制剂分析 外标法,内标法与混标法

书P83例7（内标法）：本品每1g含樟脑164mg，P86例8（外标法），P86例9本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg，供试品制备取样量为1g.（对数方程外标两点法）可参考P231-233，6个验证内容。

小儿热速清口服液中黄芩苷的含量测定(外标一点法)：
（1）对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品约10mg，精密称定，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置热水浴中振摇使溶解，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

（实际浓度为0.0504mg/ml)
（2）供试品溶液的制备：精密量取本品0.5ml，置D101大孔吸附树脂柱（内径约1.5cm，柱高10cm）上，用70ml水，以流量1.5ml/min洗涤，继续用40%乙醇洗脱，弃去7~9ml，收集续洗脱液，置50ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得。

（3）标准曲线的绘制：精密吸取浓度为0.0504mg/ml的黄芩苷对照品溶液1.0ml，2.0ml，5.0ml，8.0ml，10.0ml，分别置10ml的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

精密吸取上述对照液10ul注入液相色谱仪，记录峰面积。

以进样量X（ug/ml）对峰面积Y进行回归处理，得回归方程Y=25.540x-0.1061（r=1.0000），结果见表1，表明黄芩苷进样量5.04~50.4ug/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，如图。

表1 黄芩苷对照品的线性关系考察
进样量(ug/ml) 峰面积回归方程相关系数
5.04 128.7
10.08 257.5
25.20 643.1 Y=25.540x-0.1061 r=1.0000 40.32 1029.6
50.40 1287.3
（4）专属性试验：在与样品测定完全相同的条件下，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照液各10ul，进样分析，观察色谱图。

如图2，阴性无干扰，说明该实验方法的专属性较强。

（5）
A为对照品溶液 B为阴性对照液 C为供试品溶液
（6）精密度试验：精密吸取其浓度为25.20ug/ml的黄芩苷对照品溶液10ul。

重复进样6次，测得黄芩苷的峰面积积分值，详见表2。

表2 精密度试验结果
峰面积均值 RSD
643.1
643.5
642.9 643.1 0.11%
641.7
643.5
644.2
从上表可知进样6次黄芩苷峰面积的均值为643.1，RSD为0.11%（n=6），说明仪器的精密度良好。

(6)重复性试验：取同一批号的样品，分别按照（2）项下方法平行制备6份供试品，按样品含量测定方法测定，各精密吸取10ul进样，测得结果如表3所示。

表3 重复性试验结果
序号样品中含量（mg/ml) 平均含量（mg/ml) RSD
1 0.3047
2 0.3124
3 0.3015 0.3059 1.4%
4 0.2997
5 0.3097
6 0.3074
结果表明黄芩苷的平均含量为0.3059mg/ml，RSD为1.4%（n=6），表明方法重现
性好。

(7)稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8h进样
10ul，测得各次峰面积。

结果如表4所示
表4 稳定性实验结果
时间（h）峰面积平均值 RSD
0 257.5
2 257.3
4 257.0 257.
5 0.15%
6 258.1
8 257.8
结果RSD为0.15%，表明供试品溶液在8h内稳定。

（8）加样回收率试验：精密量取该样品溶液0.25ml，置50ml容量瓶中，共6份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（浓度为0.0504mg/ml）1.5ml，按（2）项
下供试品溶液的方法制备，在上述的色谱条件下进样10ul，测得峰面积，计算
黄芩苷的回收率及RSD。

结果如表5所示。

表5 黄芩苷加样回收率实验结果
取样量样品中含量加入量测得量回收率平均回收率 RSD (ml）（ug) （ug）（ug) (%) (%) (%) 0.25 75.12 149.76 98.7
0.25 75.53 148.83 99.5
0.25 74.97 75.6 147.93 96.5 97.8 1.20 0.25 75.76 147.87 95.4
0.25 76.12 150.23 98.0
0.25 75.07 147.83 96.2
黄芩苷的6个加样回收率均在95%~105%范围内，平均回收率为97.8%，RSD为1.20%，表明方法的回收率良好，准确度较高，方法可行。

本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg，供试品制备取样量为1g（外标二点法）
对照品：精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含黄芪甲苷0.515 mg 的溶液,作为对照品溶液。

供试品：取样品1g,精密称定，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理补重即得。

(1)线性与范围——线性关系考察
精密吸取对照液1.0，2.0, 3.0， 4.0，5.0 mL，置100mL量瓶中，加甲醇
稀释至刻度，摇匀，各精密吸取10μL进样，测定峰面积积分值。

以峰面积积分
值的对数为纵坐标（.Y)，以黄芪甲苷进样量的常用对数为横坐标（X ），绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=0.986 0X+ 5.5520,r= 1 ;黄芪甲苷在5.150~25.75μg 范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

进样量（ug/ml ） 进样量对数 峰面积对数 回归方程 相关系数 5.15 0.71 5.83 10.30 1.12 6.24 Y=0.986x+5.1320 r=1.0000 15.45 1.19 6.31 20.60 1.31 6.42 25.75 1.41 6.52
y = 0.986x + 5.132
R 2
= 1
5.7
5.85.96
6.16.26.36.46.56.60
0.2
0.4
0.6
0.81
1.2
1.4
1.6
浓度对数
峰面积对数
(2)专属性——专属性试验
在相同条件下，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照液各10ul ，进样分析，色谱图如下，（（A 对照品 B 阴性 C 样品））阴性无干扰，说明该实验方法的专属性较强。

