ESBLs与AmpC酶的检测及意义

ESBLs与AmpC酶的检测及意义
24
论着?
ChineseJournalofCurrelltPracticalMedicineOctober2008.Vl7.No10
ESBLs与AmpC酶的检测及意义
张益新
【摘要】目的对近年耐三代头孢的阴沟肠杆菌进行p一内酰酶(主要是ESBLs与AmpC酶)监测以进行流
行病学调查,同时作相关统计以指导实验室检测及临床用药.方法收集来自各种标本对三代头孢耐药的阴
沟肠杆菌33例,进行表型筛选试验及三维试验双重检测ESBLs与AmpC酶.结果表型筛选试验结果有24
株产ESBLs,占72.73%;三维试验结果有32株产ESBLs,占96.97%,两者符合率为71.88%(23/32).表型
筛选试验结果产AmpC酶10株,占30.30%;三维试验结果产AmpC酶8株,占24.24%,两者符合率为80.00%
(8/10).其中表型筛选试验结果两种酶均产的有1株,三维试验结果两种酶均产的有8株.结论对三代头孢
耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs,体外实验对亚胺培南敏感率为97.66%,对其它抗菌药物敏感性差.
【关键词】阴沟肠杆菌超广谱p一内酰酶(ESBLs)AmpC酶表型筛选三维试验Serveillanceonp-laetamaProducedbyEnterobacterCloacae.ZhangYixin.Departmentofh ematological,The
CentralHospitalofYiwu,Zhejiang,322000China.
[Abstract]ObjectiveToservei13-lactama(mainlytheextendedspectruml3一lactamaandAmpCenzyme1
producedbyenterobactercloacaeresistanttothethirdgenuscephalosporinsinordertoproces sepidemiologiical
investigation,andtoprovidelaboratoryandphysicianswiththestatisticalanalysisofantibiot icssusceptibility.
MethodsWecollected33strainsofenterobactercloacaeresistanttothethirdgenuscephalosp orinSfromallkinds
ofspecimens,thendetectESBLsandAmpCenzymewiththephenotypescreeningtestandthr ee-dimension
test.ResultsAmong33strainsofenterobactercloacae,therewere24strains(72.73%)and32s trains(96.97%) producingESBLsinphenotypescreeningtestandthree—dimensionaltestrespectively,andthecoincidencewas
71.88%.Buttherewere10strains(30.30%)and8strains(24.24%)producingtheAmpCenzy meinthetwotests
respectively,andtherewasacoincidenceof80.00%.Therewere1strainsproducingthetwoty pesofenzymesin
phenotypescreeningtest,but8strainsinthelattertest.ConclusionEnterobactercloacaeresist anttothethethird
genuscephalosporinsproducesESBLsmaily.Thereisasusceptibilityrateof97.66%toimipe nemforitinvitro,butit
iSlesssusceptivetootherantibiotics.
[Keywords]EnterobactercloacaeExtendedspectrum~-lactamaAmpCenzymePhenotype screeningtest
Three.dimensiontest
中图分类号:1t.969.3文献标识码:B文章编号:1726.619X(2oo8)10.0024.04
随着广谱抗菌药的广泛使用,多重耐药细菌感
染日益增多,已成为临床治疗细菌感染的一大难点.
自p一内酰胺类抗生素的应用于临床以来,细菌产p.
内酰酶种类也越来越多.革兰阴性菌的耐药问题主
要是由于产生了ESBLs与AmpC酶,这两种酶于20 世纪80年代相继有报道,随后产酶株的检出越来越【作者单位】:浙江省义乌市中心医院输血科(322000) 【作者简介】:张益新,女,27岁,检验师.
多,主要导致了耐药菌的交叉感染,成为严重的耐
药问题.
