用高效液相色谱法测定烫伤合剂中槲皮素的含量

抗感染药学Anti Infect Pharm 2012June;9(2)
周淑群，等.用高效液相色谱法测定烫伤合剂中槲皮素的含量
DOI ：10.3969/j.issn.1672-7878.2012.02-014网络出版时间：2012-04-2008:31
网络出版地址：/kcms/detail/32.1726.R.20120420.0831.014.html
用高效液相色谱法测定烫伤合剂中槲皮素的含量
周淑群*，周定球，刘丽珍
广西医科大学第四附属医院，广西柳州545005
【摘要】目的：建立烫伤合剂中金银花所含黄酮类成分槲皮素的含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法，色
谱条件为色谱柱Kromasil C 18柱，流动相为甲醇-0.02%磷酸溶液（50∶50），流速为1.0mL/min ，柱温为30℃，检测
波长为350nm ，测定烫伤合剂中槲皮素的含量。

结果：经测定，烫伤合剂中槲皮素的质量浓度在0.80~8.00µg/mL
范围内，线性关系良好，平均回收率为102.3%，RSD 为2.36%，槲皮素的质量浓度为68.83µg/mL 。

结论：该方法快
速简便，专属性强，重现性好，可用于烫伤合剂中金银花主要成分槲皮素的质量控制。

【关键词】烫伤合剂；金银花；槲皮素
【中图分类号】R 927.11【文献标志码】A 【文章编号】1672-7878(2012)02-131-002
烫伤合剂为我院医院制剂，其处方由金银花、虎杖、两面针、地榆、十大功劳五味中药材组成，具有收敛止痛、抑菌，减少渗出，促进伤口愈合等功效；治疗烧伤、烫伤等，外搽，疗效显著，深受患者青睐。

为控制该制剂中槲皮素的质量，笔者采用高效液相法，建立了烫伤合剂中金银花所含黄酮类成分槲皮素[1-2]的含量测定方法，以有效控制该制剂的质量。

报告如下：1仪器和试药1.1仪器LC-10AT 型高效液相色谱仪（日本岛津），UV-24010PC 型紫外分光光度计（日本岛津），SPD-10A 型检测器、CLASS-VP 6.12SPI 色谱数据系统、BP211D 型电子分析天平（北京赛多利斯），0412-1型离心机等。

1.2试药对照品：槲皮素（批号：100081-200406，中国药品生物制品检定所），磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为注射用水。

供试品：烫伤合剂（本院制剂，批号为111201，111210，111226），由金银花62g 、虎杖62g ，两面针120g ，地榆70g ，十大功劳120g 组成。

制法：先将金银花置中药多功能提取罐中加水浸泡1h ，采用水蒸气蒸馏法提取芳香水，备用；将虎杖、两面针、地榆、十大功劳与蒸馏后的药渣一起加水浸泡4h ，煎煮提取2次（1h ，0.5h ），合并2次煎煮液，过滤。

将此滤液浓缩至所需量，加入防腐剂，总体积为1000mL ，搅匀，分装500mL/瓶，流通蒸气灭菌，即得。

1.3标准品溶液和供试品溶液的制备
1.3.1标准品溶液精密称取槲皮素对照品适量，加50%甲醇溶解，稀释，定容，制成173µg/mL 的槲皮素标准品溶液。

1.3.2供试品溶液精密量取供试品5mL ，置10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置10min ，吸取上
清液，离心20min ；取离心后的上清液，用针式过滤器
过滤，即得供试品溶液。

1.3.3阴性供试品溶液取处方除金银花外的其余4味中药，按处方比例制成阴性对照品，再按供试品溶液制备方法，制得阴性供试品溶液。

2材料与方法
2.1色谱条件
采用色谱柱为Kromasil C 18柱，流动相为甲醇-0.02%磷酸（50∶50）混合液，流速为1.0mL/min ；柱温为30℃，检测波长为350nm ，进样量为
20.0µL 。

取“1.3”标准品溶液和供试品溶液的制备项下的标准品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各20.0µL ，采用高效液相紫外检测法，其色谱情况，见图1。

2.2线性关系
精密量取“1.3.1”标准品溶液项下的标准品溶液50，100，200，300，400，500µL ，分别置10mL 棕
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86-512-66607096色量瓶中，用水稀释到刻度，分别取样进样20µL 。

以槲皮素的质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积响应值
（A )为纵坐标，进行线性回归，得槲皮素的回归方程A ＝88937ρ＋30965（n ＝6，r ＝0.9948），其线性范围为0.80~8.00µg/mL 。

2.3精密度试验取“2.2”线性关系项下的中间浓度的标准品溶液，分别按“2.1”色谱条件项下方法，进样测定6次，测得槲皮素的峰面积响应值（A )的平均RSD 为1.06%。

2.4稳定性试验取供试品，按“1.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，分别在初始时，每间隔1h 按递增法测定6次，记录峰面积响应值（A )，测得槲皮素的平均RSD 为2.11%.2.5重复性试验取同一批供试品5份，分别按“1.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，记录峰面积响应值（A )，计算其含量，测得槲皮素的平均RSD 为1.61%。

2.6回收率试验精密吸取同一批已知含量的供试品溶液6份各5mL ，分别加入31.60µg/mL 标准品，按“供试品溶液的制备”项下处理，依法测定各份加样后的回收率。

其平均回收率为102.30%，平均RDS 为2.36%。

2.7供试品的测定取批号为111201，111210，111226的3批供试品，分别按“供试品溶液的制备”项下方法操作，测定供试品中槲皮素的含量。

其测定结果，见表2。

3讨论对流动相的选择，黄酮类成分在HPLC 测定中易出现拖尾现象，考察显示在流动相中加入磷酸液，克服了黄酮类成分槲皮素的拖尾，提高了峰形的对称
性[3]，同时也改善了分离度。

对提取溶剂的选择，结
合实验的实际情况，以及以实际操作简便为优先考虑原则，采用甲醇-供试品溶液（5∶5）的比例提取与测定槲皮素的含量。

烫伤合剂为纯中药制剂，方中金银花
具有清热解毒、抗菌消炎之功效，而槲皮素是金银花
的主要活性成分之一[1，4-5]。

因此，检测该制剂中有效成分槲皮素的含量，以有效控制其质量，保证其疗效。

参考文献
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（收稿日期：2012-03-01修回日期：2012-03-12）（责任编辑：
丁龙其）010*******
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A.对照品；
B.阴性对照品；
C.供试品
图1槲皮素的色谱图
A B C 表2供试品（烫伤合剂）中槲皮素的含量测定结果（n =3）供试品批号111201111210111226槲皮素的含量（ρB /µg ·mL －1）58.11±1.2083.10±1.5165.32±1.80RSD(%)
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