细胞因子检测

1.细胞增殖法
原理： 一些细胞因子可专一刺激某些细胞增殖，而且 细胞增殖的程度与这些细胞因子活性呈正相关。
如：IL-2 —— T细胞， IL-3 ——肥大细胞，IL-6 ——浆细胞。 这些只依赖某种细胞因子才能生长的细胞系称为 依赖细胞株。
如人IL-2对鼠T细胞有生长支持作用 一定数量鼠T细胞+ 每孔分别加不同剂量的IL-2
IL-6诱导肝细胞产生-抗用相关试验来检测 验干扰素含量。
血凝素生成抑制试验：
小鼠脑脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌A549细胞，该病毒 在生长过程中可产生血凝素，使人O型RBC凝集
试验管：A549细胞（已长好） 加一定量干扰素 培
养一定时间 加病毒
第十四章 细胞因子检测 P150
一.细胞因子检测应注意的问题
1.欲了解机体免疫功能，应检测多项细胞因子， 如细胞免疫应测IL-2、TFN-γ等
2.局部取标本：细胞因子由局部细胞产生，在 血液中浓度极低，最好取局部体液或细胞
3.动态检测比较，如疾病的复发期、缓解期、 恢复期
4.同一细胞因子选用多种方法联合检测，各种 方法检测结果不一定平衡
二.检测方法（P161）
生物学方法 免疫学方法 分子生物学方法
（一）生物学方法
原理：根据不同细胞因子生物学活性（功能) 不同而设计的方法
如IL-2可促进T淋巴细胞生长； TNF可杀肿瘤细胞； CSF可刺激造血细胞形成集落； IFN可保护细胞免受病毒攻击。
具体方法：
细胞增殖法 靶细胞杀伤法 诱导的产物分析法 细胞病变抑制法
利用细胞因子基因探针检测特定的细胞因子 mRNA表达的技术
常用方法：斑点杂交、逆转录PCR、 Northern blot、细胞或组织原位杂交等
试剂：核酸探针—— 一段用放射性同位素或 其他标记物（生物素、地高辛等）标记的一 段DNA片段，单链DNA、RNA片段，它可与 目的基因mRNA互补
此法灵敏、快速
生物学
免疫学
分子生 物学
三种方法优缺点比较
优点
缺点
敏感、测功能 长期培养依赖细胞株、费时
步骤烦琐、影响因素多
简单迅速
只检测量，不代表活性，敏感
重复好
度低（较生物学法低10~100倍）
敏感、快速 测基因表达情况，不能直接提
供浓度和活性
（数孔） 培养
根据鼠T细胞生长情况， 制作IL-2的标准曲线
2.靶细胞杀伤法
有的细胞因子能杀伤靶细胞（肿瘤细胞），利用同 位素释放法或染色法等可判定其杀伤率
3.细胞因子诱导的产物分析法
某些细胞因子可刺激特定的细胞产生生物活性物质， 通过测定其诱生产物来反映细胞因子活性
如IL-2、IL-3可诱导骨髓产生组胺；
培养 反复冻融 稀释
不同倍数 加O型血球
观察凝集情况
阳性对照加标准IFN；阴性对照不加IFN。
在IFN标准剂量曲线上查出IFN量
（二）免疫学检测法
细胞因子为蛋白质或多肽，具有较强的 免疫原性，可用其特异性抗体来进行检 测。
常用的检测方法是ELISA、流式细胞分 析法、酶联免疫斑点试验。
定量测定
（三）分子生物学方法