阴沟肠杆菌作为一种两类酶均能产生的细菌,
已倍受重视.阴沟肠杆菌是人体的条件致病菌,主
要存在于呼吸道与消化道,随着院内广谱抗菌药的
广泛应用及患者基础疾病的存在,免疫抑制剂,激
素类药物的使用导致患者免疫力低下而出现阴沟肠
杆菌的异位定植或引起茵群失调,出现的感染以长期,反复,多部位,多重耐药为特征且不易治愈,
中国现代实用医学杂志,2008年10月,第7卷,第10期这无疑升高了院内感染率.现国内外对阴沟肠杆菌
的研究甚多,从耐药性分析,检测方法及其比较,
到临床应用及对策都有报道.现ESBLs与AmpC酶
的检测方法已基本成熟,本研究通过对阴沟肠杆菌
产B-内酰胺酶(主要是ESBLs与AmpC酶)的监测,
了解临床上耐三代头孢的阴沟肠杆菌耐药的主要原
因及ESBLs与AmpC酶于此类耐药中出现频率,即
其流行情况,并同时统计这些耐药菌对其它抗生素
的耐药情况,现报道如下.
1材料
1.1菌株收集2006年1月~2007年2月我院来自
各种标本对三代头孢耐药的阴沟肠杆菌33例.大肠
埃希菌标准菌株ATCC25922一株.质控株为经VITEK确认产ESBLs的肺炎克雷伯菌一株.
1.2药敏纸片头孢他啶(CZA),头孢噻肟(CTX),
亚胺培南(IPM),氨苄青霉素/舒巴坦(AMS),头孢西
丁(FOX),头孢ⅡfB肟(FEP).
1.3其它生理盐水,克拉维酸粉剂,氯唑西林粉剂,
血平板,MH平板等.
2方法
本实验先采用纸片扩散法进行初筛,后用改良
的三维试验进一步确认,具体方法如下.
2.1表型筛选试验¨
2.1.1实验方法按照K-B法的要求,新分离的纯菌
种配成0.5McFarland密涂于MH琼脂平板(~=90mm) 上,两对角分别贴上CZA,CTX和IPM,AMS.CZA,
CTX与IPM间距25mm为佳,而与AMS间距20mm
为佳,35~C培养24h后,判断结果.
2.1.2结果判断(1)ESBLs阳性:CZA,CTX与AMS
之间协同受AMS影响侧抑菌环直径一不受AMS影
响侧2>5ram;(2)AmpC酶阳性:CZA,CTX与IPM
之间拮抗&受IPM影响侧抑菌环直径一不受影响侧>5ram;(3)ESBLs阳性+AmpC酶阳性(1)+(2);(4)
突变高产AmpC酶:三代头孢无抑菌圈而对IPM敏
感.
2.2改良三维实验
2.2.1粗提酶(冻融裂解法)新分离的纯菌种配成
0.5McFarland密涂于1/4MH琼脂平板(cl~=90mm)上, 35~C培养24h后用无菌棉签取下全部菌苔于1ml灭
菌生理盐水中(用】.5ml离心管),一80℃冻融数次,
培养无菌生长后4℃1O000r/min离心20min,取上清
液头孢硝噻吩纸片确定p一内酰胺酶存在后一20℃
保存待用.
2.2.2改良三维实验【J将大肠埃希菌标准株
ATCC25922配成0.5McFarland密涂于两块MH琼脂(qb=90mm)1Omin后于平板中央分别贴1片30ggFOX 纸片和一片30ggFEP纸片,距纸片5mm处纸片两边
分别垂直打两个lmm宽10mm长的槽,FOX纸片平
板的两槽内分别加酶粗提液+1Op.g/ml氯唑西林(9:1)25~40gl和酶粗提液25~40pl而FEP纸片平板
上的两槽内分别加酶粗提液25~40pl和酶粗提液+
l0~tg/ml克拉维酸(9:1)25~401.tl,35~C培养24h后判
断结果.
