正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取工艺

正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取工艺
葛亮;施洋;曾诚
【摘要】目的研究新疆党参总黄酮的最佳提取工艺.方法采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法测定新疆党参总黄酮的含量,通过单因素考察及正交试验进行提取工艺优选.结果超声提取新疆党参总黄酮的最佳工艺为:超声提取3次,乙醇浓度为80%,料液比(g/mL)为1∶20,超声时间为30 min,测得新疆党参总黄酮的含量为0.192%.结论亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法操作简单快捷,适用于提取新疆党参中的总黄酮.【期刊名称】《新疆医科大学学报》
【年(卷),期】2013(036)007
【总页数】3页(P945-947)
【关键词】新疆党参;总黄酮;超声提取;正交试验
【作者】葛亮;施洋;曾诚
【作者单位】新疆名医名方与特色方剂学重点实验室;新疆医科大学中医学院,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学中医学院,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学学报编辑部,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学中医学院,乌鲁木齐,830011
【正文语种】中文
【中图分类】R914.1
新疆党参Codonopsis clematidea （schrenk）Clarke为桔梗科党参属多年生草本植物，药用其根，其性甘、平，补脾胃，益气血，生津止渴，是重要的传统补益
中药，民间用于治疗功能性子宫出血、体虚无力、胃下垂、风湿性心脏病等［1］。

新疆党参在新疆分布广泛，资源丰富。

据报道新疆党参含12种生命必需微量元素［2］，含37种挥发油［3］，含糖类、黄酮、生物碱等成分。

已有报道运用微波技术从新疆党参中提取总黄酮［4－6］、多糖并测定其含量［7－10］，测定新疆党参中豆甾醇、果糖的含量［11］，新疆党参在小鼠脑内抗自由基作用优于潞党
参［12］。

现阶段有关新疆党参化学成分的相关报道较少，对其总黄酮的提取工
艺研究未见报道。

本试验首次采用单因素考察结合正交试验优选新疆党参中总黄酮超声提取最佳工艺，为新疆党参的进一步开发利用提供理论依据。

1 仪器与试药
1.1 仪器TU－1810PC可见紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），梅特勒AL204电子天平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司），KQ－400DB型
数控超声器（昆山市超声仪器有限公司），RE－52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），BS2202S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

1.2 试药新疆党参采自新疆乌鲁木齐市昌吉地区（干燥粉碎为细粉备用），经新
疆医科大学附属中医医院李永和主任药师鉴定为菊科植物新疆党参Codonopsis clematidea（schrenk）Clarke的干燥地上部分和根。

芦丁标准品（成都曼斯特
生物制品有限公司），其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 芦丁标准溶液的制备精密称取于120℃干燥至恒重的芦丁标准品10.00mg，
置于50mL的容量瓶中，加入70%乙醇，超声使之溶解，并用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，制成0.2mg／mL 的芦丁标准品溶液。

2.2 标准曲线的建立采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法，精确移取芦丁标准溶
液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别加入体积分数为70%的乙醇至
6.0mL，加入5%NaNO2 溶液1mL，混匀，放置6min，加入10% Al（NO3）3
溶液1mL，混匀，放置6min，再加入5%NaOH 溶液10mL，摇匀，最后加入体积分数为70%的乙醇定容至25 mL，放置15min，进行全波长扫描，在510nm 处有最大吸收。

以510nm 处的吸光度（Y）为纵坐标，以样品浓度（X）为横坐标，计算得标准方程：Y ＝11.696 4 X－0.002 4，r＝0.999 7。

2.3 新疆党参中总黄酮含量的测定精密称取一定量的新疆党参细粉，用一定量、
一定体积分数的乙醇在一定条件下采用超声提取，将过滤得到的滤液定容，得供试品溶液。

精确移取供试品溶液2mL，按照“2.2项下”操作，在最大吸收波长
510nm 处测定吸光度，根据标准方程计算新疆党参中总黄酮含量。

2.4 提取工艺研究经过预试验与单因素考察，确定超声次数为3次，选择料液比（A）、乙醇浓度（B）、超声时间（C）3个为考察因素，每个因素选择3个水平（表1）。

采用L9（34）正交设计，以总黄酮含量为考察指标，优选新疆党参总
黄酮的最佳提取工艺，试验安排与结果见表2、3（其中D 为空白）。

表1 提取工艺因素水平表因素水平A：料液比／（g／mL）B：乙醇浓度／% C：超声时间／min 1 1∶15 70 15 2 1∶20 80 20 3 1∶25 90 30
表2 正交试验表列号序号A B C D评价指标总黄酮含量／%1 1 1 1 1 0.138 2 1
2 2 2 0.142
3 1 3 3 3 0.155
4 2 1 2 3 0.178
5 2 2 3 1 0.188
6 2 3 1 2 0.162 7
3 1 3 2 0.18
4 8 3 2 1 3 0.17
5 9 3 3 2 1 0.163 K1 0.435 0.500 0.475 K2 0.528 0.505 0.483 K3 0.522 0.480 0.527 R 0.093 0.025 0.052
表3 方差分析表注：F0.05（2，2）＝19.00。