（3）精密度
精密量取对照品溶液10uL ，连续进样6次，测得峰面积积分值如下表
由上表可知，RSD 为0.23%，表明仪器的精密度良好。

（4）重复性试验
取同一批样品6份，平行制备供试品溶液， 按样品含量测定方法测定，各精密吸取10ul 进样，结果如下表 编号 含量（mg/g ） 平均含量/（mg/g ） RSD/% 1 0.0854 2 0.0850 3 0.0831 0.0853 1.30 4 0.0864 5 0.0858 6 0.0849
上表可知，平均含量为0.0853mg/片，RSD 为1.30%，表明方法重现性好。

(5）稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8h 进样10ul ，测得各次峰面积，结果如下所示
间隔时间/h 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 0 219.8 2 216.5 4 220.6 2.34 1.01 6 223.2 8 218.5 结果RSD 为1.01%，表明供试品溶液在8h 内稳定。

(6)准确度——加样回收率试验
取6份供试品各0.5g ，按100%比例加入待测成分纯品
序号 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 1 230.8 2 230.6 3 231.3 2.36 4 230.3 5 229.6 6 230.2
0.23
序号 原有量（mg ） 加入量(mg) 测得量(mg) 加样回收率/% 平均值/% RSD/% 1 2 3 4 5 6 0.1001 0.1004 0.0996 0.1000 0.0999 0.0997
0.1000
0.2002 0.1996 0.2009 0.1998 0.2009 0.1999 100.1 99.2 101.3 99.8 101.0 100.2
100.3
0.7
试验结果表明，所建立的方法加样回收率较高，符合含量检测要求。

十滴水软胶囊中樟脑的含量测定（校正因子内标法）
对照品溶液的制备：精密称取樟脑对照品500mg ，置25ml 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。

（实际浓度20.0002mg/ml ）
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.8g ，精密称定，置具塞试管中，用无水乙醇真要提取5次，每次4ml ，分取乙醇提取液，转移至25ml 量瓶中，精密加入薄荷脑125mg ，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

(1) 线性关系考察：
精密吸取浓度为20.0002mg/ml 樟脑对照品溶液0.5、1.3、2.5、3.8、5ml ，精密加入薄荷脑50mg ，分别加无水乙醇稀释至10ml 。

精密吸取上述对照液1μl ，注入气相色谱仪，进1针。

以进样浓度X （μg/ml ）对平均峰面积Y 进行回归处理，的回归方程。

结果如下表1所示：
表1 线性关系考察结果（n=5）
进样浓度X （μg/ml ） 峰面积 标准曲线 相关系数
线性范围/
μg/ml 1000.01 250.1 y = 0.2508x + 0.2892 r=1.0000 1000.01~10000.1 2600.026 652.3
5000.05 1257.4 7600.076 1904.6 10000.1 2508.7
樟脑标准曲线
y = 0.2508x + 0.2892
R 2
= 1
0500100015002000
250030000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
进样浓度（μg/ml）
峰面积
由上表可知，指标成分进样量在1000.01~10000.1μg/ml 之间，线性关系较好。

(2) 精密度试验：
精密吸取浓度为5.00005mg/ml 的对照品溶液1μl ，连续进样5次，测得樟脑峰面积积分值。

结果如下表2所示：
表2 精密度试验结果（n=5）
序号 峰面积 平均峰面积 RSD/% 1 1257.5 1260.1 2 1264.9 3 1261.2 0.37 4 1263.8 5 1253.1
由上表可知，仪器精密度良好。

(3) 稳定性试验：
精密吸取浓度为5.00005mg/ml 的对照品溶液1μl ，每隔2h 进1针，连续考察8h 。

结果如下表3所示：
稳定性试验结果（n=5）
间隔时间/h 峰面积 平均峰面积 RSD/%
0 1258.4 1255.1 0.20 2 1256.7 4 1255.5 6 1253.1 8 1251.7
上述实验表明，指标成分在8h 内稳定性好。

(4) 专属性试验：
在与样品测定完全相同的条件下，精密吸取1μl 阴性对照液（取缺少樟脑的样品，用与供试品溶液相同的方法，制得阴性对照液），连续进3针，与对照品、
供试品色谱图比较（各色谱图标尺刻度相同），发现阴性无干扰。

说明十滴水软胶囊中樟脑的专属性较强。

(5) 重复性试验：
取同一批号本品装量差异项下内容物，混匀，取约0.8g ，共6份，平行制备成6份供试液，测得样品中樟脑的含量。

结果如下表4所示：
表4 重复性试验结果（n=6）
序号 取样量/g 樟脑含量/（mg/g ） 平均含量/
（mg/g ）
RSD/%
1 0.8001 164.0059 164.0118 1.10
2 0.800
3 165.0293 3 0.7998 161.9971
4 0.8004 165.0322
5 0.799
6 161.9876 6 0.8006 166.0189 由上表可知，仪器重复性良好。

(6) 加样回收率试验： 取同一批号样品0.4g ，置25ml 量瓶中，共6份，分别精密加入樟脑对照品65.6mg ，用与上文相同的方法制得供试液，测得样品中樟脑含量。

结果如下表5所示：
表5 加样回收率测定结果（n=6）
序号 取样量/g 原有量/mg 加入量/mg 测得量/mg 加样回收率/% 平均值
/% RSD/%
1 0.4003 65.6539
2 65.0056 129.9995 99.0 100.9 1.5
2 0.4001 65.62112 65.0061 130.6212 100.0
3 0.400
4 65.67032 64.9991 130.6684 100.0
4 0.3996 65.53912 65.0053 131.5533 101.6
5 0.3998 65.57192 64.9983 130.6727 101.
6 6 0.3999 65.58832 64.9979 130.7752 102.9
试验结果表明，所建立的方法加样回收率较高，符合含量测定要求。