小鼠免疫器官实验心得

小鼠免疫器官实验心得
步骤：
1、准备等体积PBS 含25～100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液（200～400 μl/鼠）。

用双头带塞的连接器连接两个注射器，一个注射器装抗原，另一个装佐剂。

来回推压注射器，使得其内容物从一侧到另一侧注射器，推压 5～10 min 直到得到稳定的乳化液。

2、用 22－G 的针给小鼠腹腔注射（每一个抗原 3～5 只小鼠）。

3、3 周后，用等体积的含 10～50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐剂配制成（200～400 μl）的乳化液再次腹腔注射。

4、第二次免疫后 7 天，用无菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴
0、5 cm 采血。

收集 100～200 μl 血装于
1、5 ml 的微量离心管。

将小鼠放在产热灯下 30～60 s 保暖或用拇指和食指挤压尾巴可以方便采血。

5、血块形成后，用木制涂棒把血块从管和表面移走，不要弄破血块。

移走血块后，用200μl 的移液器把血清装入另一微量离心管。

经 ELISA 确定血清抗体滴度。

如有需要，用免疫印迹，进一步对抗体定性。

6、如果滴度太低不能用于融合（≥1/1000），每两周给小鼠加强免疫直至达到足够的应答。

如果采血超过 3 次，用剃毛刀切开一侧尾静脉采
血。

7、当抗体滴度足够高时（≥1/1000），融合前3 天，但要在前一次免疫的 2 周后，用含 10～50 μg 抗原的 PBS 溶液腹腔注射（200～400μl）或经皮下尾静脉（50～100μl）注射加强免疫。

8、在强化免疫的 3 天后进行细胞融合。

心得：
1、免疫防御（Immunological defence)：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。

正常：可产生抗感染的作用(清除病原微生物及其他抗原)；
异常：应答过强或持续时间过长——超敏反应；应答过弱——免疫缺陷疾病。

2、免疫监视（Immunological surveillance）：指免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变和病毒感染细胞的一种生理保护作用。

丧失——肿瘤发生；病毒持续感染
3、免疫自稳（Immunological homeostasis）：指免疫系统通过调节网络实现免疫系统功能相对稳定（清除损伤的细胞或衰老的细胞）。

自稳机制发生异常——自身免疫病。