变异来源离均差平和自由度均方F
比概率A 0.001 806 2 0.000 903 0 21.330 710 B 0.000 117 2 0.000 058 3
1.377 953 0.05 C 0.000 523 2 0.000 261 0 6.173 228误差0.000 085 2 0.000 042 3
2.5 精密度试验准确吸取样品溶液2mL，按样品含量测定方法连续测定6 次，其RSD 值为1.25%，表明检测仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验准确吸取同一新制备的样品溶液2mL，间隔60min测定1次，连续测定6次，其RSD 值为1.54%，表明样品溶液在6h内稳定。

2.7 重复性试验准确称取新疆党参细粉6份，每份各1g，按最佳工艺提取制备样品溶液，并按照样品含量测定方法处理并测定，结果RSD 值为1.65%，表明该法有较好的重复性。

2.8 加样回收率试验按上法制成6份样品溶液，分别加入芦丁标准溶液适量，同
法操作，测得其平均回收率为99.58%，RSD 为1.73%。

数据统计分析用正交设计助手ⅡV3.1，方差分析结果见表3。

从正交结果可知：各因素对综合评分的影响大小顺序为：A （料液比）＞C（超声时间）＞B（乙醇浓度），每个因素3个水平之间的趋势为A2＞A3＞A1、B2＞B1＞B3、C3＞C2＞
C1。

直观分析得提取工艺为A2B2C3，即超声提取3次，乙醇浓度为80%，料液比为1∶20（g／mL），超声时间为30 min。

方差分析结果表明：A 因素有显著
性影响（P＜0.05），B因素与C因素无影响。

全面综合考察以A2B2C3 组合为佳，即用80%乙醇超声提取3次，料液比1∶20（g／mL），超声时间30min。

2.9 验证试验根据上述试验所确定的最佳工艺A2B2C3，准确称取新疆党参细粉3份各1g，以确定的最佳工艺提取，测定其总黄酮的含量分别为0.195%、0.189%、0.192%，平均含量为0.192%。

结果表明，该工艺较稳定。

3 讨论
本研究所采用单因素考察结合正交试验优选新疆党参总黄酮的最佳提取工艺，可充分提取总黄酮成分，为开发利用新疆特色药用植物资源提供理论依据。

本试验采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法测定新疆党参中总黄酮的含量，其精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好，为新疆党参中总黄酮的含量测定提供了一种简便可行的方法，为新疆党参的质量控制提供了评价手段。

【相关文献】
［1］《新疆中草药》编委会.新疆中草药［M］.乌鲁木齐：新疆人民出版社，1976：241.
［2］陈敏，申世坤，李晓瑾.新疆党参中微量元素的测定［J］.西北药学杂志，1998，13（4）：152－154.
［3］陈敏，李晓瑾，姜林，等.新疆党参挥发油成分的研究［J］.中草药，2000，31（4）：254. ［4］张代佳，刘传斌，修志龙，等.微波技术在植物细胞内有效成分提取中的应用［J］.中草药，2000，31（9）：5－6.
［5］麦路德木·麦麦吐逊，李敏，胡君萍，等.益心巴迪然吉布亚（香青兰）颗粒中总黄酮含量测
定［J］.新疆医科大学学报，2009，32（5）：568－569.
［6］帕尔哈提·克里木，蔡宇，阿斯亚·拜山伯.新疆草棉花总黄酮的提取工艺研究［J］.新疆医科
大学学报，2005，28（3）：193－195.
［7］曾昭钧，李香文.微波有机化学进展［J］.沈阳药科大学学报，1999，10：304－309.
［8］任爱农，鞠建明.野菊不同部位的总黄酮含量测定［J］.中草药，1999，30（8）：589. ［9］周静，李艳，薛梅，等.酸浆果多糖的提取及含量测定［J］.数理医药学杂志，2000，13（3）：242.
［10］李艳，孙萍，鲁建江，等.新疆党参多糖的提取及含量测定［J］.新疆中医药，2001，19（3）：9－10.
［11］陆蕴茹，杨晓云，沙德智.五种党参的豆甾醇、果糖的含量测定［J］.中国中药杂志，1989，14（8）：36－38.
［12］陈敏，熊元君，李晓瑾，等.新疆党参和潞党参对小鼠脑SOD、MDA 的影响［J］.中草药，2000，31（4）：280－281.。