气、清湿热、护
31
组之间无统计学意义（P >〇.〇5 )血清中另一项指 标BU N 含f l 可以间接反应肾脏排泄水平，与正常 组相比，模型组B I I N 水平®著增加（P <0.()5 ),与模 型组相比，而各治疗组均⑴'以著降低B U N 水平 (P <0.05 ),而与正常组相比，各治疗组仍然未达到 正常的水平（P <〇.〇5 ),其中以莴花组最接近正常水 平。

表2 各组大鼠血清ALT , AST 和BUN 比较（i ± >.)
组别11
ALT
AST
BUN
正常组
10
34.14 ±4.11
82.6 ±5.52 & 3.59 ± 0.62 〃
模型组639.10 ±3.5698.00 ± 5.37 A 8.02±0.76A*阳性对照组639.25 ± 7.08100.90 ± 7.99 A 4.99 ± 0.41A*葛根组1040.51 ±5.43 A 88.63 ± 10.58 ♦ 4.43 ± 0.72葛花组943.93 ± 7.52 A 86.54 ± 7.58 ♦ 4.20 ± 0.42 ^葛根总黄酮640.17 ± 3.94 A 73.57 ±4.64A ♦ 4.87 ± 0.54 厶办葛花总黄酮
9
35.41 ±4.07
78.27 ±6.31 ♦
4.54 ± 0.67
注：与正常组比较，A P <〇.〇5;与模型组比较，☆
P <0.05;与阳性对照组比较，♦ P <0.()5
3.3
葛根、葛花对大鼠血清T G 、T C 、H D L -C 、L D L -C
的
影响
由于饮酒是引起脂肪肝的*要因素，W 此，本实 验选择脂类相关指标进行检测，结果如表3所示，关 于血淸T G ,与正常组比较，模型组血清T (;水平显著 增力丨K P <0.05 ),而阳性对照组和各中药治疗组均可 以显著降低血清T G 水平，且达到正常水平，与正常 组比较差异无统计学意义（P >〇.〇5 );关于血清T C , 除葛根组外，模型组和各治疗组的血清T C 均有所上 升，而各治疗组之间差异无统计学意义（P >〇.〇5 )， 中药治疗葛花组、葛根总黄酮和葛花总黄酮组的血 清T C 水平要显著高于正常组（P <0.05 ),而葛根组血 清T C 水平则®著低于模型组（P <0.05 >, LDL -C 的 组间变化趋势与血清T C 变化趋势完全一致关于 H DL -C ，各组间变化趋势也与T C 大体相似，与正常 组比较，模型组血清HI 儿-C 略有降低，差异无统计 学意义（P >0.05 )，葛根组显著降低（P <0.05 ),,
表3 各组大鼠血清TG 、TC 、HDL -C 、LDL -C 比较（5 ±s )
SI
6 6 0 9 6
9
组 酮酮
组组照组组黄黄 常型对根花总总 正模叶莴莴根花 阳
葛
寫
辽宁中医药大学学报22卷
脾肾治疗为主，与现代医学采用抑制甘油5酯合成、保肝降酶、改善肾功能等治疗思路冇相似之处|71。

现代研究发现，莴花"f加速乙醛在人和大鼠体
内的排除W，能够在乙醇的肠胃吸收及代谢两个环
节发挥作)H，葛花中的皂角IV•成分具冇保肝作用，异黄酮成分可使血中乙醇、乙醛浓度r降，以及降低血清尿素氣（Wood urea nitrogen，BUN )水平丨9丨.野岛花•通过提高乙醉脱氛酶（<U‘hyli'()genase，ADH )和乙酸月兑氣酶（Al(lehy<lf>U iy flro g en ase, AU)H )的活性，力II速酒枯的代谢，起至IJ解酒作
J111^11;葛花及其活性成分4降低泗粘:屮毒引起的
小鼠死亡率，可以对抗酒精引起的大鼠（Methylene ilioxyamplietamine,MI)A)、A LTfllA ST的升尚丨l_ n|,并通过增强超氧化物歧化酶（siipei'mide (lism iilase, SOD )和谷肤甘妝（glutathione，r-glutam yl r.ysteingl +glyrine,(;SH >的活性，加强'丨#除i t丫丨性的超辑
离子，从而达到保肝的作川M现代研究发现葛根
|可通过抑制自由基释放、减轻脂质过K化、解除血管终:挛、改善血液流变学等机制对納粘十丨•:肝病起到防
护作用||4_|81。