2.2.3结果判断(1)抑菌圈均完整光滑表示为阴性
结果,即两种酶均不产(如图1);(2)ESBLs阳性:加
酶粗提液的槽与FEP纸片交界处出现扩大生长而其它处抑菌圈完整光滑(如图2);(3)AmpC酶阳性:加
酶粗提液的槽与FOX纸片交界处出现扩大生长区而其它处抑菌圈完整光滑(如图2);(4)ESBLs+AmpC
酶:加酶粗提液的槽与FEP纸片和FOX纸片交界处
均有扩大生长区而其它处抑菌圈光滑完整(两个平板均如图2所示);(5)纸片与两槽交界处均出现扩大生
长区表示抑制酶的抗生素量不足或产ESBLs与AmpC酶之外的酶(如图3).
3结果
3.1表型筛选试验结果33株阴沟肠杆菌中表现为
单产ESBLs的有23株,占69.70%;表现为单产AmpC 酶的有1株,占3.03%;同时产两种酶的有l株,占
3.03%;而表现突变高产AmpC酶的有8株,占2
4.24%.
3.2三维试验结果33株阴沟肠杆菌中表现为单产ESBLs的有24株,占72.73%;没有单产AmpC酶;
表现为同时产两种酶的有8株,占24.24%;结果阴
性即不产这两种酶的有1株(头孢硝噻吩纸片确定13-
内酰胺酶试验阳性),占3.03%.
3.3两种方法结果比较33株阴沟肠杆菌表型筛选
试验结果ESBLs阳性共有24株,占72.73%;三维
试验结果ESBLs阳性的共有32株,占96.97%,两
者符合率为71.88.00%(23/32),其中一株表型筛选试
验结果产ESBLs而三维试验结果表现阴性即两类酶
均不产.
表型筛选试验结果33株阴沟巾AmpC酶阳性的
共有10株,占30.30%;三维试验结果AmpC酶阳
性的共有8株,占24.24%,两者符合率为80.00%
(s/10.
图1阴性结果图2阳性结果图3酶抑制物浓度不足或产另类酶,需重测
注:图1中上槽和2,3中左槽内加酶粗提液酶抑制剂;图1t}下槽和图2,3巾右槽内加酶粗提液.
3.4药敏统计结果统计本院检出阴沟肠杆菌有254
株,其中对三代头孢耐药的阴沟肠杆菌有171株,
占67.32%.这171株对三代头孢耐药的阴沟肠杆菌
耐药谱广泛,体外实验对亚胺培南敏感率为97.66%,
头孢替坦敏感率为27.49%,复方新诺明为22.81%,
其余氨基糖甙类,喹诺酮类等抗生索均高度耐药,
而对氨苄西林与头孢唑啉呈全部耐药.而本实验的
33株三代头孢耐药的阴沟肠杆菌的药敏情况,基本
与总的统计结果符合,这些阴沟肠杆菌体外实验对
亚胺培南敏感率为100.00%,而其他均呈现高度耐药
甚至全部耐药.
4讨论
ESBLs是一种丝氨酸蛋白酶,Bush分类属
Group2,而Ambler分类属ClassA,主要由质粒介导
少数由染色体介导,往往具有多重耐药性,常见于
肺克,大肠,阴沟等菌中.能灭活三代头孢菌素等p-
内酰类抗生素和氨曲南,不能水解头霉素类,能被
克拉维酸等酶抑制剂抑制,但不能被氯唑西林所抑制.VITEK对产ESBLs细菌检出率敏感性为99.5%, 特异性为100%【jJ.本研究表型筛选试验结果33株阴沟中产ESBLs24株,占72.73%;三维试验结果33
株阴沟肠杆菌中表现为产ESBLs32株,占96.97%,
两者符合率为71.88%(23/32),其中一株表型筛选试
验结果产ESBLs而三维试验结果表现阴性即两类酶均不产.
