第十三周周三化学实验の8纸层析-20130519-PPT精品文档

思考题
1、Rf值的意义是什么？哪些因素会影响Rf值？ 2、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？
终点线
2cm A B 起点线
1 丙氨酸 2 混合液
谢谢聆听
紫红色
+ RCHO + CO2
找出滤纸条上有几个斑点，并能辨认出各个斑点
是由哪一个氨基酸显现的。用铅笔划出斑点的轮
廓，标出斑点的中心，最后分别计算丙氨酸和亮
氨酸的Rf值。
实验数据
原点至层析斑点中心的距离 Rf = 原点至展开剂前沿的距离
计算 Rf 测 = ？
l
m
n
3、展开 将已点样的滤纸垂直挂于带有小钩的层析缸盖 上，使滤纸下端浸入展开剂中。当展开剂的前 沿位置达到距滤纸上端约12cm处时，小心取 出滤纸趁湿用铅笔划出展开剂前沿位置，然后 用电吹风吹干。
亮氨酸：
H H 2N C O O H
CH2 H 3 CC HC H 3

实验步骤
1、准备 在距滤纸一端约2cm处用铅笔 轻轻划一横线作起点线，并在 横线上标上A、B两点。
注意：A、B两点不要太靠近滤 纸边缘，以免产生边缘效应。 在准备过程中手不要接触滤纸 中部。
AB
2、点样 用毛细管吸取已准备好的样品 ，毛细管垂直于纸面在标有A 、B记号处，分别点两个样品 ，其中一个是丙氨酸样品，另 一个是丙氨酸和亮氨酸的混合 液。风干，按上述方法重复一 次。
A A+B B
样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的Rf 值（比移值）来鉴定。
A A+B B
原点至层析斑点中心距的离 Rf 原点至展开剂前沿的离距
l m n
R f ,A
n l
R f ,B
m l
Rf值随各化合物的结构、滤纸 的种类、展开剂、温度的不同
而异。但在上述条件固定的情
况下，对于某一化合物来说，
实验目的
1了解纸层析的基本原理 2 掌握纸层析的基本操作技术
实验原理
色谱法(Chromatography) ：混合物中各组分在流动 相与固定相间的分配比不同而使之分离
纸层析：滤纸作为载体；固定相为纸纤维上吸附的水 分；流动相为与水不相混溶的有机溶剂。 把试样点在滤纸的原点位置上，当流动相溶 剂在滤纸的毛细管作用下，连续不断地沿着 滤纸前进通过原点时，试样中各组分便随着 流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相 溶剂之间连续发生一次又一次的分配。
注意：展开剂不要淹没滤纸上起点线，在起点 线下1cm左右；起点线应与展开剂液面平行； 滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸 封闭。
注意事项
实验过程中手不要接触滤纸中部。 实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超 过3mm。 展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂 液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时 层析缸封闭。 分别计算丙氨酸和亮氨酸的Rf值 每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上。
Rf值是一个常数。故Rf值可作 为定性鉴定的依据。
实验仪器与试剂
仪器：
试剂：
层析缸 层析滤纸 直尺 铅笔 毛细管 电吹风
展开剂：
正丁醇:醋酸:乙醇:水 = 4:1:1:2 显色剂:
1%茚三酮丙酮溶液 样品:
丙氨酸(2%)乙醇溶液 丙氨酸(2%)和亮氨酸(2%)混合溶液
H
丙氨酸： H2N COOH
CH3
结果，分配比较大的物质移动速度较快 ，移动的距离较远；分配比较小的物质 移动速度慢，移动的距离较近。这样， 便把试样中各组分分开聚集在滤纸的不 同位置上。这种分离过程叫展开。因此 ，流动相溶剂又叫做展开剂。
当分离的物质是有色的，如甲基橙，层 析后在滤纸上可以直接看出它的色斑。 当分离的是无色的物质，如氨基酸，就 必须用显色剂使之显色。无色的氨基酸 可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三 酮就是显色剂。
注意：点的样直径不超过3mm， 动作要轻，点一个样风干后再 点另一个样。
AB
4、显色 用装有显色剂溶液的喷雾器，在滤纸已展开部分 均匀喷上茚三酮溶液，然后用电吹风吹干溶剂， 再用热风吹滤纸条，直至滤纸条上有紫红色斑点 出现。
O
2
O + H3N+ CHCOO- （-H3O+）
R
O
5、结果处理
OO
N
O O-