葛根中主要化学成分为大豆苷、大u
苷元及葛根素，通过口服可抑制酒精摄人引起的兴
奋作）1彳研究发现莴根提取物（念心莴根素、大豆苷、大豆苷元、染料木（_i、染料木黄W等异黄酮成分）明诚抑制酒精喜爱屯丨大鼠的M粘:极人和减轻M枯 成断症状葛根提取物nf W.冷降低W l M者的饮洒M1,9丨。

本实验采川酒桔灌胃法让、>'.大鼠肝损伤模型
通过肝组织切片可以明显发现，校哦绀肝组织受到
破坏，而各治疗组冇使肝细胞的变f l:、坏死减轻，肝 组织损伤改善改善的趋势，几中以兑根、葛花总提
物效果最好；酒精可使大鼠血清AST水平升高，而 各屮药治疗组均可以降低血淸AST水平；饮酒对大
鼠血清A L T的升高趋势并不明M,且各治疗组也没
冇明敁的降低趋势这是由于納'粘灌W造模只能
引起肝脏A ST和A1,T的轻度汗A'W N nJLU
反映肾脏功能，实验发现，酒精灌腎可以显著升高
血淸IU1N水平，破坏厂肾功能，Ifll'各治疗组可以明
显降低血清BUN水平，其中以葛花组治疗效果最为
明M新甫勇次郎研究也发现，舄花屮的异黄酮类
成分及=萜皂苷类成分均可以抑制乙醇诱导的小鼠
血中BUN升高水平|2n|。

酒精在体内80%经过肝脏
代谢，还有20%经肾脏和肺脏代谢，而目前研究多
数集中在肝脏损伤方Ifll'，而忽略f对肾脏和肺脏的
损伤，尤其急性酒精中毒引起的肾脏损伤指标更容
易被忽视，实验结果证实丫捫桔对肾功能的危害，今 后应加强此方向的研究酒祜坫引起脂肪肝、动脉粥样硬化等脂类疾病的重要原W，实验发现，酒精灌
胃吋以显著提高大鼠血淸T(;水平，|fi丨'葛根、葛花水
提物及各自的总黄酮均可以M著降低T G水平，起到
治疗作用，而有研究发现莴花111提取物中的：萜 阜苷•制备层也可以显著降低乙醇诱导的血清T G升 高|lh|,说明葛花中的班m类和•:萜&卄类成分均为
降低了(_;的活性成分而实验各纟U l〖IL淸T C、HDL-<: 和丨J)L-C含量并没有显著的改变，只有中药葛根
可以显著降低血清T C、HDL-C和LDL-C水平。

已 经有学者对葛根和葛花之间的组方丁.艺进行了研
32究|61，本研究过程中发现，葛花组大鼠状态最好，而 总根对降低大鼠)m固醇效果史好，二者各有优势a:光镜下也发现，舄根和莴花水提物对酒精引起的肝组织损伤都有很好的修釔作川，效果优于联苯双酯片及葛根、葛花总黄酮w此，临床对酒精性肝损伪，可幵发葛根、莴花联合使川的药物进行防治、以上实验表明，过a丨'丨酒可引起大鼠肝损伤以及肾损伤，葛根、莴花均可以a著降低大鼠血清枨素铽和血清甘油q酯水平，而对血清总胆固醇，高、低 密度脂蛋闩胆同_各组间尤明敁作用；葛根组可以w.著降低血清总胆固醇和高、低密度值蛋白胆固醇水平葛根、葛花在治疗酒精性肝肾损伤方面可以[•办m使川；葛根、葛花总黄酮为解酒活性成分，似解泗效果不如总提物♦
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