AmpC酶Bush分类属Groupl,而Ambler分类
属ClassC,主要由染色体介导少数由质粒介导,常
见于阴沟,产气肠杆菌等菌.AmpC酶能被I3一内酰
类抗生素诱导,属诱导酶,它不能被克拉维酸等酶
抑制剂抑制,但能被氯唑西林所抑制.本研究表型
筛选试验结果33株阴沟中产AmpC酶l0株,占
30.30%;三维试验结果33株阴沟肠杆菌中表现为产AmpC酶8株,占24.24%,两者符合率为80.00%(8/10) 与文献…89.58%较为相符.
本实验利用表型筛选和三维试验相结合,以取
长补短.表型筛选检测方便且快速,为NCCLS所推荐,此方法为检测ESBLs的可靠方法,但检测AmpC 酶结果易受多种因素影响,比如细菌本身对亚胺培
南的诱导的敏感性(有报道显示29.2%为组成性高产AmpC酶而64.2%为诱导性高产AmpC酶)等使结
果不易判读;而三维试验由ThornasonSander创立,
为公认的AmpC酶检测方法,虽操作繁琐费时但准
确度高,结果清晰易判读,是检测ESBLs和AmpC
酶的经典方法.根据实验结果显示我院对三代头孢
耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs,这与文阴沟肠
杆菌以产AmpC酶为主不符,可能存在地区差异.
我院对三代头孢耐药的阴沟肠杆菌占67.32%,
较文献阴沟肠杆菌对三代头孢耐药率为40%～
60%稍高.本实验对三代头孢耐药菌株进行了常规药敏结果统计示此类菌对亚胺培南敏感率为97.66%,
与1994~2001年中国ICUG耐药性监测研究发现对阴沟肠杆菌体外活性最好的是亚胺培南(95%)相符, 中国现代实用医学杂志,2008年10月,第7卷,第10期而头孢替坦敏感率为27.49%,复方新诺明为22.81%, 其余氨基糖甙类,喹诺酮类等抗生素均高度耐药,
无临床应用价值.一般三代头孢菌素应用越早,越
普遍的地区,细菌产ESBLs比例越高,ESBLs主
要由质粒介导,很容易在细菌间传递扩散,导致对
抗生素耐药细菌的广泛传播,及治疗选药的困难,
多资料显示治疗产两种p一内酰酶的细菌所引起的感染,应首选碳青霉烯类抗生素l,而产某一种的可
考虑应用复合制剂或联合用药等.实验室可注意分
离菌株的耐药情况对两种酶进行测定,同时对临床
加以指导从而避免滥用抗生素而出现高耐药的诱导产酶菌对临床治疗带来困难,通过合理用药而达到
疗效同时延缓昂贵广谱抗生素的应用,减轻患者经
济负担等,做到最大限度的节省人力,物力而达到
最有效的治疗,尽量避免多重耐药的发生.
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[收稿日期2008-08-25]
绝经后妇女长期补充雌三醇68例临床观察
刘静肖J
【摘要】由于人类寿命的延长,妇女在绝经后雌激素缺乏的情况下仍将继续生活20~30年,约占生命
过程的l/3,由于雌激素水平的下降,使脂肪,糖,蛋白质,骨代谢紊乱,从而使冠心病,老年性痴呆,骨
质疏松性骨折的发病率明显升高.为此,国内外学者广泛应用雌激素替代治疗,以缓解绝经期症状,提高绝
经后妇女的生活质量,取得了良好效果.
【关键词】绝经后妇女激素替代治疗有效性安全性
中图分类号:R711.51文献标识码:B文章编号:
本文对绝经后长期单纯补充雌三醇进行临床观
【作者单位】:江西省妇幼保健院(江西南昌330006)
察,对绝经后单纯补充雌三醇可使其骨代谢紊乩,
冠心病,乳腺癌,子宫内膜癌减少40%,本文显示
长期单纯性补充雌激素不会引起癌症.。